用于治疗神经退行性疾病的组合物和方法技术

本发明专利技术涉及靶向ataxin

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗神经退行性疾病的组合物和方法
[0001]关于序列表的声明
[0002]与本申请相关的序列表以文本格式代替纸质副本提供，并在此通过引用并入本说明书中。含有序列表的文本文件的名称是630264_401WO_SEQUENCE_LISTING_ST25.txt。所述文本文件为651KB，创建于2021年2月4日，并通过EFS
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Web以电子方式提交。

技术介绍

[0003]Ataxin
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2(ATXN2)蛋白是一种细胞质蛋白，是应激颗粒的组成部分。应激颗粒被认为是由蛋白质翻译终止诱导的瞬时亚细胞区室，并且包含许多已知在患有神经退行性疾病的受试者中发生突变的蛋白质(Brown和Al
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Chalabi,《新英格兰医学杂志(N Engl J Med)》(2017)377:162
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172)。Ataxin
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2含有谷氨酰胺残基的序列，所述序列称为多聚谷氨酰胺重复序列，在正常个体中其长度为约22个氨基酸。在患有神经退行性疾病脊髓小脑共济失调
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2(SCA2)的个体中发现了这种多聚谷氨酰胺重复序列扩展到34或更长的长度。此疾病的特征在于小脑中的浦肯野神经元(Purkinje neuron)和其它神经元细胞类型的进行性死亡。患有脊髓小脑共济失调
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2的患者出现共济失调、感觉问题和其它临床特征，所述特征会随着时间的推移而恶化。据报道，与正常受试者相比，患有运动神经元疾病肌萎缩性侧索硬化症(ALS)的个体中Ataxin
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2多聚谷氨酰胺重复序列的中度扩展的频率显著升高，所述重复序列比在大多数个体中观察到的要长，但比在脊髓小脑共济失调
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2受试者中通常观察到的(例如，介于27与33个谷氨酰胺残基之间)要短(Elden等人,《自然(Nature)》(2010)466:7310)。这表明这些中等长度，即介于正常个体中发现的多聚谷氨酰胺重复序列与脊髓小脑共济失调
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2患者中发现的多聚谷氨酰胺重复序列之间的多聚谷氨酰胺重复序列会增加ALS的风险。目前，SCA2和ALS的治疗选择有限。

技术实现思路

[0004]本公开的方面涉及用于调节与脊髓小脑共济失调
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2(SCA2)、肌萎缩性侧索硬化症(ALS)和与TDP
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43蛋白病相关的病状相关的基因的表达的组合物和方法。具体地，提供了可用于抑制ataxin 2(ATXN2)的表达或活性的抑制性核酸。例如，提供了靶向ATXN2的一种或多种同种型，例如ATXN2同种型的子集或所有ATXN2同种型的抑制性核酸。
[0005]一方面，本公开提供了一种分离的核酸分子，所述分离的核酸分子包括编码抑制ATXN2的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述抑制性核酸包括向导链序列，所述向导链序列包括以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、
268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404、406、408、410、412、414、416、418、420、422、424、426、428、430、432、434、436、1176
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1288、1811
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1827、2015、2065、2083、2152、2203和2209。
[0006]在一些实施方式中，所述抑制性核酸是siRNA双链体、shRNA、miRNA或dsRNA。
[0007]在一些实施方式中，所述抑制性核酸进一步包括过客链序列，任选地其中所述过客链序列选自表1、19、23和24或选自表1、19、23和24并且具有1个到10个插入、缺失、取代、错配、摆动或其任何组合的过客链序列。
[0008]在一些实施方式中，所述抑制性核酸是人工miRNA，其中所述向导链序列包含在miRNA骨架序列内。
[0009]在一些实施方式中，所述人工miRNA的所述向导链序列和所述过客链序列包含在miRNA骨架序列内。在一些实施方式中，所述miRNA骨架序列是miR
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223骨架序列。
[本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离的核酸，其包括编码抑制ATXN2的表达或活性的抑制性核酸的表达构建体，其中所述抑制性核酸包括向导链序列，所述向导链序列包括以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116、118、120、124、126、128、130、132、134、136、138、140、142、144、146、148、150、152、154、156、158、160、162、164、166、168、170、172、174、176、178、180、182、184、186、188、190、192、194、196、198、200、202、204、206、208、210、212、214、216、218、220、222、224、226、228、230、232、234、236、238、240、242、244、246、248、250、252、254、256、258、260、262、264、266、268、270、272、274、276、278、280、282、284、286、288、290、292、294、296、298、300、302、304、306、308、310、312、314、316、318、320、324、326、328、330、332、334、336、338、340、342、344、346、348、350、352、354、356、358、360、362、364、366、368、370、372、374、376、378、380、382、384、386、388、390、392、394、396、398、400、402、404、406、408、410、412、414、416、418、420、422、424、426、428、430、432、434、436、1176
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1288、1811
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1827、2015、2065、2083、2152、2203和2209。2.根据权利要求1所述的分离的核酸分子，其中所述向导链序列包括：(a)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:12、14、40、60、100、104、108、112、124、126、128、166、198、220、242、302、306、308、330、336和362；(b)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:14、40、100、108、112、128、166、198、242、308、336和362；(c)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:1908
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2007；或(d)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:100、112、166、202、246、306、308、314、1180、1185、1196、1200、1211、1213、1215、1216、1224、1811
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1822、1824
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1827、2015、2065、2083、2152、2203和2209；(e)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:1185、1816、1213、1819、2083、1215、1216、1811和314；或(f)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:1185、1816、1213和1811。3.根据权利要求1或2所述的分离的核酸分子，其中所述抑制性核酸是siRNA双链体、shRNA、miRNA或dsRNA。4.根据权利要求1至3中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抑制性核酸进一步包括过客链序列，任选地其中所述过客链序列选自表1、19、23和24或选自表1、19、23和24并且具有1个到10个插入、缺失、取代、错配、摆动或其任何组合的过客链序列。5.根据权利要求1至4中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抑制性核酸是人工miRNA，其中所述向导链序列包含在miRNA骨架序列内。6.根据权利要求5所述的分离的核酸分子，其中所述人工miRNA的所述向导链序列和所述过客链序列包含在miRNA骨架序列内。7.根据权利要求5或6所述的分离的核酸分子，其中所述miRNA骨架序列是miR
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124骨架序列、miR
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2骨架序列、miR
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122骨架序列、miR
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2骨架序列、miR
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128骨架序列、miR
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144骨架序列、miR
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451a骨架序列或miR
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223骨架序列。8.根据权利要求6或7所述的分离的核酸分子，其中所述miRNA骨架序列是miR
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155E骨架序列、miR
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223骨架序列。9.根据权利要求6至8中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述miRNA骨架序列是miR1
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1骨架序列、miR
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132骨架序列、miR
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2骨架序列、miR
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155E骨架序列、miR
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155M骨架序列、miR
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190a_M骨架序列或miR
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190a_M骨架序列。10.根据权利要求6至9中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述miRNA骨架序列是miR
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100骨架序列或miR
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100_M骨架序列。11.根据权利要求1至10中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述抑制性核酸是包括以下中的任一个中所示的核酸序列的miRNA：SEQ ID NO:443
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490、1109
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1111、1114、1121
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1168、1405
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1520、1908
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2007、2011、2017、2021、2025、2027、2031、2035、2039、2041、2045、2049、2053、2057、2061、2067、2071、2075、2079、2085、2089、2093、2097、2101、2105、2109、2113、2117、2120、2124、2128、2132、2136、2140、2144、2148、2154、2158、2162、2166、2170、2174、2176、2180、2182、2184、2187、2189、2191、2193、2195、2197、2199、2205、2211、2261、2263、2265和2267。12.根据权利要求11所述的分离的核酸分子，其中所述抑制性核酸是包括以下的miRNA：(a)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:1908
‑
2007；(b)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:1908
‑
1934、1936
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1977、1979
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1982、1984
‑
1994、1997、1998、2000，2001、2005
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2007、2011、2017、2021、2025、2027、2031、2035、2039、2041、2045、2049、2053、2057、2061、2067、2071、2075、2079、2085、2089、2093、2097、2101、2105、2109、2113、2117、2120、2124、2128、2132、2136、2140、2144、2148、2154、2158、2162、2166、2170、2174、2176、2180、2182、2184、2187、2189、2191、2193、2195、2197、2199、2205、2211、2261、2263、2265和2267；(c)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:1915、1982、1965、1937、1985、1921和2021；或(d)以下中的任一个中所示的核酸序列：SEQ ID NO:1915、1965、1982和2021。13.根据权利要求1至12中任一项所述的分离的核酸分子，其中编码所述抑制性核酸的所述核酸序列位于所述表达构建体的非翻译区中。14.根据权利要求13所述的分离的核酸分子，其中所述非翻译区是内含子、5'非翻译区(5'UTR)或3'非翻译区(3'UTR)。15.根据权利要求1至14中任一项所述的分离的核酸分子，其进一步包括启动子，所述
启动子与编码所述抑制性核酸的所述核酸序列可操作地连接。16.根据权利要求15所述的分离的核酸分子，其中所述启动子是RNA pol III启动子(例如，U6、H1等)、鸡
‑
β肌动蛋白(CBA)启动子、CAG启动子、H1启动子、CD68启动子、人突触蛋白启动子或JeT启动子。17.根据权利要求15或16所述的分离的核酸分子，其中所述启动子是H1启动子，所述H1启动子包括SEQ ID NO:1522的核苷酸113
‑
203、SEQ ID NO:1521的核苷酸1798
‑
1888、SEQ ID NO:2257的核苷酸244
‑
343或SEQ ID NO:2257的核苷酸113
‑
343。18.根据权利要求1至17中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述表达构建体侧接5'腺相关病毒(AAV)反向末端重复(ITR)序列和3'AAV ITR序列或其变体。19.根据权利要求18所述的分离的核酸分子，其中所述ITR序列之一缺少功能性末端解链位点。20.根据权利要求13或14所述的分离的核酸分子，其中所述5'和3'ITR源自AAV血清型，所述AAV血清型选自由以下组成的组：AAV1、AAV2、AAV5、AAV6、AAV6.2、AAV7、AAV8、AAV9、AAVRh10、AAV11以及其变体。21.根据权利要求18至20中任一项所述的分离的核酸分子，其中所述5'ITR包括SEQ ID NO:2257的核苷酸1
‑
106，并且所述3'ITR包括SEQ ID NO:2257的核苷酸2192
‑
2358。22.一种载体，其包括根据权利要求1至21中任一项所述的分离的核酸分子。23.根据权利要求16所述的载体，其中所述载体是质粒或病毒载体。24.根据权利要求23所述的载体，其中所述病毒载体是重组腺相关病毒(rAAV)载体或杆状病毒载体。25.根据权利要求24所述的载体，其中所述载体是自互补的rAAV载体。26.根据权利要求22至25中任一项所述的载体，其进一步包括填充序列。27.根据权利要求26所述的载体，其中所述填充序列包括SEQ ID NO:1522的核苷酸348
‑
2228或SEQ ID NO:2257的核苷酸489
‑
2185。28.根据权利要求22至27中任一项所述的载体，其包括SEQ ID NO:2257
‑
2260中的任一个的核苷酸序列。29.一种重组腺相关(rAAV)颗粒，其包括根据权利要求1至21中任一项所述的分离的核酸分子或根据权利要求22至28所述的载体。30.根据权利要求29所述的rAAV颗粒，其中所述rAAV颗粒包括衣壳蛋白。31.根据权利要求30所述的rAAV颗粒，其中所述衣壳蛋白能够穿过血脑屏障。32.根据权利要求30或31所述的rAAV颗粒，其中所述衣壳蛋白是AAV9衣壳蛋白或AAVrh.10衣壳蛋白。33.根据权利要求29至32中任一项所述的rAAV颗粒，其中所述rAAV颗粒转导中枢神经系统(CNS)的神经元细胞和/或非神经元细胞。34.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至21中任一项所述的分离的核酸分子、根据权利要求22至28中任一项所述的载体或根据权利要求29至33中任一项所述的rAAV颗粒，以及任选地药学上可接受的载体。35.一种宿主细胞，其包括根据权利要求1至21中任一项所述的分离的核酸分子、根据权利要求22至28中任一项所述的载体或根据权利要求29至33中任一项所述的rAAV颗粒。
36.一种用于治疗患有或疑似患有神经退行性疾病的受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据权利要求1至21中任一项所述的分离的核酸分子、根据权利要求22至28中任一项所述的载体、根据权利要求29至33中任一项所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：C，
申请(专利权)人：梅兹治疗公司，
类型：发明
国别省市：