一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因、扩增引物及应用制造技术

本发明专利技术属于属于医学诊断技术领域，具体涉及一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因、扩增引物及应用。本发明专利技术所述用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因的突变位点为c.2143_2144insG，具体为APC基因2143和2144之间插入碱基G，导致APC基因所编码的蛋白质第715位氨基酸残基由H变为A，后续并发生移码突变(APC:NM_000038.5:exon16:c.2143_2144insG:p.H715Afs*19)，影响了蛋白的重要功能。本发明专利技术所述APC突变基因可以作为诊断家族性腺瘤性息肉病的生物标志物，为治疗家族性腺瘤性息肉病提供可能的药物靶点。瘤性息肉病提供可能的药物靶点。瘤性息肉病提供可能的药物靶点。

【技术实现步骤摘要】
一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因、扩增引物及应用


[0001]本专利技术属于医学诊断
，具体涉及一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因、 扩增引物及应用。

技术介绍

[0002]家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis，FAP)是一种具有结肠癌倾向的显性遗传 性疾病，在新生儿中的发病率为1/8000～1/12000，在人群中的患病率为1/24000。该病的外显率几乎 100％，约占结直肠癌病因的1％。经典型的家族性腺瘤性息肉病以成年早期结肠上存在数百个甚至数 千个腺瘤性息肉为主要临床表现，有很高的癌变风险，若不及时干预治疗，几乎所有的患者将会发展 为结直肠癌。此外，经典型的家族性腺瘤性息肉病患者常合并有各种肠外病变，包括胃底腺息肉、十 二指肠息肉、骨瘤、牙齿异常、先天性视网膜色素上皮细胞肥大、硬纤维瘤、表皮囊肿及各种相关癌 症，伴发肠外肿瘤的又称Gardner综合征。
[0003]家族性腺瘤性息肉病除少数病例由MUTYH基因(MIM 604933)突变导致，属常染色体隐形遗 传。大部分由APC基因(MIM 611731)突变所致，属常染色体显性遗传。APC基因位于染色体5p22.2， 基因全长139kb，包含16个外显子和15个内含子，编码2828个氨基酸；目前国际上人类基因突变 数据库(HGMD)已收录的APC基因突变一千多种，涉及的突变类型包括：无义突变、错义突变、 剪切突变、调控区突变、缺失突变、插入突变及复杂重排突变，其中绝大部分是错义突变或移码突变， 将会导致截短的APC蛋白产物。
[0004]APC基因为抑癌基因，在很多细胞和组织中具有表达。其编码的APC蛋白参与Wnt信号通路， 通过调节β连环蛋白的降解而维持β连环蛋白在胞质内的低水平，从而抑制目标癌基因的转录。若APC 基因发生突变，将会破坏β连环蛋白原有的稳定状态，促进目标癌基因的转录，从而导致肿瘤的形成。 基因突变是导致疾病发生发展的重要遗传基础，基因诊断是确诊家族性腺瘤性息肉病的重要遗传学标 准。因此，寻求基因诊断标志物、及早明确患者诊断以及靶向干预，在目前家族性腺瘤性息肉病检测 领域尤为重要。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于提供一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因、扩增引物及应用， 丰富家族性腺瘤性息肉病的致病突变谱，精准判断家族性腺瘤性息肉病，用于家族性腺瘤性息肉病的 遗传学诊断以指导治疗，以及胚胎植入前遗传学诊断和优生优育。
[0006]本专利技术提供了一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因，所述用于诊断家族性腺瘤性 息肉病的APC突变基因的突变位点包括c.2143_2144insG。本专利技术通过外显子组测序技术发现了一个 APC基因新突变位点，APC基因2143和2144之间插入碱基G，导致APC基因所编码的蛋白质第715 位氨基酸残基由H变为A，后续并发生移码突变，影响了蛋白
的重要功能，具体为 APC:NM_000038.5:exon16:c.2143_2144insG:p.H715Afs*19。本专利技术在家系中未患病成员检测该突变结 果为阴性，通过生物信息学软件确定了该突变位点的致病性，可以导致家族性腺瘤性息肉病发病。本 专利技术所述APC突变基因丰富了家族性腺瘤性息肉病的致病突变谱，一方面，通过检测受试者是否携 带有上述突变，能够筛查或诊断家族性腺瘤性息肉病的遗传学诊断，以指导治疗以及优生优育，为家 族性腺瘤性息肉病患者的治疗提供全新的理论依据，可以为治疗家族性腺瘤性息肉病提供可能的药物 靶点。
[0007]本专利技术所提供的试剂盒可用于快速、有效地预测或诊断家族性腺瘤性息肉病。
附图说明
[0008]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图 作简单地介绍。
[0009]图1为1号家系家族性腺瘤性息肉病家系遗传图谱，其中，
□
表示男性正常个体，
○
表示女性正 常个体，
●
表示女性患者，
↗
表示先证者，表示死亡女性患者，
◇
表示正常胎儿，
◆
表示患病胎儿；
[0010]图2为1号家系利用Sanger测序检测APC:NM_000038.5:exon16:c.2143_2144insG:p.H715Afs*19 位点基因型的结果图，其中，先证者是家族性腺瘤性息肉病患者，1号家系中其他人员为正常个体(测 序图中箭头所指为突变发生位置)；
[0011]图3为STR连锁分析结果，其中1号家系胚胎2(Ⅲ3)有一个单体型是来自其母亲异常携带 APC突变的染色体，可判断该胚胎为携带APC:NM_000038.5:exon16:c.2143_2144insG:p.H715Afs*19 突变的异常胚胎；
[0012]图4为1号家D5S1466毛细管电泳结果；
[0013]图5为1号家D5S134毛细管电泳结果；
[0014]图6为1号家D5S2860毛细管电泳结果；
[0015]图7为1号家D5S2055毛细管电泳结果；
[0016]图8为1号家rs153560测序结果；
[0017]图9为1号家rs153553测序结果；
[0018]图10为1号家胚胎APC基因测序结果，其中星号所指为突变发生位置，胚胎1(Ⅲ2)为正常； 胚胎2(Ⅲ3)为APC:NM_000038.5:exon16:c.2143_2144insG:p.H715Afs*19位点突变。
[0019]图11为2号家系家族性腺瘤性息肉病家系遗传图谱；其中，
□
表示男性正常个体，
○
表示女性正 常个体，
●
表示女性患者，表示死亡女性患者，
■
表示男性患者，
↗
表示先证者。
[0020]图12为2号家系利用Sanger测序检测APC:NM_000038.5:exon16:c.2143_2144insG:p.H715Afs*1 9位点基因型的结果图，图中星号所指为突变发生位置。
具体实施方式
[0021]本专利技术提供了一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因，所述用于诊断家族性腺瘤性 息肉病的APC突变基因的突变位点为c.2143_2144insG。
[0022]本专利技术利用外显子测序筛选与家族性腺瘤性息肉病高度相关的致病基因突变，为
了避免假阳性结 果出现，通过Sanger测序进行验证，最终获得用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因，为 c.2143_2144insG，具体为APC:NM_000038.5:exon16:c.2143_2144insG:p.H715Afs*19，即APC基因16 号外显子第2143位到2144位碱基之间插入G碱基。这种突变方式可导致APC基因所编码的蛋白质 第715位氨基酸残基由本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于诊断家族性腺瘤性息肉病的APC突变基因，其特征在于，所述APC突变基因的突变位点包括c.2143_2144insG。2.权利要求1所述APC突变基因作为检测靶标在下述A1
‑
A6任一种中的应用：A1：制备诊断家族性腺瘤性息肉病的试剂；A2：制备预防家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；A3：制备检测家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；A4：制备诊断家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；A5：制备辅助治疗家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；A6：制备孕前和/或产前遗传病筛查试剂盒。3.一种用于扩增权利要求1所述APC突变基因的引物，其特征在于，包括序列上游引物APC
‑
F和下游引物APC
‑
R；所述上游引物APC
‑
F包括如a1)～a4)中的任意一种：a1)序列表中SEQ ID NO.1所述的单链DNA；a2)在a1)的5
’
端和/或3
’
端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；a3)在a1)或a2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；a4)在严格条件下与a1)或a2)限定的单链DNA杂交的单链DNA；所述下游引物APC
‑
R包括如b1)～b4)中的任意一种：b1)序列表中SEQ ID NO.2所述的单链DNA；b2)在b1)的5
’
端和/或3
’
端添加一个或几个核苷酸得到的单链DNA；b3)在b1)或b2)限定的单链DNA具有85％以上的同一性的单链DNA；b4)在严格条件下与b1)或b2)限定的单链DNA杂交的单链DNA。4.权利要求3所述引物在下述B1
‑
B6任一种中的应用：B1：制备诊断家族性腺瘤性息肉病的试剂；B2：制备预防家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；B3：制备检测家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；B4：制备诊断家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；B5：制备辅助治疗家族性腺瘤性息肉病的试剂盒；B6：制备孕前和/或产前遗传病筛查试剂盒。5.一...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾桥，罗娇娇，刘亚宁，
申请(专利权)人：湖南家辉生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：