高产酚酸分枝横梗霉及其在清香型小曲白酒中的应用制造技术

本发明专利技术公开了高产酚酸分枝横梗霉及其在清香型小曲白酒中的应用，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年4月29日，保藏编号为CCTCC NO：M2022526。本发明专利技术的高产酚酸分枝横梗霉，可提升清香型小曲白酒中酚酸含量84％，并一定程度上提升了白酒质量。该分枝横梗霉是从种曲中分离出来，可用于白酒生产，为提升小曲白酒品质提供了新的功能菌株。为提升小曲白酒品质提供了新的功能菌株。为提升小曲白酒品质提供了新的功能菌株。

【技术实现步骤摘要】
高产酚酸分枝横梗霉及其在清香型小曲白酒中的应用


[0001]本专利技术涉及生物工程
，具体为高产酚酸分枝横梗霉及其在清香型小曲白酒中的应用。

技术介绍

[0002]酚酸是一类含有酚环的有机酸，其苯环上带有多个
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OH以及
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COOH，具有抗炎、抗病毒、抗菌、抗癌和抗氧化等生物学功能。在饮料酒中，酚酸属于健康因子，可以发挥一定的保健效果。2007年，郑伟提出不同香型的白酒中含有不同量的酚酸，其中酱香型白酒中含量最高，主要起到呈香的作用。2016年，黄蕴利等提出白酒中含有酚酸，并且简述了其具有抗氧化，防癌，抗血小板聚集，抑制血小板血栓素A2的生成，增强前列腺素活性，镇痛等作用。2019年，王戎等使用固相萃取的前处理方法对五粮液原酒处理，对样品中的酚酸化合物或其酯类化合物进行检测。其中白酒中的酚酸含量为1489.8μg/L，酚酸酯类化合物含量为1183.9μg/L。2020年，吴子阳等采用固相微萃取结合高效液相色谱的方法对市面上浓、酱、清以及芝麻香型共29种商品酒中阿魏酸、没食子酸、对香豆酸、丁香酸和(+)
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儿茶素水合物5种酚类活性物质进行了定量分析，在不同香型白酒中，5种酚类活性化合物中，对香豆酸的平均含量最高，阿魏酸的平均含量最低，除(+)
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儿茶素水合物外，其余4种酚类活性化合物均在4种不同香型的商品白酒中检出。5种酚酸的总量排序为：酱香型＞清香型＞芝麻香型＞浓香型。
[0003]白酒中酚酸的来源，目前尚未开展全面系统地探究，就目前的报道来看主要来源有两个：一是直接来源于白酒的酿酒原料。酚酸广泛存在于大麦、麦麸、大米、玉米等禾谷科作物中，其中阿魏酸的含量最丰富，其它有特征代表性的酚酸包括没食子酸、对香豆酸、丁香酸、儿茶素等，这些物质通过可以通过酿造过程部分进入酒体；其次来源于发酵过程中微生物的分解作用。如高粱中含有单宁，尤其壳内含量较高。发酵过程中，单宁可以在单宁酶的作用下释放出游离的没食子酸。
[0004]近几年生产健康白酒成为热门，已发现有益健康的成分130多种。酚酸作为白酒中重要的健康成分，除了具有广泛的生理活性外，其中阿魏酸还可作为香兰素、愈创木酚等芳香物质的前体物，进一步增强酒体风味。
[0005]在白酒生产过程中，微生物发酵产生酚酸主要是通过产生阿魏酸酯酶。因为植物细胞壁中含有丰富的酚酸，它们以酯键方式与半纤维素支链形成致密网状交联结构，使植物细胞壁中纤维素和半纤维素的有效降解受到限制。而阿魏酸酯酶可以协同木聚糖酶有效降解致密网状交联结构，打断羟基化肉桂酸与糖间的酯键，从而释放出酚酸，同时促进半纤维素、木质素与纤维素的降解。目前已报道的产阿魏酸酯酶菌株大多是从土壤中筛选得到，从白酒生产过程中筛选的较少，导致白酒发酵中产阿魏酸酯酶的微生物资源仍未被充分开发。2017年，李兵等通过基因的克隆表达及密码子优化，获得了一株性能优良、高产阿魏酸酯酶的毕赤酵母工程菌，而后将该酶应用于啤酒酿造过程中，成功改善了麦汁过滤性能和抗氧化能力，并提高了小麦啤酒典型风味物质4
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乙烯基愈创木酚的含量。2018年李翠翠等
从黄酒麦曲中筛选得到一株高产阿魏酸酯酶的枝状枝孢霉菌，产阿魏酸酯酶活力最高可达175.4U/L，并将其添加到黄酒酿造过程中，对黄酒阿魏酸含量的提高起到了积极作用。说明在糖化或发酵过程中添加筛选的产阿魏酸酯酶菌株是提高原酒中酚酸含量的有效措施。
[0006]鉴于酚酸具有一定的健康功能，其在白酒行业中具有较好的应用潜力。因此，有必要对产阿魏酸酯酶的菌株进行筛选并利用其提升清香型小曲白酒中酚酸的含量，以达到提升白酒抗氧化等生物性能的效果。

技术实现思路

[0007]本专利技术的目的在于提供一株分枝横梗霉，所述分枝横梗霉(Lichtheimia sp.)M198对白酒中酚酸含量具有提升作用，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：M2022526，保藏日期是2022年4月29日，保藏地址为中国，武汉，武汉大学。
[0008]本专利技术公开的分枝横梗霉M198菌株从清香型小曲白酒种曲中分离获得。该菌株在PDA平板上培养5d的菌落形态特征是：菌丝白色且丰富，菌落质地疏松，呈棉絮状，蔓延性强。
[0009]本专利技术涉及的分枝横梗霉(Lichtheimia sp.)M198是按照如下方法获得的：
[0010]以实验室菌种库中保存的213株与清香型小曲白酒生产相关的真菌和细菌作为产阿魏酸酯酶筛选来源。首先通过筛选培养基进行初筛，筛选出产阿魏酸酯酶的菌株；再利用麸皮培养基对产酶菌株进行培养，培养结束后测定其阿魏酸酯酶活力，筛选出包括横梗霉(Lichtheimia sp.)M198在内的酶活高的菌株。
[0011]本专利技术还公开了包含分枝横梗霉M198的酿酒酒曲在清香型小曲原酒生产中的应用。所述高产酚酸分枝横梗霉经培养后接种至麸皮培养基中，分别放置在30℃
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37℃的培养箱中培养，5
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7天后取出在45℃烘箱中烘干水分，得到纯种麸皮菌剂；然后与桂花曲混合后制备成微生物复配曲进行发酵酿造。
[0012]纯种麸皮菌剂与桂花曲按照重量比1:5.5比例混合制备成微生物复配曲。
[0013]与现有技术相比，本专利技术具有如下有效效果：本专利技术的高产酚酸的分枝横梗霉，可提升清香型小曲白酒中酚酸含量84％，并一定程度上提升了白酒质量。该分枝横梗霉是从种曲中分离出来，可用于白酒生产，为提升小曲白酒品质提供了新的功能菌株。
附图说明
[0014]图1为实施例1绘制的标准曲线图；
[0015]图2为实施例1中阿魏酸酯酶酶活测定结果。
具体实施方式
[0016]应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0017]实施例1
[0018]本实施例提供了一株分枝横梗霉的获取方法，包括如下步骤：
[0019]1.产阿魏酸酯酶菌株的筛选
[0020]1.1培养基的制备
[0021]①
马铃薯琼脂固体培养基(PDA固体培养基)
[0022]马铃薯200g，蔗糖20g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然，121℃灭菌20min。
[0023]②
LB固体培养基
[0024]胰蛋白胨1g，酵母提取物0.5g，氯化钠1g，琼脂20g，蒸馏水1000mL，pH自然，121℃灭菌20min。
[0025]③
筛选培养基
[0026]NaCl 0.3g，(NH4)2SO
4 1.3g，MgSO4·
7H2O 0.3g，K2HPO
4 0.3g，琼脂粉20g，阿魏酸乙酯(称取10g溶解于30mL二甲基甲酰胺)3mL，蒸馏水1000mL，pH自然，121℃灭菌20m本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种分枝横梗霉(Lichtheimia sp.)M198，其特征在于，该菌株保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏日期为2022年4月29日，保藏编号为CCTCC NO：M2022526。2.权利要求1所述分枝横梗霉在提升白酒酚酸含量中的应用。3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，所述白酒为清香型小曲白酒。4.根据权利要求2或3所述的应用，其特征在于，将包含有分枝横梗霉的微生物菌剂与桂花曲混合后进行发酵酿造。5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，包含有分枝横梗霉的微生物菌剂与桂花曲按照重量比1:5.5比例混合制备成微生物复配曲，用于发酵酿造。6.一种微生物菌剂，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：李锐，陈申习，江威，李群，杨强，
申请(专利权)人：劲牌有限公司，
类型：发明
国别省市：