具有CD28突变的嵌合抗原受体及其用途制造技术

本公开提供用于增强对癌症和病原体的免疫应答的方法和组合物。本公开涉及包含突变的CD28细胞内基序的嵌合抗原受体(CAR)和包含此类CAR的细胞。本公开的主题还涉及所述细胞用于治疗疾病，例如用于治疗癌症的用途。例如用于治疗癌症的用途。例如用于治疗癌症的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】具有CD28突变的嵌合抗原受体及其用途
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年2月5日提交的美国临时专利申请第62/970,401号的优先权，其全部内容并入本文以供参考，并要求其优先权。
[0003]序列表
[0004]本申请包含序列表，该序列表已通过EFS
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Web以ASCII格式提交，其全部内容并入本文以供参考。所述ASCII副本创建于2021年2月4日，命名为072734.1189_ST25.txt，大小为70,968字节。


[0005]本公开提供用于增强对癌症和病原体的免疫应答的方法和组合物。本公开涉及包含突变的CD28细胞内基序、即突变的YMNM基序的嵌合抗原受体(CAR)。本公开的主题还提供包含该CAR的细胞和包含该细胞的组合物，以及该细胞和组合物用于治疗疾病，例如用于治疗癌症的用途。

技术介绍

[0006]基于细胞的免疫疗法是一种具有治愈潜力的癌症治疗方法。通过引入编码天然或修饰的T细胞受体(TCR)或对于所选抗原具有特异性的称为嵌合抗原受体(CAR)的抗原的合成受体的遗传物质，可以修饰T细胞和其它免疫细胞以靶向肿瘤抗原。患者工程化的CAR T细胞已显示出对一系列液体和固体恶性肿瘤疗效显著。
[0007]正在临床上使用和临床前开发的CAR主要使用共刺激信号传导结构域，如CD28或4
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1BB。CD28是一种跨膜蛋白，通过其作为共刺激分子的作用在T细胞活化中发挥关键作用，是基于CD28的CAR构建体的组成部分。持久性，特别是这些CAR的功能持久性已显示与更好的结果相关。存在对改进的CAR的未满足需求，该改进的CAR与现有CAR相比，具有增强的增殖和持久性和/或具有改进的效率和活动性。

技术实现思路

[0008]本公开的主题提供包含突变的CD28细胞内基序，即突变的YMNM基序的嵌合抗原受体(CAR)。
[0009]本公开提供嵌合抗原受体(CAR)，其包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，该细胞内信号传导结构域包含至少一个共刺激信号传导结构域，该共刺激信号传导结构域包含CD28多肽，该CD28多肽包含突变的YMNM基序。
[0010]在某些实施方式中，与包含天然YMNM基序的CD28分子相比，该CD28多肽具有减少的磷酸肌醇3
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激酶(PI3K)的p85亚基的募集。在某些实施方式中，PI3K的p85亚基不结合突变的YMNM基序。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YxNx(SEQ ID NO:21)所示的氨基酸序列组成，其中x不是蛋氨酸(M)。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YENV(SEQ ID NO:22)、YSNV(SEQ ID NO:23)、YKNL(SEQ ID NO:24)、YENQ(SEQ ID NO:25)、YKNI(SEQ ID NO:
26)、YINQ(SEQ ID NO:27)、YHNK(SEQ ID NO:28)、YVNQ(SEQ ID NO:29)、YLNP(SEQ ID NO:30)、YLNT(SEQ ID NO:31)、YDND(SEQ ID NO:66)、YENI(SEQ ID NO:67)、YENL(SEQ ID NO:68)、YKNQ(SEQ ID NO:72)、YKNV(SEQ ID NO:73)或YANG(SEQ ID NO:87)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:23)、YENV(SEQ ID NO:22)或YKNI(SEQ ID NO:26)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:23)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，突变的YMNM基序结合生长因子受体结合受体2(Grb2)和/或Shc下游的Grb2相关衔接体(adaptor)(GADS)。
[0011]在某些实施方式中，突变的YMNM基序不结合Grb2和/或GADS。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YMxM(SEQ ID NO:20)所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YMDM(SEQ ID NO:32)、YMPM(SEQ ID NO:79)、YMRM(SEQ ID NO:37)或YMSM(SEQ ID NO:80)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YMDM(SEQ ID NO:32)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YbxM(SEQ ID NO:33)所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是蛋氨酸(M)。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YTHM(SEQ ID NO:34)、YVLM(SEQ ID NO:35)、YIAM(SEQ ID NO:36)、YVEM(SEQ ID NO:83)、YVKM(SEQ ID NO:85)或YVPM(SEQ ID NO:86)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YMxb(SEQ ID NO:65)所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是蛋氨酸(M)。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YMAP(SEQ ID NO:77)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，PI3K的p85亚基信号传导结合突变的YMNM基序。
[0012]在某些实施方式中，突变的YMNM基序不结合Grb2和/或GADS或PI3K的p85亚基。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由Ybxb(SEQ ID NO:43)所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是蛋氨酸(M)。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YGGG(SEQ ID NO:44)、YAAA(SEQ ID NO:45)、YFFF(SEQ ID NO:46)、YETV(SEQ ID NO:69)、YQQQ(SEQ ID NO:70)、YHAE(SEQ ID NO:71)、YLDL(SEQ ID NO:74)、YLIP(SEQ ID NO:75)、YLRV(SEQ ID NO:76)、YTAV(SEQ ID NO:82)或YVHV(SEQ ID NO:84)所示的氨基酸序列组成。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YGGG(SEQ ID NO:44)所示的氨基酸序列组成。
[0013]在某些实施方式中，突变的YMNM基序能够通过限制可结合PI3K的p85亚基的蛋氨酸残基的数量来调节PI3K信号传导。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YMNx(SEQ ID NO:38)或YxNM(SEQ ID NO:39)所示的氨基酸序列组成，其中x不是蛋氨酸(M)。在某些实施方式中，突变的YMNM基序由YMNV(SEQ ID NO:40)、YENM(SEQ ID NO:41)和YMNQ(SEQ ID NO:42)、YMNL(SEQ ID NO:78)或YSNM(SEQ ID NO:81本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种嵌合抗原受体(CAR)，其包含细胞外抗原结合结构域、跨膜结构域和细胞内信号传导结构域，所述细胞内信号传导结构域包含至少一个共刺激信号传导结构域，所述共刺激信号传导结构域包含CD28多肽，所述CD28多肽包含突变的YMNM基序。2.根据权利要求1所述的CAR，其中与包含天然YMNM基序的CD28分子相比，所述CD28多肽具有减少的磷酸肌醇3
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激酶(PI3K)的p85亚基的募集。3.根据权利要求1或2所述的CAR，其中PI3K的p85亚基不与所述突变的YMNM基序结合。4.根据权利要求3所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YxNx(SEQ ID NO:21)所示的氨基酸序列组成，其中x不是蛋氨酸(M)。5.根据权利要求3或4所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YENV(SEQ ID NO:22)、YSNV(SEQ ID NO:23)、YKNL(SEQ ID NO:24)、YENQ(SEQ ID NO:25)、YKNI(SEQ ID NO:26)、YINQ(SEQ ID NO:27)、YHNK(SEQ ID NO:28)、YVNQ(SEQ ID NO:29)、YLNP(SEQ ID NO:30)、YLNT(SEQ ID NO:31)、YDND(SEQ ID NO:66)、YENI(SEQ ID NO:67)、YENL(SEQ ID NO:68)、YKNQ(SEQ ID NO:72)、YKNV(SEQ ID NO:73)或YANG(SEQ ID NO:87)所示的氨基酸序列组成。6.根据权利要求3
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5中任一项所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:23)、YENV(SEQ ID NO:22)或YKNI(SEQ ID NO:26)所示的氨基酸序列组成。7.根据权利要求3
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6中任一项所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YSNV(SEQ ID NO:23)所示的氨基酸序列组成。8.根据权利要求3
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7中任一项所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序与生长因子受体结合受体2(Grb2)和/或Shc下游的Grb2相关衔接体(GADS)结合。9.根据权利要求1或2所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序不与Grb2和/或GADS结合。10.根据权利要求9所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YMxM(SEQ ID NO:20)所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)。11.根据权利要求9或10所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YMDM(SEQ ID NO:32)、YMPM(SEQ ID NO:79)、YMRM(SEQ ID NO:37)或YMSM(SEQ ID NO:80)所示的氨基酸序列组成。12.根据权利要求9
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11中任一项所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YMDM(SEQ ID NO:32)所示的氨基酸序列组成。13.根据权利要求9所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YbxM(SEQ ID NO:33)所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是蛋氨酸(M)。14.根据权利要求13所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YTHM(SEQ ID NO:34)、YVLM(SEQ ID NO:35)、YIAM(SEQ ID NO:36)、YVEM(SEQ ID NO:83)、YVKM(SEQ ID NO:85)或YVPM(SEQ ID NO:86)所示的氨基酸序列组成。15.根据权利要求9所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YMxb(SEQ ID NO:65)所示的氨基酸序列组成，其中x不是天冬氨酸(N)，并且b不是蛋氨酸(M)。16.根据权利要求15所述的CAR，其中所述突变的YMNM基序由YMAP(SEQ ID NO:77)所示的氨基酸序列组成。17.根据权利要求9
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16中任一项所述的CAR，其中PI3K的p85亚基信号传导与所述突变的YMNM基序结合。
NO:22)所示的氨基酸序列组成。37.根据权利要求36所述的CAR，其中所述细胞外抗原结合结构域与CD19结合。38.根据权利要求37所述的CAR，其中所述CAR包含SEQ ID NO:53所示的氨基酸序列。39.根据权利要求1
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29中任一项所述的CAR，其中所述突...

【专利技术属性】
技术研发人员：A，
申请(专利权)人：纪念斯隆凯特琳癌症中心，
类型：发明
国别省市：