用于治疗疾病的反义寡聚体制造技术

一种分离或纯化的反义寡聚体，用于修饰血管紧张素转换酶2(ACE2)中的前mRNA剪接，以调节ACE2基因转录物或其部分的剪接，所述分离或纯化的反义寡聚体具有修饰的主链结构；以及与此类反义寡聚体具有至少75％序列同一性且具有修饰的主链结构的序列。有修饰的主链结构的序列。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗疾病的反义寡聚体
专利

[0001]本专利技术涉及用于调节编码血管紧张素转换酶2(ACE2)或其部分的前mRNA的剪接的方法，所述方法使用剪接转换反义寡核苷酸(AON)来诱导新的编码可溶性ACE2同工型(isoform)的ACE2剪接变体产生，以及本专利技术涉及使用所述调节剂(modulators)治疗ACE2相关疾病的方法。

技术介绍

[0002]血管紧张素转化酶2(ACE2；EC3.4.17.23)是属于外肽酶超家族的92
‑
kDA 1型整合膜糖蛋白。ACE2在大多数组织中表达且是有活性的。
[0003]人ACE2基因存在于人X染色体的Xp22.2区域中。它包含18个外显子和17个内含子，以及一个调节其转录的5'侧翼区域。
[0004]人ACE2蛋白包含球状胞外结构域(残基18
‑
740)、单次跨膜结构域(残基741
‑
761)和短胞质尾(残基762
‑
805)。ACE2在Asn53、Asn90、Asn103、Asn322、Asn432、Asn546和Asn690处是N
‑
糖基化的。
[0005]严重急性呼吸综合征相关的冠状病毒(包括SARS
‑
CoV和SARS
‑
CoV
‑
2)、HNL63
‑
CoV(NL63
‑
S)和SARS样WIV1
‑
CoV，在独特的且离开ACE2深陷的催化结构域的位点处结合ACE2的胞外结构域。SARS
‑
CoV
‑
2对ACE2的亲和力似乎高于包括SARS
‑
CoV在内的其他CoV，这可能对其在人类中的更高的传播性有贡献。
[0006]ACE2的胞外结构域包含单个金属肽酶结构域，其作为末端羧肽酶起作用，例如，从Ang II(1
‑
8)切割C末端苯丙氨酸以产生Ang(1
‑
7)。ACE2的遗传缺失导致Ang II水平升高，而Ang
‑
(1
‑
7)水平降低。因此，认为ACE2是肾素
‑
血管紧张素
‑
醛固酮系统(RAAS)中的关键调节酶。
[0007]RAAS是涉及许多常见疾病和疾病过程的发生和进展的稳态途径。广泛使用血管紧张素转换酶(ACE)抑制剂或血管紧张素II受体1型(AT1R)阻滞剂(抑制剂)抑制RAAS治疗许多疾病和/或病症，包括高血压、心血管疾病(CVD)、心脏衰竭、慢性肾病(CKD)和糖尿病并发症。也已显示RAAS抑制在预防糖尿病、神经保护、改变某些癌症的生长甚至衰老方面具有益处，AT1R的遗传缺失(geneticdeletion)赋予小鼠长寿。已知RAAS的激活是动脉粥样硬化、慢性心脏病、慢性肾病、高血压、肺病和冠状病毒感染的重要介质。
[0008]ACE2的C端并入了残基614
‑
805，覆盖了ACE2的非催化性细胞外、跨膜和细胞内结构域，显示出与集合管蛋白(collectrin)47.8％的序列同一性，所述集合管蛋白是一种没有酶活性的蛋白质，其参与囊泡运输和膜融合过程。因此，认为ACE2是一种融合蛋白，其中19
‑
613位是ACE样的，且614
‑
805位是集合管蛋白样的。
[0009]ACE2的胞质尾还含有整联蛋白和钙调蛋白(calmodulin)结合位点。该胞质结构域充当大氨基酸转运蛋白B(O)AT1的转运衔接头(trafficking adaptor)，将其转移到肠道上皮细胞的顶膜。将冠状病毒摄入细胞也依赖于由ACE2的胞质尾介导的内化。
[0010]大多数ACE2是膜锚定的。但是，在脱落酶(sheddase)的影响下，可以发生胞外结构
域的组成型和诱导型自膜脱落。由脱落产生的低水平C端截短的ACE2同工型天然存在于血液、尿液、支气管肺泡液和唾液中。ACE2的这种可溶性同工型缺乏膜锚和胞质尾。
[0011]ACE2与肺病的发生和进展有关。Ace2 KO小鼠显示出对各种肺病模型应答的肺损伤增强，并且可以通过重新引入ACE2来挽救损伤表型。特别地，在缺乏ACE2的情况下，急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的病理学被放大，而肺ACE2的下降预示着不良的临床结果。重组可溶性ACE2在急性和慢性肺损伤的实验模型中具有有益作用，并且已经在ARDS患者的临床试验中进行了研究。
[0012]ACE2在动脉粥样硬化斑块发展中起重要作用。我们之前已经表明，Ace2的遗传缺陷与斑块积聚增加有关，与血管紧张素II输注后观察到的相当。在已形成的动脉粥样硬化斑块和在促动脉粥样硬化状态(如糖尿病)中，ACE2的表达降低。增加循环的可溶性ACE2的方法减少该模型中的动脉粥样硬化。
[0013]已知RAAS的激活是高血压的关键介质，阻断RAAS激活的干预措施是所有降血压剂中最广泛使用的。这些药物的抗高血压功效部分是由它们降低Ang II或其信号传导的能力介导的。然而，常规RAS阻断的抗高血压作用也部分取决于ACE抑制剂和血管紧张素受体阻滞剂(ARB)增加循环Ang(1
‑
7)水平的能力。鉴于血管系统中Ang(1
‑
7)的主要来源是ACE2，该数据表明ACE2不仅影响高血压的发展，而且潜在地影响对高血压治疗的反应。ACE2和RAAS也与中枢性高血压的发病机制有关。在自发性高血压大鼠中，延髓头端腹外侧区(rostral ventrolateral medulla，RVLM)中ACE2的表达降低，而RVLM中ACE2的持续过量表达导致高血压显著减弱。
[0014]在心脏中，ACE2代表Ang II代谢的主要途径。小鼠ACE2缺陷导致早期心脏肥大并加速心肌梗死后不良心室重构。在一些模型中，ACE2缺陷也导致随着年龄增长和/或心脏压力超负荷所致的进行性心脏纤维化。又，在用重组ACE2、ACE抑制剂或AT1R阻滞剂治疗后，这些变化被逆转，这表明心脏中RAAS的平衡是进行性心脏病的重要驱动因素。
[0015]在糖尿病肾和其他与肾损伤和激活相关的状态中，ACE2起着重要作用，因为ACE2缺陷小鼠加速了肾损伤。通过增加循环的可溶性ACE2的专利技术减少实验性糖尿病的肾损伤
[0016]RAAS还具有许多代谢功能。ACE2缺陷与胰岛素抵抗和葡萄糖稳态受损有关，在高脂肪饮食下加剧这种情况。ACE2缺陷与骨骼肌和肝脏中脂质积累的增加有关。
[0017]正是在此背景下，描述了使用跳读外显子的AON(exon
‑
skipping AON)来调节ACE2剪接的本方法，以相对于全长ACE2优选地产生可溶性ACE2。
[0018]对
技术介绍
的上述讨论仅旨在促进对本专利技术的理解。该讨论不是认可或承认所提及的任何材料在本申请的优先权日是或曾经是公知常识的一部分。
[0019]专利技术概本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种分离或纯化的反义寡聚体，用于修饰血管紧张素转换酶2(ACE2)中的前mRNA剪接，以调节ACE2基因转录物或其部分的剪接，所述分离或纯化的反义寡聚体具有修饰的主链结构；以及与此类反义寡聚体具有至少75％序列同一性且具有修饰的主链结构的序列。2.根据权利要求1所述的反义寡聚体，其选自包含以下所列序列：a)SEQ ID NO:1
‑
31；和/或b)SEQ ID NO:5、6、9或11；和/或c)表3。3.根据权利要求1所述的反义寡聚体，其中所述反义寡聚体含有一个或多个核苷酸位置，所述核苷酸位置受到选自包含下列的备选化学或修饰：(i)修饰的糖部分；(ii)对RNaseH的抗性；和/或(iii)寡聚模拟化学。4.根据权利要求1所述的反义寡聚体，其中所述反义寡聚体通过(i)化学缀合至部分；和/或(ii)用细胞穿透肽标记进一步修饰。5.根据权利要求1所述的反义寡聚体，其中如果反义寡聚体中存在尿嘧啶，则用胸腺嘧啶(T)替换反义寡聚体的尿嘧啶(U)。6.根据权利要求1所述的反义寡聚体，其中前mRNA剪接的修饰导致ACE2前mRNA的一个或多个外显子序列的跳读。7.一种药物组合物、预防组合物、防止组合物或治疗组合物，用于治疗、预防或改善受试者中与ACE2表达相关的疾病的影响，所述组合物包含：a)根据权利要求1至6中任一项所述的一种或多种反义寡聚体，和b)一种或多种可药用载体和/或稀释剂。8.在ACE2基因转录物中操纵剪接的方法，所述方法包括以下步骤：a)提供一种或多种根据权利要求1至6中任一项所述的反义寡聚体并允许所述寡聚体与靶核酸位点结合。9.调节ACE2同工型的表达、浓度或活性的方法，包括以下步骤：(a)向受试者施用有效量的根据权利要求1至6中任一项所述的一种或多种反义寡聚体或包含...

【专利技术属性】
技术研发人员：S，
申请(专利权)人：莫道什大学，
类型：发明
国别省市：