腺相关病毒制剂制造技术

本公开涉及用于稳定腺相关病毒的水性组合物，以及包含该水性组合物的腺相关病毒制剂。本公开的水性组合物可以有效地减少AAV制剂存储期间的效力损失。本公开的腺相关病毒制剂可以在室温下存储一段时间后仍保持良好的稳定性。稳定性。稳定性。

【技术实现步骤摘要】
腺相关病毒制剂


[0001]本公开涉及用于稳定腺相关病毒的水性组合物，以及包含该水性组合物的腺相关病毒制剂。

技术介绍

[0002]腺相关病毒(Adeno
‑
associated virus，AAV)是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在20
‑
26nm之间，含有大小在4.7kb左右的线性单链DNA基因组。重组腺相关病毒(rAAV)是在非致病的野生型AAV基础上进一步改造而成的基因载体，由于其安全性好、宿主细胞范围广、免疫原性低、在体内表达外源基因时间长等特点，被视为最有前途的基因转移载体之一，在世界范围内的基因治疗研究中得到了广泛的应用。
[0003]期望用于递送目的基因以治疗疾病的AAV制剂具有良好的稳定性，从而使制造、包装和储存过程期间的AAV效力的损失最小化。合适溶剂的选择是保证AAV制剂稳定储存的关键。此外，AAV制剂的储存条件优选符合药品的市场化要求，最好不采用苛刻的冷冻保存条件，能够在室温条件下储存而保持AAV制剂足够的生物活性。

技术实现思路

[0004]鉴于本领域的上述需求，本公开的目的之一在于提供一种用于稳定AAV的水性组合物，其可以有效地减少AAV制剂存储期间的效力损失。本公开的目的还在于提供一种AAV制剂，其可以在室温下储存一段时间后仍保持良好的稳定性。
[0005]在第一方面，本公开提供一种水性组合物，其包含：选自Tris
‑
HAc、KH2PO4‑
Na3C6H5O7或它们的组合的缓冲液；选自F68、PS20、PS80或它们的组合的表面活性剂；钠盐或钾盐；选自Fe
2+
、Ca
2+
和Mg
2+
中的一种以上；以及可选的大分子聚合物。
[0006]在一个实施方式中，水性组合物中缓冲液的浓度为2
‑
100mM，优选10
‑
30mM，更优选20mM。
[0007]在一个实施方式中，水性组合物中表面活性剂的浓度为0.0001％～0.5％(w/v)，优选0.005％
‑
0.05％(w/v)，更优选0.01％(w/v)。
[0008]在一个实施方式中，水性组合物中钠盐或钾盐的浓度为100
‑
800mM，优选250
‑
400mM，更优选350mM。
[0009]在一个实施方式中，水性组合物中Fe
2+
、Ca
2+
或Mg
2+
的浓度为0.01
‑
5mM，优选0.1
‑
2mM，更优选1mM。
[0010]在一个实施方式中，水性组合物中大分子聚合物的浓度为0.1％
‑
5％(w/v)，优选0.5％
‑
3％(w/v)，更优选2％(w/v)。
[0011]在一个实施方式中，水性组合物还包含糖类。在一个实施方式中，糖类包括蔗糖、海藻糖、山梨醇、甘露醇、葡萄糖、乳糖、半乳糖、麦芽糖和果糖。
[0012]在一个优选实施方式中，水性组合物中糖类的浓度为0.1％～10％(w/v)，优选1％
‑
5％(w/v)，更优选2％(w/v)。
[0013]在一个优选实施方式中，糖类为蔗糖。
[0014]在一个实施方式中，水性组合物的pH值为4.5
‑
8.5，优选7.0～8.5，更优选7.0～7.5。
[0015]在一个实施方式中，钠盐选自氯化钠、硫酸钠、硝酸钠、磷酸钠和碳酸钠，优选氯化钠。在一个实施方式中，钾盐为氯化钾。
[0016]在一个实施方式中，大分子聚合物选自聚乙二醇、白蛋白、葡聚糖、甲基纤维素、羟丙纤维素、聚维酮和海藻酸钠，优选白蛋白。
[0017]在第二方面，本公开提供一种腺相关病毒制剂，其包含：腺相关病毒以及根据第一方面的水性组合物。
[0018]在一个实施方式中，腺相关病毒的滴度为1
×
108至5
×
10
14
vg/mL。
[0019]在一个实施方式中，腺相关病毒为重组腺相关病毒(rAAV)。
[0020]在一个实施方式中，腺相关病毒制剂为液体制剂、冷冻制剂或冻干制剂。
[0021]在第三方面，本公开提供钙离子或镁离子用于稳定腺相关病毒制剂的用途。
[0022]在一个实施方式中，钙离子或镁离子用于稳定腺相关病毒制剂的用途包括：用于维持腺相关病毒制剂中腺相关病毒的衣壳滴度；用于维持腺相关病毒制剂中腺相关病毒的基因组滴度；用于维持腺相关病毒制剂中腺相关病毒的活性；用于维持腺相关病毒制剂中腺相关病毒的单体百分比；和/或用于提高腺相关病毒制剂中腺相关病毒的蛋白变性温度。
[0023]在第四方面，本公开提供一种治疗疾病的方法，包括向有需要的受试者施用治疗有效量的根据第二方面的腺相关病毒制剂。
[0024]在一个实施方式中，腺相关病毒制剂通过全身途径或局部途径施用，例如静脉内施用、肌内施用、皮下施用、经口施用、局部接触、腹膜内施用和病灶内施用。
[0025]在一个优选实施方式中，腺相关病毒制剂通过全身途径施用，例如静脉内施用。
附图说明
[0026]图1示出了实施例1中样品A至N在37℃10d(37℃下保持10天)条件下的衣壳滴度(Fortebio)和基因组滴度(qPCR)的测定结果。
[0027]图2示出了实施例1中样品A至N在37℃10d条件下的蛋白变性温度(Tonset初始变性温度和Tm变性中点温度)的测定结果。
[0028]图3示出了实施例1中样品A至N在37℃10d条件下的SEC(病毒单体相对百分比)的测定结果。
[0029]图4示出了实施例1中样品A至N在37℃10d条件下的相对体外活性的测定结果。
[0030]图5示出了实施例2中样品J、O至U在37℃10d条件下的衣壳滴度(Fortebio)和基因组滴度(qPCR)的测定结果。
[0031]图6示出了实施例2中样品J、O至T在37℃10d条件下的蛋白变性温度(Tonset初始变性温度和Tm变性中点温度)的测定结果。
[0032]图7示出了实施例2中样品J、O至T在37℃10d条件下的SEC(病毒单体相对百分比)的测定结果。
[0033]图8示出了实施例2中样品J、O至U在37℃10d条件下的相对体外活性的测定结果。
[0034]图9示出了实施例3中样品1至7在37℃10d条件下的衣壳滴度(Fortebio)和基因组
滴度(qPCR)的测定结果。
[0035]图10示出了实施例3中样品1至7在37℃10d条件下的相对体外活性的测定结果。
[0036]图11示出了实施例3中样品1至5和7在37℃10d条件下的SEC(病毒单体相对百分比)的测定结果。
[0037]图12示出了本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种水性组合物，其包含：选自Tris
‑
HAc、KH2PO4‑
Na3C6H5O7或它们的组合的缓冲液；选自F68、PS20、PS80或它们的组合的表面活性剂；钠盐或钾盐；选自Fe
2+
、Ca
2+
和Mg
2+
中的一种以上；以及可选的大分子聚合物。2.根据权利要求1所述的水性组合物，其中，缓冲液的浓度为2
‑
100mM，优选10
‑
30mM；表面活性剂的浓度为0.0001％～0.5％(w/v)，优选0.005％
‑
0.05％(w/v)；钠盐或钾盐的浓度为100
‑
800mM，优选250
‑
400mM；Fe
2+
、Ca
2+
或Mg
2+
的浓度为0.01
‑
5mM，优选0.1
‑
2mM；和/或可选的大分子聚合物的浓度为0.1％
‑
5％(w/v)，优选0.5％
‑
3％(w/v)。3.根据权利要求1或2所述的水性组合物，其中，所述水性组合物还包含糖类，优选地，所述糖类的浓度为0.1％～10％(w/v)，优选1％
‑
5％(w/v)。4.根据权利要求1或...

【专利技术属性】
技术研发人员：岳占龙，肖啸，郑静，郑浩，刘素丽，陈晨，袁龙辉，李小灵，王新涛，杜增民，蒋威，吴侠，
申请(专利权)人：上海信致医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：