MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用制造技术

本申请涉及分子生物和遗传学领域，提供MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用，具体的用于检测MBL基因自5'末端起的第

【技术实现步骤摘要】
MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用


[0001]本专利技术涉及分子生物和遗传学领域，具体涉及MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用。

技术介绍

[0002]甘露糖结合凝集素(Mannan
‑
Binding Lectin，MBL)，又称甘露糖结合蛋白(Mannan
‑
BindingProtein,MBP)，是一种肝源性血清C型凝集素，属Ca
2+
依赖型凝集素家族成员，广泛存在于多种哺乳动物血液循环中，在天然免疫中起重要作用。其主要生理功能有：
①
识别糖配体，MBL能选择性地与多种细菌、病毒、真菌以及某些肿瘤细胞表面的甘露聚糖残基结合，进而启动机体的天然免疫机制，在免疫功能发挥和稳定中起重要作用；
②
启动补体系统活化，MBL是目前发现的唯一能活化补体系统的胶凝素，CLR是其主要的效应功能区；
③
促进吞噬、免疫调节作用；
④
抑制、中和病毒作用；
⑤
精卵识别的信号受体之一。
[0003]MBL基因具有多态性，其主要的多态性位点包括：启动子区的MBL
‑
221位Y/X、MBL
‑
550位H/L、MBL
‑
70位S/T、MBL
‑
349位F/G、MBL
‑
427位V/W、MBL
‑
336位J/K和一个六碱基缺失MBL
‑
del6M/N；转录起始区的MBL+4位P/Q；外显子Ⅰ的MBL52位A/D、MBL54位A/B和MBL57位A/C密码子突变。不同的启动子基因型调控MBL基因转录水平，结合结构基因的突变体，使得不同种族人群间，甚至同一种族不同个体间的MBL血清水平相差很大，严重和反复感染人群MBL基因突变的频率显著高于普通人群，而血清MBL水平低下可导致免疫缺损。
[0004]类风湿性关节炎(RA)，强直性脊柱炎，属中医痹证范畴，俗有骨痹、历节风之称。是一种以慢性多关节炎症为主要表现的全身性疾病，多以手足小关节起病，常呈对称性，早期症状为受累关节的疼痛、肿胀、活动困难及发僵，长久不愈的晚期症状则为关节畸形。本病在我国人中患病率为0.3％，是造成我国人群丧失劳动力与致残的主要病因之一。本病可见于任何年龄，发病一般随着年龄增长而增加，发病的高峰年龄20
‑
40岁,而女性则在40
‑
60岁，类风湿关节炎以女性多发，女性患者是男性患者的2
‑
3倍。
[0005]有研究显示RA对MBL合成的影响是有限的。在疾病活动期MBL血清学水平过低，并非代谢消耗，而是RA病人产生MBL的能力下降。不同基因型对RA病人的发病存在影响。MBL缺失可能通过以下机制与RA发病关联，第一：免疫复合物介导的炎性变化可用少解释RA患者的关节病变，虽然MBL对关节中免疫复合物的清除作用仍未证实，但MBL缺失导致免疫复合物清除能力下降，可能是RA患者关节损害的机制之一；第二：RA可能是病原微生物：如链球菌、F13病毒、微小病毒、逆转录酶病毒等的变态免疫应答的结果。其可能原因是MBL缺失导致感染个体暴露于潜在的致病微生物而与RA易感相关；第三：有报道RA与无乳型1gG的显著增加有关，MBL可识别N
‑
乙酞氨基葡萄糖，后者可能是MBL的配体，MBL与病人关节中的免疫球蛋白1gG作用激活补体导致RA病人关节损伤，然而这一机制似乎是不正确的。
[0006]尚有报道显示了MBL缺失与RA的无相关性，MBL在RA的发病中并无重要作用。因此对于MBL基因单核苷酸多态性分布与RA易感性的相关性有待进一步研究。

技术实现思路

[0007]为了解决
技术介绍
中存在的问题，本申请提供MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用。
[0008]本申请提供MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述应用包括：
[0009]用于检测MBL基因自5'末端起的第
‑
70位点、第
‑
336位点、第
‑
349位点、第
‑
427位点、第+4位点和/或del6位点的单核苷酸多态性的物质在制备评价或辅助评价待测人患风湿性关节炎的风险性的试剂盒中的应用。
[0010]所述待测人为宁夏人群。
[0011]人MBL基因组位于10号染色体的长臂上(10q11.2
‑
q21)，具有4个编码区(Exon1～4)，各为251bp、117bp、69bp和3.1kb长，分别编码N
‑
端富含半胱氨酸区、胶原样区(CLD)、颈区和C末端C型糖识别区(CRD)。在MBL基因组的5＇
‑
端含有急性期反应蛋白元件，包括一个热休克蛋白元件、三个糖皮质激素应答元件和一个血清淀粉样A蛋白元件。在应激状态下，血清急性期反应蛋白浓度升高，MBL也升高，如手术感染时，血中急性期反应蛋白浓度升高(10～20倍)，MBL水平也相应增高(3倍)。
[0012]MBL的蛋白质是多个亚单位的聚合体，每一亚单位由3条完全相同的肽链(每条链分子量为28～32KD)构成。各肽链均为4个区域：
①
N
‑
端富含胱氨酸区：含20～21个氨基酸，其中胱氨酸参与亚单位间N
‑
二硫键形成；
②
胶原区：含18～20个Gly
‑
Xaa
‑
Yaa序列，为典型的胶原三螺旋结构，参与免役调理和补体活化过程；
③
颈区：位于胶原区与糖识别区之间，功能尚不清楚，可能与亚单位的稳定有关；
④
糖识别区：含120氨基酸(其中17～18个保守氨基酸和14个可变氨基酸，保守氨基酸是维持蛋白质特殊的疏水核心所必需)，呈一花蕾样结构。花蕾中三花瓣彼此间相距54A，瓣尖平面为一正三角形，此结构为MBL蛋白质发挥生理效应的基础。
[0013]通常MBL与MASP(MBL
‑
associaed serine protease—一种MBL相关丝氨酸蛋白激酶)结合，以复合物形式存在。此时的MBL胶原样区被MASP封闭，无法参加免役调理作用。只有当MBL的胶原样区暴露，才能激发免役调理功能。使MBL的胶原样区暴露的机制研究尚不充分，推测与α2
‑
巨球蛋白和MASP参与补体活化有关。
[0014]在一些实施方案中，第
‑
70位点的碱基为C或T，所述第
‑
336位点的碱基为A或G，所述第
‑
349位点的碱基为A或G，所述第
‑
427位点的碱基为A或C，所述第+4位点的的碱基为C或T，所述del6位点为六个碱基缺失的位点或无碱基缺失，六个碱基为AAAGAG。
[0015]在一些实施方案本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述应用包括：用于检测MBL基因自5'末端起的第
‑
70位点、第
‑
336位点、第
‑
349位点、第
‑
427位点、第+4位点和/或del6位点的单核苷酸多态性的物质在制备评价或辅助评价待测人患风湿性关节炎的风险性的试剂盒中的应用；所述待测人为宁夏人群。2.根据权利要求1所述的MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用，其特征在于，第
‑
70位点的碱基为C或T，所述第
‑
336位点的碱基为A或G，所述第
‑
349位点的碱基为A或G，所述第
‑
427位点的碱基为A或C，所述第+4位点的的碱基为C或T，所述del6位点为六个碱基缺失的位点或无碱基缺失，六个碱基为AAAGAG。3.根据权利要求1所述的MBL基因单核苷酸多态性在检测风湿性关节炎中的应用，其特征在于，所述试剂盒包括：扩增用的特异性引物，dNTP，用于PCR反应的Taq DNA聚合酶以及缓冲液；所述引物包括：扩增第
‑
70位点的引物：F:5'
–
ATGACCCATCCCTGGCCTCTAGCCG
‑
3'，R:5'
–
AGTCTTCCAGCAGCAACG
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯玲，李光华，彭涛，陶虹，李艳宁，
申请(专利权)人：宁夏医科大学，
类型：发明
国别省市：