基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法、应用及固定化酶技术

本发明专利技术涉及生物工程技术领域，具体涉及基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法、应用及固定化酶。该方法将基底蛋白的核苷酸序列和目标蛋白的核苷酸序列与断裂型内含肽两端的核苷酸序列分别连接，连接后分别进行融合表达；将融合表达后的基底蛋白制备成酶杂化纳米花，使基底蛋白被固定化；将固定化后的基底蛋白与融合表达后的目标蛋白混合，通过断裂型内含肽的反式自剪接功能直接进行特异性自组装，使目标蛋白被间接固定化。该方法将断裂型内含肽和酶杂化纳米花相结合，可将目标蛋白的纯酶或者粗酶液直接与固定化的基底蛋白结合，避免对蛋白构象的影响，高效便捷。该方法制备玉米赤霉烯酮降解的固定化酶，具有良好稳定性、催化效率和重复利用率。重复利用率。重复利用率。

【技术实现步骤摘要】
基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法、应用及固定化酶


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体涉及基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法、应用及固定化酶。

技术介绍

[0002]酶是一类重要的生物催化剂，具有催化效率高、底物特异性强以及反应条件温和等特点，被广泛应用于医药、化工、食品和环境等领域，但是许多天然酶的大规模制备比较困难，并且较难回收再使用，而且稳定性和对环境的敏感性都极大地制约了生物酶的大规模应用。为了提高酶的催化活性和稳定性，各种酶固定化技术不断涌现。酶固定后，与固定基质间相互作用可能会改变酶催化活性中心以外的空间结构，因此酶的固定化技术不仅可以改善酶的高效专一的催化活性，而且可以实现酶蛋白的重复回收，提高生物酶的利用率，降低酶使用成本，符合可持续发展战略的要求，酶固定化是酶工程发展的必然趋势。
[0003]近年来，酶杂化纳米花作为一种新型的酶固定化技术得到了广泛的研究和报道，它是利用生物矿化的原理通过自组装法实现酶的一步固定化。跟其他的酶固定化技术相比，酶杂化纳米制备简单具有高比表面积，能显著提升酶的稳定性、催化效率以及重本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法，其特征在于，包括以下步骤：将基底蛋白的核苷酸序列和目标蛋白的核苷酸序列与一种断裂型内含肽的两端核苷酸序列分别连接，连接后分别进行融合表达，得到融合表达后的基底蛋白和目标蛋白；将融合表达后的基底蛋白制备成酶杂化纳米花，使所述基底蛋白被固定化；将固定化后的所述基底蛋白与融合表达后的所述目标蛋白的纯酶或粗酶液混合，通过所述断裂型内含肽的反式自剪接功能直接进行特异性自组装，使所述目标蛋白被间接固定化。2.根据权利要求1所述一种基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法，其特征在于，所用断裂型内含肽包括N端片段和C端片段；所述基底蛋白的核苷酸序列与所述N端片段的核苷酸序列连接，所述目标蛋白的核苷酸序列与所述C端片段的核苷酸序列连接，或者，所述基底蛋白的核苷酸序列与所述C端片段的核苷酸序列连接，所述目标蛋白的核苷酸序列与所述N端片段的核苷酸序列连接。3.根据权利要求2所述一种基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法，其特征在于，所述断裂型内含肽的所述N端片段和所述C端片段分别带有0
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6个外显肽氨基酸。4.根据权利要求3所述一种基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法，其特征在于，所述断裂型内含肽的所述N端片段和所述C端片段分别带有5个外显肽氨基酸。5.根据权利要求1所述一种基于蛋白反式剪接的纳米固定化方法，其特征在于，所述断裂型内含肽包括gp41
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1、gp41
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8、NrdJ
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【专利技术属性】
技术研发人员：张桂敏，周晨，卢争辉，向腊，巫攀，
申请(专利权)人：湖北大学，
类型：发明
国别省市：