本发明专利技术涉及一种用于激活NK细胞的经基因改造的细胞。根据一方面的用于激活NK细胞的经基因改造的细胞可以从样品中协同诱导NK细胞的增殖和激活，因此能够有效地使用增殖NK细胞的方法或由此方法增殖的NK细胞用于抗体治疗等。等。等。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】immune cells)的血液样品；以及使所述NK细胞群的至少一部分与用于激活NK细胞的经基因改造的细胞接触，其中，所述经基因改造的细胞经基因改造以表达膜结合白细胞介素
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18(membrane bound interleukin
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18：mbIL
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18)、膜结合白细胞介素
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21(membrane bound interleukin
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21：mbIL
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21)和/或OX40L。技术方案
[0009]一方面提供一种细胞株，其经基因改造以表达膜结合白细胞介素
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18(membrane bound interleukin
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18：mbIL
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18)、膜结合白细胞介素
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21(membrane bound interleukin
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21：mbIL
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21)和/或OX40L。在一具体实施例中，所述细胞株经基因改造以表达膜结合白细胞介素
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18(membrane bound interleukin
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18：mbIL
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18)、膜结合白细胞介素
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21(membrane bound interleukin
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21：mbIL
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21)以及OX40L。
[0010]所述细胞株可用作仅选择性增幅NK细胞的饲养细胞。一般而言，作为用于NK细胞增殖的具有代表性的饲养细胞的K562细胞株，其仅用于NK细胞的增殖，因此K562细胞株本身不应增殖。因此，在与NK细胞一起培养之前，通过进行对所述K562细胞株照射强放射线(例如，50Gy至100Gy)的预处理，使所述K562细胞株本身完全不增殖，而仅有助于NK细胞的增殖。一方面，为了NK细胞的有效增殖，大多数细胞因子如IL
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2和IL
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15必须持续露出于NK细胞。因此，当进行基因改造在基于癌细胞株的饲养细胞中以表达细胞因子如IL
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2和/或IL
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15时，经放射线照射等预处理的癌细胞株在培养过程中不能长期存活，存在NK细胞的选择性增殖效率降低的问题。在一实施例中，当NK细胞在K562
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OX40L存在下短期露出于IL
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18或IL
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21时，细胞增幅效果直到第21天也没有出现，但当同时露出于IL
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18和IL
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21时，确认细胞增幅效果造在28天后出现。因此，在IL
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18和IL
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21的情况下，尽管在培养开始日只有一次露出和短期露出，但对NK细胞的增殖有效果。换言之，在根据一方面的经基因改造以表达mbIL
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18和mbIL
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21的饲养细胞株中，尽管IL
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18和IL
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21的短期表达，NK细胞增殖的效率并未降低，而仅NK细胞可以被选择性增幅。
[0011][0012]在本说明书中使用的术语“饲养细胞(feeder cells，也称为支持细胞)”可以指通过产生各种代谢物来帮助靶NK细胞增殖的细胞，因为这些细胞尽管没有通过照射放射线而分裂和增殖的能力，但具有代谢活性。在本说明书中可以使用的饲养细胞是导入了基因的动物细胞株(cell line)，其可以是人慢性骨髓性白血病细胞株(例如，K562细胞)、RPMI8866、EBV_LCL、721.221、HFWT、和NK
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92等。
[0013]在本说明书中使用的术语“经基因工程(genetic engineering)”或“基因改造的(genetically engineered)”是指将至少一种基因修饰(genetic modification)导入细胞的行为或由此产生的细胞。
[0014]具体地，所述经基因改造的细胞可以包括编码上述基因的外源性基因(exogenous gene)。术语“外源性(exogenous)”是指将参考分子(referenced molecule)或参考活性(referenced activity)导入宿主细胞中。分子可以被插入宿主染色体，例如，作为导入宿主基因物质的编码核酸(encoding nucleic acid)，或作为非染色体基因物质如质粒。关于编码核酸的表达，所述术语“外源性”表示所述编码核酸以可表达的形式导入在个体内。关于生物合成活性，所述术语“外源性”是指导入宿主母细胞的活性。生物合成活性的来源(source)可以是例如同源性(homologous)或异源性(heterologous)编码核酸，其在被导入
在宿主母细胞后表达参考活性。因此，术语“内源性(endogenous)”是指在所述宿主细胞中存在的参考分子或活性。类似地，关于编码核酸的表达，术语“内源性”是指包括在个体中的编码核酸的表达。术语“异源性(heterologous)”是指来自不同于所提及物种的来源的分子或活性，而术语“同源性(homologous)”是指来自宿主母细胞的分子或活性。因此，编码核酸的外源性表达可以利用异源性(heterologous)或同源性(homologous)编码核酸中的任何一种或两种。
[0015]因此，所述细胞可以包括编码mbIL
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18、mbIL
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21和/或OX40L的核酸。更具体地，所述细胞可以是由包括编码mbIL
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18、mbIL
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21和/或OX40L的核酸的载体转化的。
[0016]在本说明书中使用的“载体”是指能够在合适的宿主细胞中表达靶蛋白的载体，其并且是指包括可操作地连接以表达基因插入物的调节元素的基因建体。根据一实施例的载体可以包括用于表达的调节元素，例如，启动子、操纵子、起始密码子、终止密码子、加尾信号和/或增强子，并且载体的启动子可以是组成型的或诱导型的。此外，所述载体可以是能够在宿主细胞中稳定表达所述融合蛋白的用于表达的载体。所述用于表达的载体可以是通常在相关领域中用于在植物、动物或微生物中表达外源蛋白的。可以使用本领域已知的各种方法构建所述重组载体。例如，所述载体可以包括用于选择含有载体的宿主细胞的选择标记，并且在可复制的载体的情况下，其可以包括复制来源。此外，载体可以自我复制或导入宿主DNA，所述载体可以是选自由质粒、慢病毒、腺病毒、腺相关病毒、逆转录病毒、单纯疱疹病毒和牛痘病毒组成的组中。
[0017]此外，在所述载体中，编码上述融合蛋白的多核苷酸序列可以与启动子可操作地连接。在本说明书中使用的术语“可操作地连接”是指用于核酸表达调控序列(例如，启动子、信号序列或转录因子的结合位点阵列)与另一核酸序列之间的功能结合，从而所述表达调控序列调控所述另一核酸序列的转录和/或翻译。
[0018]在本说明书中，本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种饲养细胞，其用于培养NK细胞，且经基因改造以表达膜结合白细胞介素
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18、膜结合白细胞介素
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21以及OX40L。2.根据权利要求1所述的饲养细胞，其中，所述饲养细胞选自由K562、RPMI8866、EBV_LCL、721.221、HFWT以及NK
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92细胞组成的组中。3.根据权利要求1所述的饲养细胞，其包括膜结合白细胞介素
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21和编码膜结合白细胞介素
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21的核酸。4.一种用于培养NK细胞的组合物，其包括根据权利要求1至3中任一项所述的饲养细胞。5.一种增殖NK细胞的方法，包括：收获含有NK细胞群的血液样品；以及使混合的NK细胞群的至少一部分与用于激活NK细胞的经基因改造的细胞接触，其中，所述经基因改造的细胞经基因改造以表达膜结合白细胞介素
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18、膜结合白细胞介素
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21和OX40L。6.根据权利要求5所述的方法，其中，所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵德，都埈磉，潘氏明庄，金珍镐，
申请(专利权)人：首尔大学校产学协力团，
类型：发明
国别省市：
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