糖类的纯化制造技术

本发明专利技术涉及用于纯化细菌多糖的方法，特别是用于从产生多糖的细菌的细胞裂解物中去除杂质的方法，其包括：a)酸水解；b)第一超滤/渗滤

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】糖类的纯化
[0001]序列表引用
[0002]本申请经由EFS
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[0003]本专利技术涉及用于纯化细菌多糖，特别是用于从产生多糖的细菌的细胞裂解物中去除杂质的方法。

技术介绍

[0004]细菌多糖，特别是荚膜多糖，是在细菌表面发现的重要免疫原，与多种细菌性疾病有关。这导致它们成为疫苗设计的重要组成部分。它们已证明可用于引发免疫反应，尤其是与载体蛋白连接时。
[0005]细菌多糖通常通过细菌(例如链球菌(Streptococci)(例如肺炎链球菌(S.pneumoniae)、化脓性链球菌(S.pyogenes)、无乳链球菌(S.agalactiae)或C和G组链球菌)、葡萄球菌(Staphylococci)(例如金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus))、嗜血杆菌(Haemophilus)(例如流感嗜血杆菌(Haemophilus influenzae))、奈瑟菌(Neisseria)(例如脑膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis))、埃希氏杆菌(Escherichia)(例如大肠杆菌(Escherichia coli))和克雷伯菌(Klebsiella)(例如肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae))的发酵产生。
[0006]通常，细菌多糖是使用复合培养基中的分批培养、给料分批培养或连续培养来产生的。
[0007]需要可以用于大规模生产发酵后细菌多糖的稳定且有效的纯化工艺。
[0008]还需要一种简化的纯化工艺以降低细菌裂解物中的可溶性蛋白质含量并消除当前纯化工艺的低效率以产生适合掺入疫苗中的基本纯化的细菌糖类。

技术实现思路

[0009]本专利技术提供一种用于从包括源自细菌的糖类和发酵后污染物的溶液中纯化所述糖类的方法，其中所述方法包括以下步骤：(a)酸水解；(b)第一超滤/渗滤
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(UFDF
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1)；(b)碳过滤；(c)色谱法；和(d)第二超滤/渗滤
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(UFDF
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2)。在一个实施例中，所述方法进一步包括在步骤(a)的酸水解之后的絮凝步骤。
[0010]在上述方法的另一个实施例中，所述细菌是革兰氏阳性细菌。在一个方面中，细菌是链球菌属(Streptococcus)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、肠球菌属(Enterococci)、芽孢杆菌属(Bacillus)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、李斯特菌属(Listeria)、丹毒丝菌属(Erysipelothrix)或梭菌属(Clostridium)中的任一种。在另一方面中，细菌是肺炎链球菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、C组和G组链球菌或金黄色葡萄球菌中的任一种。
[0011]在上述方法的另一个实施例中，所述细菌是革兰氏阴性细菌。在一个方面中，细菌是嗜血杆菌属、奈瑟菌属、埃希氏杆菌属或克雷伯菌属中的任一种。在另一方面中，细菌是流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、大肠杆菌或肺炎克雷伯菌。
附图说明
[0012]图1描绘了O1V1变异体在培养液中释放后的K
p O
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Ag(顶部)和纯化的K
p O
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Ag(底部)的SEC
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HPLC色谱图。
[0013]图2描绘了O1V2变异体在培养液中释放后的K
p O
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Ag(顶部)和纯化的K
p O
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Ag(底部)的SEC
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HPLC色谱图。
[0014]图3描绘了O2V1变异体在培养液中释放后的K
p O
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Ag(顶部)和纯化的K
p O
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Ag(底部)的SEC
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HPLC色谱图。
[0015]图4描绘了O2V2变异体在培养液中释放后的K
p O
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Ag(顶部)和纯化的K
p O
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Ag(底部)的SEC
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HPLC色谱图。
具体实施方式
[0016]本专利技术提供一种用于从包括源自细菌的糖类和发酵后污染物的溶液中纯化所述糖类的方法，其中所述方法包括以下步骤：(a)酸水解；(b)第一超滤/渗滤
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(UFDF
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1)；(b)碳过滤；(c)色谱法；和(d)第二超滤/渗滤
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(UFDF
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2)。
[0017]在一个实施例中，所述方法进一步包括在步骤(a)的酸水解之后的絮凝步骤。
[0018]在上述方法的另一个实施例中，步骤(c)的色谱法包括IEX膜色谱法或疏水相互作用色谱(HIC)或两者。
[0019]在上述方法的另一个实施例中，所述细菌是革兰氏阳性细菌。在一个方面中，细菌是链球菌属、葡萄球菌属、肠球菌属、芽孢杆菌属、棒状杆菌属、李斯特菌属、丹毒丝菌属或梭菌属中的任一种。在另一方面中，细菌是肺炎链球菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、C组和G组链球菌或金黄色葡萄球菌中的任一种。
[0020]在上述方法的另一个实施例中，所述细菌是革兰氏阴性细菌。在一个方面中，细菌是嗜血杆菌属、奈瑟菌属、埃希氏杆菌属或克雷伯菌属中的任一种。在另一方面中，细菌是流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、大肠杆菌或肺炎克雷伯菌。
[0021]在另一方面，细菌是包括具有选自以下中的任一者的结构的糖类的大肠杆菌：式O1、式O1A、式O1B、式O1C、式O2、式O3、式O4、式O4:K52、式O4:K6、式O5、式O5ab、式O5ac、式O6、式O6:K2；K13；K15、式O6:K54、式O7、式O8、式O9、式O10、式O11、式O12、式O13、式O14、式O15、式O16、式O17、式O18、式O18A、式O18ac、式O18A1、式O18B、式O18B1、式O19、式O20、式O21、式O22、式O23、式O23A、式O24、式O25、式O25a、式O25b、式O26、式O27、式O28、式O29、式O30、式O32、式O33、式O34、式O35、式O36、式O37、式O38、式O39、式O40、式O41、式O42、式O43、式O44、式O45、式O45、式O45rel、式O46、式O48、式O49、式O50、式O51、式O52、式O53、式O54、式O55、式O56、式O57、式O58、式O59、式O60、式O61、式O62、式62D1、式O63、式O64、式O65、式O66、式O68、式O69、式O70、式O71、式O73、式O73、式O74、式O75、式O76、式O77、式O78、式O本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种用于在发酵后从包括源自细菌的糖类和污染物的溶液中纯化所述糖类的方法，其中所述方法包括以下步骤：a)酸水解；b)第一超滤/渗滤
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(UFDF
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1)；b)碳过滤；c)色谱法；和d)第二超滤/渗滤
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(UFDF
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2)。2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤(a)的所述酸水解之后的絮凝步骤。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中步骤(c)的所述色谱法包括IEX膜色谱法或疏水相互作用色谱(HIC)或两者。4.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述细菌是革兰氏阳性细菌。5.根据权利要求4所述的方法，其中所述细菌是链球菌属、葡萄球菌属、肠球菌属、芽孢杆菌属、棒状杆菌属、李斯特菌属、丹毒丝菌属或梭菌属中的任一种。6.根据权利要求5所述的方法，其中所述细菌是肺炎链球菌、化脓性链球菌、无乳链球菌、C组和G组链球菌或金黄色葡萄球菌中的任一种。7.根据权利要求1至3中任一权利要求所述的方法，其中所述细菌是革兰氏阴性细菌。8.根据权利要求7所述的方法，其中所述细菌是嗜血杆菌属、奈瑟菌属、埃希氏杆菌属或克雷伯菌属中的任一种。9.根据权利要求8所述的方法，其中所述细菌是流感嗜血杆菌、脑膜炎奈瑟菌、大肠杆菌或肺炎克雷伯菌。10.根据权利要求9所述的方法，其中所述细菌是包括具有选自以下中的任一者的结构的糖类的大肠杆菌：式O1、式O1A、式O1B、式O1C、式O2、式O3、式O4、式O4:K52、式O4:K6、式O5、式O5ab、式O5ac、式O6、式O6:K2；K13；K15、式O6:K54、式O7、式O8、式O9、式O10、式O11、式O12、式O13、式O14、式O15、式O16、式O17、式O18、式O18A、式O18ac、式O18A1、式O18B、式O18B1、式O19、式O20、式O21、式O22、式O23、式O23A、式O24、式O25、式O25a、式O25b、式O26、式O27、式O28、式O29、式O30、式O32、式O33、式O34、式O35、式O36、式O37、式O38、式O39、式O40、式O41、式O42、式O43、式O44、式O45、式O45、式...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈伟，朱玲，N，
申请(专利权)人：辉瑞公司，
类型：发明
国别省市：