一种固定化复合己酸菌及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种固定化复合己酸菌及其制备方法和应用。制备方法如下：(1)纯种己酸菌液的制备；(2)酵母菌液的制备；(3)复合己酸菌液的制备：将纯种己酸菌液与酵母菌液进行混合；(4)吸附载体的制备：取杏鲍菇，切碎，洗净，灭菌即得；(5)复合己酸菌的吸附：将处理好的吸附载体浸入制备好的复合己酸菌液，进行充分吸附；(6)包埋液的制备：将琼脂溶于水中，加热融化，灭菌即得；(7)将已吸附己酸菌的杏鲍菇载体均匀浸入包埋液中，凝固后得到固定化复合己酸菌。本发明专利技术提供的复合固定化己酸菌产己酸量高，产酸效果稳定。所述固定化己酸菌主要应用于白酒酿造领域，能够显著提高酒中己酸及己酸乙酯含量，显著提高白酒品质。显著提高白酒品质。

【技术实现步骤摘要】
一种固定化复合己酸菌及其制备方法和应用


[0001]本专利技术属于酿酒微生物及酿酒
，具体涉及一种固定化复合己酸菌及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]己酸菌指一类经培养可以产己酸的微生物，是窖泥中重要的功能菌。浓香型白酒的特征香气物质是己酸乙酯，主要由窖泥中的己酸菌代谢生成的己酸与酵母代谢生成的乙醇经酯化反应生成的。窖泥中己酸菌的含量及产己酸能力决定着窖泥品质的好坏，影响着浓香型白酒的品质。应用己酸菌液进行窖池的养护或人工窖泥的培养，能够为窖泥补充高活性的己酸菌，提高窖泥的生物活性，进一步提高白酒品质。
[0003]使用传统液体游离培养，己酸菌的培养周期较长，己酸菌需要培养5
‑
6天才能进入产酸期，产酸期约为3
‑
4天。而且作用时间短、生产成本高。固定化微生物的培养技术，自上世纪八十年代兴起。具有培养速度快、周期短、成本低、工艺简单、能够重复利用等优势，被许多工厂应用以生产己酸菌液。
[0004]目前己酸菌固定化方法多采用琼脂、聚乙烯醇、海藻酸钠等物质作为固定化材料，固定化的己酸菌多为窖泥种子液或纯种己酸菌。如谢国排等人(“琼脂固定化窖泥己酸菌培养技术研究”，酿酒，2016年12月)公开了使用琼脂固定化克氏梭状杆菌产己酸的方法；钟国辉等人(“固定化己酸菌新材料研究报告”，酿酒，2009年3月)公开了使用聚乙烯醇(PVA)包埋法和活性炭吸附法制备固定化己酸菌的方法，固定化菌株为克氏梭状芽孢杆菌；专利CN1033644(一种固定化已酸菌的制备及应用于浓香型曲酒酿制的新方法)公开了使用SiO2、Al2O3、Fe2O3作为载体固定化己酸菌的方法；张捷(“己酸菌细胞固定化技术在浓香型白酒生产中的应用”，酿酒，1999年1月)公开了使用海藻酸钠作为载体制备固定化己酸菌的方法。但固定化的窖泥种子液菌群结构不明确，易受环境因素导致菌群结构失调，而且不同批次窖泥等所含菌群不一致导致不同批次固定化窖泥种子液效果不一。固定化纯种己酸菌的产己酸能力在窖池的应用过程中易受环境因素影响。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的在于克服现有技术存在的缺点与不足，提供一种固定化复合固体己酸菌的制备方法及应用。
[0006]本专利技术的目的通过以下技术方案实现：
[0007]第一方面，本专利技术提供一种固定化复合己酸菌的制备方法，包括以下步骤：
[0008](1)纯种己酸菌液的制备：将己酸菌种子液按培养基5％
‑
10％(v/v)的接种量接种于乙醇乙酸钠培养基内，装液量为80％
‑
95％，33℃
‑
35℃下静置培养5
‑
7天；
[0009](2)酵母菌液的制备：添加耐高温活性干酵母于YPD培养基内,恒温下摇床内培养，然后转接于YPD培养基相同条件下放大培养；
[0010](3)复合己酸菌液的制备：将纯种己酸菌液与酵母菌液进行混合；
[0011](4)吸附载体的制备：取杏鲍菇，切碎，洗净，灭菌即得；
[0012](5)复合己酸菌的吸附：将处理好的吸附载体浸入制备好的复合己酸菌液，进行充分吸附；
[0013](6)包埋液的制备：将琼脂溶于水中，加热融化，灭菌即得；
[0014](7)将已吸附己酸菌的杏鲍菇载体均匀浸入包埋液中，凝固后得到固定化复合己酸菌。
[0015]进一步，所述步骤(1)中，所述己酸菌为速生梭菌JSJ
‑
1CCTCC M 2020881。该葡萄糖抑制型耐氧己酸菌为专利ZL202110311823.6公开的菌种，保藏于中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏号为CCTCC M 2020881，其分类命名C1ostridium celerecrescens JSJ
‑
01(保藏日期：2020年12月9日，保藏地址：中国，武汉，武汉大学)。
[0016]进一步，所述步骤(1)中，培养己酸菌用的乙醇乙酸钠(ES)培养基质量份的组成如下：酵母膏1
‑
1.5份、无水乙酸钠0.3
‑
0.6份、MgSO4·
7H2O 0.02
‑
0.04份，K2HPO
4 0.03
‑
0.06份，(NH4)2SO
4 0.03
‑
0.06份，蒸馏水100份，然后无菌操作加入无水乙醇2
‑
2.5份和干热灭菌后的CaCO
3 0
‑
1.5份。
[0017]进一步，所述步骤(2)中，按5％(v/v)的接种量进行放大培养。
[0018]进一步，所述步骤(2)中，YPD培养基的质量份组成如下：酵母膏1份、蛋白胨2份、葡萄糖2份、蒸馏水100份。
[0019]进一步，所述步骤(2)中，干酵母的添加量为YPD培养基质量的0.05％
‑
0.1％；培养温度为34℃，摇床转速为200r/min，培养时间为16h。
[0020]进一步，所述步骤(2)中，干酵母为安琪耐高温活性干酵母。
[0021]进一步，所述步骤(3)中，乙酸菌液与酵母菌液按体积比1:1.5
‑
2进行混合。
[0022]进一步，所述步骤(4)中，杏鲍菇切成1
‑
2cm3的方块。
[0023]进一步，所述步骤(4)中，灭菌为130
‑
135℃下干热灭菌，灭菌时间为1
‑
2h。
[0024]进一步，所述步骤(5)中，吸附载体质量与己酸菌液体积的比例为0.3
‑
0.5g:10
‑
12mL。
[0025]进一步，所述步骤(5)中，吸附温度为30
‑
35℃，吸附时间为24
‑
48h。
[0026]进一步，所述步骤(6)中，琼脂和水的质量比为1:14
‑
16；灭菌温度为115℃，灭菌时间为15
‑
20min。
[0027]进一步，所述步骤(7)中，凝固温度为20
‑
25℃。
[0028]第二方面，本专利技术提供利用第一方面方法所制备的固定化复合己酸菌。
[0029]第三方面，本专利技术提供第二方面固定化复合己酸菌在发酵生产己酸中的应用。
[0030]进一步，固定化复合己酸菌在发酵产己酸方面的应用为将固定化复合己酸菌添加至含乙醇和有机酸的发酵体系中发酵产己酸。
[0031]第四方面，本专利技术提供第二方面固定化复合己酸菌在发酵生产浓香风味白酒中的应用。
[0032]进一步，固定化复合己酸菌在白酒酿造领域的应用指将固定化复合己酸菌或固定化复合己酸菌发酵液应用于培养人工窖泥、提高窖泥品质或无窖泥生产浓香风味白酒。
[0033]更进一步，固定化复合己酸菌生产培养人工窖泥通过以下步骤实现：选取质量较好的泥土，蒸煮后，加一定量水本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种固定化复合己酸菌的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)纯种己酸菌液的制备：将己酸菌种子液按培养基5％
‑
10％(v/v)的接种量接种于乙醇乙酸钠培养基内，装液量80％
‑
95％，33℃
‑
35℃下静置培养5
‑
7天；(2)酵母菌液的制备：添加耐高温活性干酵母于YPD培养基内,恒温下摇床内培养，然后转接于YPD培养基相同条件下放大培养；(3)复合己酸菌液的制备：将纯种己酸菌液与酵母菌液进行混合；(4)吸附载体的制备：取杏鲍菇，切碎，洗净，灭菌即得；(5)复合己酸菌的吸附：将处理好的吸附载体浸入制备好的复合己酸菌液，进行充分吸附；(6)包埋液的制备：将琼脂溶于水中，加热融化，灭菌即得；(7)将已吸附己酸菌的杏鲍菇载体均匀浸入包埋液中，凝固后得到固定化复合己酸菌。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述步骤(1)中，所述己酸菌为速生梭菌JSJ
‑
1CCTCC M 2020881，为专利ZL202110311823....

【专利技术属性】
技术研发人员：方尚玲，陈茂彬，晋湘宜，殷想想，占成，
申请(专利权)人：湖北工业大学，
类型：发明
国别省市：