【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】阿司匹林化合物在增加核酸表达中的新型用途
[0001]本公开涉及阿司匹林(aspirin)化合物在促进外源核酸递送和/或表达中的用途。
技术介绍
[0002]多年来，遗传病症和基因相关疾病一直是导致高死亡率和生活质量下降的原因。一些先天性异常表现得很早，并且这些儿童的生存希望很小，这给他们的家庭带来了很大的痛苦，因为治疗选择有限，而且他们几乎没有办法改变此类疾病。基因疗法是一种新型的分子医学形式，其涉及将全功能外源基因转导到个体的细胞或组织中，以替代有缺陷的基因并改变遗传性疾病。基因疗法有可能纠正如血友病、家族性高胆固醇血症、帕金森氏病(Parkinson
′
s disease)和阿尔茨海默氏病(Alzheimer
′
s disease)等遗传病症。
[0003]基因疗法虽然有其优点，但也存在如表达水平低、表达时间短等缺点。因此，需要克服现有外源基因转导技术(尤其是病毒转导技术，更优选地AAV转导技术)存在的问题，并提供一种用于促进外源基因表达的方法。
技术实现思路
[0004]一方面，本公开提供了一种对细胞进行预备以递送外源核酸的方法，所述方法包括：在将所述外源核酸递送到所述细胞之前或同时向所述细胞施用阿司匹林化合物，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者可以在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA。
[0005]一方面，本公开提供了一种在细胞中表达外源核酸的方法，所述方法包括：在适于表达的条件下将所述外源核酸递送到所述细胞，其中所述细胞已经或正在同时...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种对细胞进行预备以递送外源核酸的方法，所述方法包括：在将所述外源核酸递送到所述细胞之前或同时向所述细胞施用阿司匹林化合物，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA。2.一种在细胞中表达外源核酸的方法，所述方法包括：在适于表达的条件下将所述外源核酸递送到所述细胞，其中所述细胞已经或正在同时被施用阿司匹林化合物；并且其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA。3.一种在细胞中表达外源核酸的方法，所述方法包括：a)向所述细胞施用阿司匹林化合物；以及b)在适于表达的条件下将所述外源核酸递送到所述细胞，其中所述步骤a)在所述步骤b)之前或与所述步骤b)同时进行，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA。4.一种增加细胞中的外源核酸的表达水平的方法，所述方法包括：在适于表达的条件下，在将所述外源核酸递送到所述细胞之前或同时向所述细胞施用阿司匹林化合物，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA，并且由此增加所述外源核酸的所述表达水平，相比于未施以所述阿司匹林化合物的对照细胞中获得的对照表达水平而言。5.一种增加细胞中的外源核酸的表达水平的方法，所述方法包括：在适于表达的条件下将所述外源核酸递送到所述细胞，其中所述细胞已经或正在同时施用阿司匹林化合物，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA，并且由此增加所述外源核酸的所述表达水平，相比于未施以所述阿司匹林化合物的对照细胞中获得的对照表达水平而言。6.一种增加细胞中的外源核酸的表达水平的方法，所述方法包括：a)向所述细胞施用阿司匹林化合物；以及b)在适于表达的条件下将所述外源核酸递送到所述细胞，其中所述步骤a)在所述步骤b)之前或与所述步骤b)同时进行，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA，并且其中与在不经过所述步骤a)的对照细胞中获得的对照表达水平相比，所述外源核酸的所述表达水平增加。7.一种延长细胞中的外源核酸的表达持续时间的方法，所述方法包括：在将所述外源核酸递送到所述细胞之前或同时向所述细胞施用阿司匹林化合物，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA，并且其中与在未施用所述阿司匹林化合物的对照细胞中获得的对照表达持续时间相比，所
述细胞中的所述外源核酸的所述表达持续时间增加。8.一种延长细胞中的外源核酸的表达持续时间的方法，所述方法包括：在适于表达的条件下将所述外源核酸递送到所述细胞，其中所述细胞已经或正在同时施用阿司匹林化合物，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA，并且其中与在未施用所述阿司匹林化合物的对照细胞中获得的对照表达持续时间相比，所述细胞中的所述外源核酸的所述表达持续时间增加。9.一种延长细胞中的外源核酸的表达持续时间的方法，所述方法包括：a)向所述细胞施用阿司匹林化合物；以及b)在适于表达的条件下将所述外源核酸递送到所述细胞，其中所述步骤a)在所述步骤b)之前或与所述步骤b)同时进行，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA，并且由此延长所述外源核酸的所述表达持续时间，相比于在未施用阿司匹林化合物的对照细胞中获得的对照表达持续时间而言。10.根据权利要求1
‑
9中任一项所述的方法，其中所述细胞在体外、离体或在体内。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的方法，其中在所述递送所述核酸之前至少1小时、2小时、3小时、4小时、5小时、6小时、7小时、8小时、9小时、10小时、12小时、18小时、24小时、1.5天、2天、3天、4天、5天、6天或7天向所述细胞施用所述阿司匹林化合物。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的方法，其中在所述递送所述核酸之前向所述细胞施用一次或重复施用(例如，两次、三次、四次等)所述阿司匹林化合物。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的方法，其中以足以使所述细胞或所述受试者中的所述外源核酸的表达增加至少50％、60％、70％、80％、90％、100％、150％、200％、250％、300％或更多的量施用所述阿司匹林化合物。14.根据权利要求4
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6和10
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13中任一项所述的方法，其中所述表达水平基于mRNA水平或蛋白质水平。15.根据权利要求4
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6和10
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14中任一项所述的方法，其中所述表达水平增加至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、120％、150％、180％、200％、220％、250％、280％、300％、400％、500％、600％、700％、800％或900％。16.根据权利要求1
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6和10
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15中任一项所述的方法，其中所述表达水平是在所述外源核酸的表达持续时间内确定的。17.根据权利要求7
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9中任一项所述的方法，其中所述表达持续时间是所述外源核酸以可检测水平或以生理学上有效的水平表达的时间段。18.根据权利要求7
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9中任一项所述的方法，其中所述表达持续时间延长至少1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天或10天。19.根据权利要求1
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18中任一项所述的方法，其中所述外源核酸包括病毒载体、质粒或外泌体，或被包含在病毒载体、质粒或外泌体内。
20.根据权利要求19所述的方法，其中所述病毒载体包含腺相关病毒(AAV)载体。21.根据权利要求20所述的方法，其中所述AAV载体包含AAV病毒颗粒。22.根据权利要求1
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21中任一项所述的方法，其中所述外源核酸包含编码序列，所述编码序列编码感兴趣的蛋白质或其一部分，或编码功能性RNA或其一部分。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述感兴趣的蛋白质包含治疗蛋白、免疫原性蛋白、报告蛋白、核酸酶或治疗靶蛋白，和/或所述功能性RNA包含反义寡核苷酸、核酶、影响剪接体介导/原始剪接的RNA、干扰RNA(RNAi)或其它非翻译功能性RNA，如向导RNA和单向导RNA。24.根据权利要求23所述的方法，其中：所述治疗蛋白选自由以下组成的组：SMN1、NAGLU、SGSH、IDS、FVIII、FIX、BTK、ABCD1、ACADVL、AR、HBB、SCN1A、CFTR、CSF2RA、IL2AG、PHA、STK11、PIGA、OTC、NAGS、DMPK、CNBP、ACADM、GNAS、FBN1、LIPA、SLC7A7、HADHA、GHR、IDV、ALPL、SLC25A15、HTT、HCS、NOTCH3、ALDOB、ATP7B、GAA、GCDH、SLC12A3、GBA、MEFV、GLA、CLCN1 NR0B1、ASS1、SLC25A13、SLC22A5、SCN5A、BTD、ACAT1、ARG1、CYP21A2、嵌合抗原受体(CAR)、抗体(例如，单克隆或双特异性或多特异性)、胰岛素、胰高血糖素样肽
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1、肽激素、生长因子、促红细胞生成素(EPO)、细胞因子、凝血因子、抗血友病因子、干扰素、Fc融合蛋白(如CTLA
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4Fc融合、VEGFR Fc融合)和治疗酶(例如，溶酶体水解酶和硫酸酯酶)；所述免疫原性蛋白选自由以下组成的组：来自正粘病毒(例如，流感病毒)、慢病毒(例如，HIV、SIV)、沙粒病毒(拉沙热病毒)、痘病毒(例如，牛痘)、黄病毒(例如，黄热病病毒)、丝状病毒(埃博拉病毒)、布尼亚病毒(RVFV、CCHF或SFS病毒)、冠状病毒(例如，SARS、MERS或COVID
‑
19)、脊髓灰质炎病毒、疱疹病毒(CMV、EBV、HSV)、腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、白喉毒素、百日咳和肝炎病毒(例如，HAV、HBV或HCV)的免疫原性蛋白；所述核酸酶包含锌指核酸酶(ZFN)、转录激活因子样效应子核酸酶(TALEN)或Cas家族蛋白(如Cas1、Cas1B、Cas2、Cas3、Cas4、Cas5、Cas6、Cas7、Cas8、Cas9(也称为Csn1和Csx12)、Cas 10、Cas 11、Cas12、Cas13、Csy1、Csy2、Csy3、Cse1、Cse2、Csc1、Csc2、Csa5、Csn2、Csm2、Csm3、Csm4、Csm5、Csm6、Cmr1、Cmr3、Cmr4、Cmr5、Cmr6、Csb1、Csb2、Csb3、Csx17、Csx14、Csx10、Csx16、CsaX、Csx3、Csx1、Csx15、Csf1、Csf2、Csf3、Csf4、Cpf1、其同源物或其经修饰版本，所述报告蛋白选自由以下组成的组：荧光蛋白(例如，EGFP、GFP、RFP、BFP、YFP或dsRED2)、产生可检测产物的酶，如荧光素酶(例如，来自高斯公司、海肾公司或Pho公司)、b
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半乳糖苷酶、b
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葡萄糖醛酸酶、碱性磷酸酶、氯霉素乙酰转移酶基因和能够直接检测到的蛋白质；所述治疗靶蛋白(例如，CTLA
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4、HER2、粘连蛋白
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4、硬化蛋白、P
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选择蛋白、VEGF、RSVF、VEGFR2、CD79、IL23p19、vWF、IFN
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γ、C5、PD
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1、PD
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L1、CGRP、CD3、CD11a、CD20、CD22、CD30、CD33、CD38、CD40、CD52、IgE、KLK、CCR4、FGF
‑
23、IL
‑
6R、IL
‑
5、IL
‑
23p19、IL
‑
2R、IL
‑
17R、IL
‑
17、CD4、FIX/FX、IL
‑
12、IL
‑
23、IL
‑
1β、IL
‑
5R、IL
‑
6R、IL
‑
4/IL
‑
13、PDGF
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α、达比加群、SLAMF7、EGFR、PCSK9、GD2、CD3、CD19、α4β7整合素、α4β1整合素、PA、BLyS、RANK、TNF
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α、EpCAM、GGTA1、内皮抑素、血管抑素)；或者所述功能性RNA调节生物靶标，所述生物靶标选自由以下组成的组：多种药物抗性
(MDR)蛋白靶标、肿瘤靶标(例如，VEGF、Her2、EGFR、PD
‑
L1等)、如病毒表面抗原等病原体靶标(例如，乙型肝炎表面抗原基因)、缺陷基因产物(突变的肌营养不良蛋白)或治疗靶标(例如，肌生长抑制素)。25.根据权利要求22
‑
24中任一项所述的方法，其中所述编码序列与一个或多个调节序列可操作地连接。26.一种对患有能够通过外源核酸或其表达产物治疗的病状的受试者进行预准备的方法，所述方法包括：在将所述外源核酸递送到所述细胞之前或同时向所述受试者施用有效量的阿司匹林化合物，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述细胞中转化为双链DNA。27.一种治疗或预防能够通过外源核酸或其表达产物治疗或预防的病状的方法，所述方法包括：向所述受试者递送治疗有效量的所述外源核酸，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述受试者中转化为双链DNA，并且其中所述受试者已经或正在同时施用阿司匹林化合物。28.一种治疗或预防能够通过外源核酸或其表达产物治疗或预防的病状的方法，所述方法包括：a)向所述受试者施用有效量的阿司匹林化合物；以及b)向所述受试者递送治疗有效量的所述外源核酸，其中所述步骤a)在所述步骤b)之前或与所述步骤b)同时进行，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述受试者中转化为双链DNA。29.一种减少受试者的副作用或提高对外源核酸的耐受性的方法，所述方法包括：向所述受试者递送亚治疗量的用于治疗或预防病状的所述外源核酸，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述受试者中转化为双链DNA，并且其中所述受试者已经或正在同时施用有效量的阿司匹林化合物。30.一种减少受试者的副作用或提高对外源核酸的耐受性的方法，所述方法包括：a)向所述受试者施用有效量的阿司匹林化合物；以及b)向所述受试者递送亚治疗量的用于治疗或预防病状的所述外源核酸，其中所述步骤a)在所述步骤b)之前或与所述步骤b)同时进行，其中所述外源核酸包含双链DNA，或者能够在递送之后在所述受试者中转化为双链DNA。31.根据权利要求26
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30中任一项所述的方法，其中所述外源核酸包含病毒载体、质粒或外泌体或被包括在病毒载体、质粒或外泌体内。32.根据权利要求31所述的方法，其中所述病毒载体包含腺相关病毒(AAV)载体。33.根据权利要求32所述的方法，其中所述AAV载体包含AAV病毒颗粒。34.根据权利要求26
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33中任一项所述的方法，其中所述外源核酸包含编码序列，所述
编码序列编码感兴趣的蛋白质或其一部分，或编码功能性RNA或其一部分。35.根据权利要求34所述的方法，其中所述感兴趣的蛋白质包含治疗蛋白、免疫原性蛋白、报告蛋白、核酸酶或治疗靶蛋白，和/或所述功能性RNA包含反义寡核苷酸、核酶、影响剪接体介导/原始剪接的RNA、干扰RNA(RNAi)或其它非翻译功能性RNA，如向导RNA和单向导RNA。36.根据权利要求34所述的方法，其中：所述治疗蛋白选自由以下组成的组：SMN1、NAGLU、SGSH、IDS、FVIII、FIX、BTK、ABCD1、ACADVL、AR、HBB、SCN1A、CFTR、CSF2RA、IL2AG、PHA、STK11、PIGA、OTC、NAGS、DMPK、CNBP、ACADM、GNAS、FBN1、LIPA、SLC7A7、HADHA、GHR、IDV、ALPL、SLC25A15、HTT、HCS、NOTCH3、ALDOB、ATP7B、GAA、GCDH、SLC12A3、GBA、MEFV、GLA、CLCN1 NR0B1、ASS1、SLC25A13、SLC22A5、SCN5A、BTD、ACAT1、ARG1、CYP21A2、嵌合抗原受体(CAR)、抗体(例如，单...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴侠，肖啸，郑静，
申请(专利权)人：上海信致医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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