载脂蛋白C3(APOC3)iRNA组合物及其使用方法技术

本发明专利技术涉及RANi剂，例如，双链RNA(dsRNA)剂，其靶向载脂蛋白C3基因(APOC3)。本发明专利技术还涉及使用此类RNAi剂来抑制APOC3基因的表达的方法，以及预防和治疗APOC3相关病症的方法，所述病症是例如高甘油三酯血症、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、多囊卵巢综合征、肾病、肥胖症、2型糖尿病(胰岛素抵抗)、高血压、动脉粥样硬化及胰腺炎。脉粥样硬化及胰腺炎。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】载脂蛋白C3(APOC3)iRNA组合物及其使用方法
[0001]相关申请
[0002]本申请主张享有于2021年2月2日递交的美国临时申请第 63/144,516号及于2020年2月18日递交的美国临时申请第62/977,875 号的优先权权益。前述每个申请的全部内容通过引用并入本文。
[0003]序列表
[0004]本申请含有序列表，其已经以ASCII格式提交了电子版，且其全部内容通过引用并入本文。该ASCII副本于2021年2月10日创建，命名为121301_10420_SL.TXT，大小为249,455字节。

技术介绍

[0005]载脂蛋白C3(APOC3)是一种极低密度脂蛋白(VLDL)，并且是脂蛋白代谢的重要调节剂。在人体内，APOC3由APOC3基因编码，该基因与APOA1及APOA4基因一起位于11号染色体长臂上的基因簇中。 APOC3作为一种99个氨基酸的小蛋白质在肝脏中表达并且在肠中以较低程度表达。在去除内质网中的20个氨基酸的信号肽的后，形成79 个氨基酸的成熟ApoC3蛋白，其可能以非糖基化或糖基化的同种型存在。
[0006]APOC3的主要功能是通过对内皮结合脂蛋白脂肪酶(LPL)的非竞争性抑制作为脂肪分解的调节剂。LPL水解富含三酰基甘油(甘油三酯) 的脂蛋白(TRL)中的三酰基甘油，将脂肪酸释放到血浆中，并且将富含三酰基甘油的大颗粒转化为较小的缺乏三酰基甘油的残余脂蛋白。缺乏 APOC3的个体具有低TRL水平，同时伴有三酰基甘油的高效脂肪分解。此外，其中通过基因敲除APOC3基因的小鼠显示出了低血浆三酰基甘油水平以及有效的TRL分解代谢。APOC3还抑制肝脂肪酶(HL)，这是一种在肝脏中合成的具有三酰基甘油脂肪酶和磷脂酶A1活性的脂肪分解酶。APOC3对HL的抑制效应进一步降低了肝脏对TRL残余物的脂肪分解和摄入。APOC3还被证明能够刺激极低密度脂蛋白(VLDL) 的合成。据信，与APOC3的这一作用相关的潜在机制可能与抑制蛋白酶体介导的APOB降解有关，导致APOB的合成和分泌增加，并且导致VLDL三酰基甘油的合成增加。因此，APOC3可能在调节肝脏的 VLDL输出中起关键作用。
[0007]细胞研究报告称，APOC3可能会干扰TRL和残余物与肝脂蛋白受体的结合。APOC3可通过掩蔽或改变APOB及APOE的构象而消除 APOB和ApoE介导的脂蛋白与低密度脂蛋白受体(LDLR)的结合。 APOC3还显著抑制乳糜微粒及VLDL颗粒与脂肪分解刺激型受体 (LSR)的结合。
[0008]APOC3水平的增加诱导了高甘油三酯血症或甘油三酯的高(超) 血液水平(血症)的发展。甘油三酯水平升高与多种疾病相关，包括心血管疾病、动脉粥样硬化、非酒精性脂肪性肝病、非酒精性脂肪性肝炎、多囊卵巢综合征、肾病、肥胖症、2型糖尿病(胰岛素抵抗)、高血压和皮肤病变(黄瘤)。极高的甘油三酯水平也会增加急性胰腺炎的风险。因此，调节APOC3代谢是管理高甘油三酯血症及相关疾病的重要治疗方法。
[0009]因此，本领域中需要用于治疗载脂蛋白C3相关病症诸如高甘油三酯血症的APOC3
表达调节剂。

技术实现思路

[0010]本专利技术提供了iRNA组合物，其影响编码载脂蛋白C3(APOC3) 的基因的RNA转录物的RNA诱导沉默复合体(RISC)所介导的裂解。载脂蛋白C3(APOC3)可位于细胞内，例如，受试者(如人类受试者)的细胞内。
[0011]一方面，本专利技术提供了一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3的表达，其中，该dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中该有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，且该反义链包含与SEQ ID NO：2的核苷酸序列相异不超过1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。在一个实施方案中，该dsRNA剂包含至少一种热不稳定的核苷酸修饰，例如，无碱基修饰；双链体(duplex)中与相对核苷酸的错配；以及不稳定的糖修饰、2
′‑
脱氧修饰、无环核苷酸、未锁核酸(UNA)、甘油核酸(GNA)，例如，该反义链包含至少一个热不稳定的核苷酸修饰。
[0012]另一方面，本专利技术提供了双链核糖核酸(dsRNA)，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3的表达，其中，该dsRNA包含形成双链区域的有义链和反义链，其中该反义链包含编码载脂蛋白C3的mRNA的互补性区域，并且其中，该互补性区域包含与、表14及表15中任一者中的任一反义核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。
[0013]一方面，本专利技术提供了一种双链核糖核酸(dsRNA)，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3的表达，其中，该dsRNA包含形成双链区域的有义链和反义链，其中，该有义链包含与SEQ ID NO：1核苷酸序列的核苷酸232至254、233至255、238至260、239至261、242至264、243 至265、244至266、264至286、268至290、426至448、431至453、 432至454、433至455、435至457、436至458、499至521、500至 522、503至525、504至526、507至529、510至532或511至533的任一核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且，该反义链包含来自SEQ ID NO：2的对应核苷酸序列的至少19个连续核苷酸。
[0014]在一个实施方案中，该反义链包含与选自由下列所组成的组的双链体的任一反义链核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少 15个连续核苷酸：AD
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80794.7、AD本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3(APOC3)的表达，其中，所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中所述反义链包含编码APOC3的mRNA的互补性区域，并且其中，所述互补性区域包含与表2至表5、表14和表15中任一者中的任一反义核苷酸序列相异不超过3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。2.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3(APOC3)的表达，其中，所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中，所述有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸232至254、233至255、238至260、239至261、242至264、243至265、244至266、264至286、268至290、426至448、431至453、432至454、433至455、435至457、436至458、499至521、500至522、503至525、504至526、507至529、510至532或511至533中的任一核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含来自SEQ ID NO：2的对应核苷酸序列的至少15个连续核苷酸。3.如权利要求1或2所述的dsRNA剂，其中，所述反义链包含与选自由下列所组成的组的双链体的任一反义链核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸：AD
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959917.1、AD
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959918.1、AD
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960096.1、AD
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959914.1、AD
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960470.1、AD
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960436.1、AD
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960446.1、AD
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80794.7、AD
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960478.1、AD
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960481.1和AD
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960482.1。4.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3(APOC3)的表达，其中，所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中，所述有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸235至257、238至260、242至264、243至265、244至266、426至448、430至450、431至453、432至454、433至455、435至457、436至458、499至521、503至525和504至526中的任一核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含来自SEQ ID NO：2的对应核苷酸序列的至少15个连续核苷酸。5.如权利要求1或2所述的dsRNA剂，其中，所述反义链包含与选自由下列所组成的组的双链体的任一反义链核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸：AD
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959917.1、AD
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960064.1、AD
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960031.1、AD
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960475.1、AD
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960442.1、AD
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960436.1、AD
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960294.1、AD
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80794.7和AD
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959910.1。6.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中脂蛋白C3(APOC3)的表达，其中，所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中，所述有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸232至254、239至261、242至264、244至266、258至280、264至286、268至290、429至451、430至450、430至452、433至455、434至456、435至457、500至522、503至525、507至529、和510至532的任一核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含来自SEQ ID NO：2的对应核苷酸序列的至少15个连续核苷酸。7.如权利要求1或2所述的dsRNA剂，其中，所述反义链包含与选自由下列所组成的组的双链体的任一反义链核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸：AD
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80794.8、AD
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959907.2、AD
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959914.2、AD
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959916.2、AD
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959932.2、AD
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960314.2、AD
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960062.2、AD
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960065.2、AD
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960066.2、AD
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960294.2、AD
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960471.2、AD
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960474.2、AD
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960478.2和AD
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960481.2。8.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3(APOC3)的表达，其中，所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中，所述有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸429至451、430至452、431至451、432至452、433至455、504至526和506至526中的任一核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含来自SEQ ID NO：2的对应核苷酸序列的至少15个连续核苷酸。9.如权利要求1或2所述的dsRNA剂，其中，所述反义链包含与选自由下列所组成的组的双链体的任一反义链核苷酸序列相异不超过三个核苷酸的至少15个连续核苷酸：960064.2、AD
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960065.2、AD
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960066.2、AD
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960294.2、AD
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960471.2、AD
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960474.2、AD
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960478.2和AD
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960481.2。10.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3的表达，其中，所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中，所述有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸序列的核苷酸429
‑
455或504
‑
532中的任一核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，且所述反义链包含来自SEQ ID NO：2的对应核苷酸序列的至少19个连续核苷酸。11.一种双链核糖核酸(dsRNA)剂，其用于抑制细胞中载脂蛋白C3的表达，其中，所述dsRNA剂包含形成双链区域的有义链和反义链，其中，所述有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸序列的核苷酸429至451、430至452、431至451、432至452、433至455、434至452、504至526和506至526中的任一核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸，并且所述反义链包含来自SEQ ID NO：2的对应核苷酸序列的至少19个连续核苷酸。12.如权利要求10或11所述的dsRNA剂，其中，所述有义链包含与SEQ ID NO：1的核苷酸434
‑
452的核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。13.如权利要求10至12中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述反义链包含与选自由下列所组成的组的双链体的任一反义链核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸：AD
‑
960030、AD
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960064、AD
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1143243、AD
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1143245、AD
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1143247、AD
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1143249、AD
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1143256、AD
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1143260、AD
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1143278、AD
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1143287、AD
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1143295、AD
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1143299、AD
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1143302和AD
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1143305。14.如权利要求10至13中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述反义链包含与双链体AD
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1143243的反义链核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。15.如权利要求10至13中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述反义链包含与双链体AD
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1143278或AD
‑
960064的反义链核苷酸序列相异不超过0、1、2或3个核苷酸的至少15个连续核苷酸。16.如权利要求1至15中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述dsRNA剂包含至少一个经修饰的核苷酸。17.如权利要求1至16中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述有义链的基本全部核苷酸包含修饰；所述反义链的基本全部核苷酸包含修饰；或者所述有义链的基本全部核苷酸和所述反义链的基本全部核苷酸包含修饰。18.如权利要求1至17中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述有义链的全部核苷酸包含修饰；所述反义链的全部核苷酸包含修饰；或者
所述有义链的全部核苷酸和所述反义链的全部核苷酸包含修饰。19.如权利要求16至18中任一项所述的dsRNA剂，其中，至少一个经修饰的核苷酸选自由下列所组成的组：脱氧
‑
核苷酸、3'
‑
端脱氧胸腺嘧啶(dT)核苷酸、2'
‑
O
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甲基修饰核苷酸、2'
‑
氟基修饰核苷酸、2'
‑
脱氧修饰核苷酸、锁核苷酸、未锁核苷酸、构象限制核苷酸、限制性乙基核苷酸、无碱基核苷酸、2'
‑
氨基修饰核苷酸、2'
‑
O
‑
烯丙基修饰核苷酸、2'
‑
C
‑
烷基修饰核苷酸、2'
‑
羟基修饰核苷酸、2'
‑
甲氧基乙基修饰核苷酸、2'
‑
O
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烷基修饰核苷酸、吗啉基核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然碱基的核苷酸、四氢吡喃修饰核苷酸、1,5
‑
脱水己糖醇修饰核苷酸、环己烯基修饰核苷酸、包含硫代磷酸基团的核苷酸、包含甲基膦酸基团的核苷酸、包含5'
‑
磷酸的核苷酸、包含5'
‑
磷酸模拟物的核苷酸、热不稳定的核苷酸、二醇修饰核苷酸(GNA)、以及2
‑
O
‑
(N
‑
甲基乙酰胺)修饰核苷酸；及其组合。20.如权利要求16至18中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述核苷酸上的修饰选自由下列所组成的组：LNA、HNA、CeNA、2'
‑
甲氧基乙基、2'
‑
O
‑
烷基、2
‑
O
‑
烯丙基、2'
‑
C
‑
烯丙基、2'
‑
氟基、2'
‑
脱氧、2'
‑
羟基、和二醇；及其组合。21.如权利要求16至18中任一项所述的dsRNA剂，其中，至少一个经修饰的核苷酸选自由下列所组成的组：脱氧
‑
核苷酸、2'
‑
O
‑
甲基修饰核苷酸、2'
‑
氟基修饰核苷酸、2'
‑
脱氧修饰核苷酸、二醇修饰核苷酸(GNA)、和乙烯基
‑
膦酸核苷酸；及其组合。22.如权利要求16至18中任一项所述的dsRNA剂，其中，至少一个经修饰的核苷酸选自由下列所组成的组：脱氧
‑
核苷酸、2'
‑
O
‑
甲基修饰核苷酸、和2'
‑
氟基修饰核苷酸；及其组合。23.如权利要求16至18中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述核苷酸上的至少一个修饰是热不稳定的核苷酸修饰。24.如权利要求23的dsRNA剂，其中，所述热不稳定的核苷酸修饰选自由下列所组成的组：无碱基修饰；所述双链体中与相对核苷酸的错配；和不稳定的糖修饰、2'
‑
脱氧修饰、无环核苷酸、未锁核酸(UNA)、以及甘油核酸(GNA)。25.如权利要求1至24中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述双链区域的长度为19至30个核苷酸对。26.如权利要求25所述的dsRNA剂，其中，所述双链区域的长度为19至25个核苷酸对。27.如权利要求25所述的dsRNA剂，其中，所述双链区域的长度为19至23个核苷酸对。28.如权利要求25所述的dsRNA剂，其中，所述双链区域的长度为23至27个核苷酸对。29.如权利要求25所述的dsRNA剂，其中，所述双链区域的长度为21至23个核苷酸对。30.如权利要求1至29中任一项所述的dsRNA剂，其中，每条链的长度独立地为不超过30个核苷酸。31.如权利要求1至30中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述有义链的长度为21个核苷酸，并且所述反义链的长度为23个核苷酸。32.如权利要求1至31中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述互补性区域的长度为至少17个核苷酸。33.如权利要求1至32中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述互补性区域的长度为19至23个核苷酸。34.如权利要求1至31中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述互补性区域的长度为19个核
苷酸。35.如权利要求1至34中任一项所述的dsRNA剂，其中，至少一条链包含至少1个核苷酸的3'突出。36.如权利要求1至34中任一项所述的dsRNA剂，其中，至少一条链包含至少2个核苷酸的3'突出。37.如权利要求1至36中任一项所述的dsRNA剂，其还包含配体。38.如权利要求37所述的dsRNA剂，其中，所述配体与所述dsRNA剂的有义链的3'端缀合。39.如权利要求37或38所述的dsRNA剂，其中，所述配体是N
‑
乙酰半乳糖胺(GalNAc)衍生物。40.如权利要求37至39中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述配体是通过一价、二价或三价分支接头所附接的一个或多个GalNAc衍生物。41.如权利要求37至40中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述配体是42.如权利要求41所述的dsRNA剂，其中，所述dsRNA剂如以下示意图所示缀合到所述配体并且，其中，X是O或S。43.如权利要求42所述的dsRNA剂，其中，所述X是O。44.如权利要求1至43中任一项所述的dsRNA剂，其中，所述dsRNA剂还包含至少一个硫代磷酸酯核苷酸间键合或甲基膦酸酯核苷酸间键合。45.如权利要求44所述的dsRNA剂，其中，所述硫代磷酸酯核苷酸间键合或甲基膦酸酯
核苷酸间键合位于一条链的3'
‑
末端。46.如权利要求45所述的dsRNA剂，其中，所述链是所述反义链。47.如权利要求45所述的dsRNA剂，其中，所述链是所述有义链。48.如权利要求44所述的dsRNA剂，其中，所述硫代磷酸酯核苷酸间键合或甲基膦酸酯核苷酸间键合位于一条链的5'
‑
末端。49.如权利要求48所述的dsRNA剂，其中，所述链是所述反义链。50.如权利要求48所述的dsRNA剂，其中，所述链是所述有义链。51.如权利要求44所述的dsRNA剂，其中，所述硫代磷酸酯核苷酸间键合或甲基膦酸酯核苷酸间键合位于一条链的5'
‑
末...

【专利技术属性】
技术研发人员：F，
申请(专利权)人：阿尔尼拉姆医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：