一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检验方法技术

本发明专利技术属于药物分析技术领域，具体涉及一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测方法，为解决盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法通过衍生试剂二乙胺进行柱前衍生化，衍生后生成N,N

【技术实现步骤摘要】
一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检验方法


[0001]本专利技术属于药物分析
，具体涉及一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测方法。

技术介绍

[0002]盐酸甲砜霉素甘氨酸酯是甲砜霉素的衍生物，是氯霉素的同类物，抗菌谱和抗菌作用与氯霉素相似，其水溶性好，当溶液的pH值增高或受到体内酶的作用后，迅速释放出甲砜霉素而发挥作用，盐酸甲砜霉素甘氨酸酯拓宽了甲砜霉素的临床应用，克服了其水溶性差的劣势。
[0003]氯甲酸乙酯，化学结构：，是盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的合成物料，可能残留在盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中，氯甲酸乙酯酰卤类基因毒性杂质，因此，在盐酸甲砜霉素甘氨酸酯生产过程中需要严格控制其含量，参考ICH M7毒理学阈值TTC =1.5
µ
g/day，盐酸甲砜霉素甘氨酸酯片中盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的最大日剂量为1g/day，用限度=TTC/最大日剂量的公式计算得到氯甲酸乙酯的限度为1.5ppm。
[0004]目前文献报道的氯甲酸乙酯的检测方法多为气相色谱法，本专利技术公开了采用GC
‑
MS/MS测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测方法，通过衍生试剂二乙胺进行柱前衍生化，衍生后生成N,N
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二乙基乙氧基甲酰胺，使用GC
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MS/MS方法进行检测，为解决盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的含量，从而有效保障用药安全，便于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量控制。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种采用GC
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MS/MS测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测方法，为解决盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检测问题，提供了一种便捷、高效、准确的检测方法，该方法能检测盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的含量，从而有效保障用药安全，便于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量控制，该方法便捷、高效、准确，在系统适用性、重复性、专属性、准确度方面完全符合中国药典方法验证的指导原则，可用于盐酸甲砜霉素甘氨酸酯的质量控制。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供如下技术方案：一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检验方法，所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液；（2）测定方法：采用GC
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MS/MS测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图；色谱条件如下:色谱柱：以6%氰丙基/苯基和94%聚二甲基硅氧烷为固定液的毛细
管柱，柱温：初始柱温为80℃，保持2min，以30℃/min的速率升温至140℃，保持1min，再以50℃/min的速率升温至220℃，保持7min；进样口温度：250℃，载气流速：2.0ml/min，分流比：1:1，载气：He，进样量：1μl，洗针液A：二氯甲烷，洗针液B：乙腈；质谱条件如下：离子源温度：230℃，气相色谱
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质谱接口温度：240℃，离子源电压：70eV，检测模式：MRM，增益因子：5，溶剂切除时间：0~3.5min，质量杆温度：150℃，MRM参数设置：
[0007]进一步的，所述空白溶液：取离心管，加入衍生剂、乙腈和ISTD溶液，混匀，再加入二氯甲烷，混匀，静置10min，取下层；所述ISTD溶液为：移取N
‑
亚硝基甲基乙基胺标准溶液适量至量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀；所述对照品溶液：取氯甲酸乙酯对照品适量置于量瓶中，加入乙腈稀释至刻度，摇匀，配制成浓度合适的对照品储备液；取离心管，加入衍生剂、对照品储备液和ISTD溶液，混匀，再加入二氯甲烷，混匀，静置10min，取下层；所述灵敏度溶液：取对照品储备液适量，置于量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，配制成浓度合适的灵敏度储备液；取离心管，加入衍生剂、灵敏度储备液和ISTD溶液，混匀，再加入二氯甲烷，混匀，静置10min，取下层；所述供试品溶液：取供试品适量，精密称定，置离心管中，加入衍生剂、乙腈和ISTD溶液，振摇至供试品完全溶解，再加入二氯甲烷，混匀，静置10min，取下层；所述色谱柱为Agilent DB
‑
624，30m
×
0.32mm，1.8
µ
m或效能相当的毛细管柱。
[0008]进一步的，本专利技术所述的测定方法，包括以下步骤：（1）配制溶液：稀释液：乙腈；衍生剂：移取10.0ml二乙胺至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀；ISTD溶液：移取NEMA标准溶液（1000
µ
g/ml）250
µ
l至10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度；再精密量取上述溶液500
µ
l，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀。（浓度：NEMA 125ng/ml）氯甲酸乙酯储备液：取氯甲酸乙酯对照品约50mg，精密称定，置25ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀；再精密量取上述溶液150
µ
l，置20ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀。（浓度：氯甲酸乙酯 15
µ
g/ml）对照品储备液：精密量取氯甲酸乙酯储备液500
µ
l，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至
刻度，摇匀。（浓度：氯甲酸乙酯 75ng/ml）灵敏度储备液：精密量取对照品储备液3.0ml，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀。（浓度：22.5ng/ml）空白溶液（加内标）：取15ml离心管，加入衍生剂1.0ml、乙腈1.0ml和ISTD溶液1.0ml，混匀，再加入二氯甲烷8.0ml，混匀，静置10min，取下层。（浓度：NEMA 12.5ng/ml）对照品溶液：取15ml离心管，加入衍生剂1.0ml、对照品储备液1.0ml和ISTD溶液1.0ml，混匀，再加入二氯甲烷8.0ml，混匀，静置10min，取下层。（浓度：氯甲酸乙酯7.5ng/ml ；NEMA 12.5ng/ml）灵敏度溶液：取15ml离心管，加入衍生剂1.0ml、灵敏度储备液1.0ml和ISTD溶液1.0ml，混匀，再加入二氯甲烷8.0ml，混匀，静置10min，取下层。（浓度：氯甲酸乙酯2.25ng/ml ；NEMA 12.5ng/ml）供试品溶液：取供试品约50mg，精密称定，置15ml离心管中，加入衍生剂1.0ml、乙腈1.0ml和ISTD溶液1.0ml，振摇至供试品完全溶解，再加入二氯甲烷8.0ml，混匀，静置10min，取下层。（浓度：盐酸甲砜霉素甘氨酸酯 5mg/ml；NEMA 12.5ng/ml）（2）测定方法：待系统稳定后，进空白溶液（加内标）1~3针，灵敏度溶液1针，对照品溶液6针，空白溶液（加内标）1针，供试品溶液1针，并记录谱图。
[0009]结果（ppm）= 其中：R
U
：供试品溶液图谱中氯甲酸乙酯衍生物峰面积与内标物峰面积的比值（RR）的测得值；本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的检验方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：（1）配制溶液，分别配制空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液；（2）测定方法：采用GC
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MS/MS测定盐酸甲砜霉素甘氨酸酯中氯甲酸乙酯的含量，待系统稳定后，分别进空白溶液、灵敏度溶液、对照品溶液和供试品溶液，记录色谱图；色谱条件如下：色谱柱：以6%氰丙基/苯基和94%聚二甲基硅氧烷为固定液的毛细管柱，柱温：初始柱温为80℃，保持2min，以30℃/min的速率升温至140℃，保持1min，再以50℃/min的速率升温至220℃，保持7min；进样口温度：250℃，载气流速：2.0ml/min，分流比：1:1，载气：He，进样量：1μl，洗针液A：二氯甲烷，洗针液B：乙腈；质谱条件如下：离子源温度：230℃，气相色谱
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质谱接口温度：240℃，离子源电压：70eV，检测模式：MRM，增益因子：5，溶剂切除时间：0~3.5min，质量杆温度：150℃，MRM参数设置：。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：张敏，李达胜，汤伟彬，蔡强，兰柳琴，
申请(专利权)人：润都制药荆门有限公司，
类型：发明
国别省市：