一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法技术

本发明专利技术公开了一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法，包含以下步骤：将激化剂与活化因子包被至培养瓶内得到激化活化因子；通过密度梯度离心法将人外周血液内的单个核细胞分离出；在激化活化因子包被的培养瓶中添加活化培养基，再将提取的单个核细胞按照2*106/ml的浓度接种于包被有激化活化因子的培养瓶中；观察细胞生长状态及培养基颜色变化情况，培养3

【技术实现步骤摘要】
一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法


[0001]本专利技术涉及细胞扩增
，具体涉及一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法。

技术介绍

[0002]目前，恶性肿瘤已经成为中国人的头号杀手，中国卫生部2008年发布的第三次全国死因调查显示，中国城乡居民的癌症死亡率在过去30年中增长了80％以上，每4位死亡人数中就有1位死于癌症，中国每年新增肿瘤患者200万，因患肿瘤死亡的人数超过150万，2000年,美国“国际肿瘤生物/免疫治疗及基因治疗”年会总结报告中指出：“生物治疗是目前知道的唯一一种有望完全消灭癌细胞的治疗手段，21世纪是肿瘤生物治疗的时代”，以常规治疗(手术、放疗、化疗)辅以肿瘤生物/免疫治疗的综合疗法，将成为人类征服癌症的主要途径；
[0003]为了提高恶性肿瘤患者的生存率，最具有挑战性的工作是如何在临床上使用合适的综合治疗方案，扩大获益患者人群，维持治疗效果，控制肿瘤的进展速度，免疫细胞治疗作为肿瘤的辅助治疗已经越来越多的参与到临床综合治疗中，自然杀伤(naturalkillercell，NK)细胞是先天性免疫系统的重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法，其特征在于，包含以下步骤：步骤1：将激化剂与活化因子包被至培养瓶内，保持4度的温度静置，得到激化活化因子；步骤2：通过密度梯度离心法将人外周血液内的单个核细胞分离出；步骤3：在步骤1所述激化活化因子包被的培养瓶中添加活化培养基，再将步骤2提取的所述单个核细胞按照2*106/ml的浓度接种于包被有所述激化活化因子的培养瓶中；步骤4：第二天观察细胞生长状态及培养基颜色变化情况，培养3
‑
4天，将步骤3所述接种于装有包被激活活化因子的细胞转移至空白培养瓶中，并按照1:1的体积比添加扩增培养基A继续培养；步骤5：培养至5
‑
6天，按照1:1的体积比添加扩增培养基B继续培养；步骤6：培养至7
‑
8天，将步骤5所得的细胞转移至培养袋中，按照1:1的体积比添加扩增培养基C继续培养，以后，每间隔2
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3天，按照1:1的体积比添加扩增培养基C；步骤7：待培养至15
‑
16天后，收集上述培养袋中激化活化、扩增的NK免疫细胞。2.如权利要求1所述的一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法，其特征在于，步骤1中的激化剂与活化因子需提前一天包被至培养瓶内，保持4度的温度静置12个小时；所述激活剂为肝素钠、人血白蛋白和重组抗人CD16单克隆抗体的混合溶液。3.如权利要求2所述的一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法，其特征在于，所述肝素钠500U/ml,所述重组抗人CD16单克隆抗体2ug/ml,混合溶液为5ml，使用5ml混合溶液进行培养瓶瓶包被。4.如权利要求1所述的一种体外高效活化、扩增NK免疫细胞方法，其特征在于，步骤3中所述活化培养基为空白培养基TAKARA GT
‑
T551；所述空白培养基TAKARA GT
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T551含有CpG
‑
ODN寡聚脱氧核苷酸、重组抗人CD137单克隆抗体、IL
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2、IL
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12和IL
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15的无血清培养基；其中所述CpG
‑
ODN寡聚脱氧核苷酸6ug/ml,所述重组抗人CD137单克...

【专利技术属性】
技术研发人员：任涛，王俊，
申请(专利权)人：王俊，
类型：发明
国别省市：