治疗和预防乙型肝炎和丁型肝炎的组合物和方法技术

本发明专利技术公开了工程化乙型肝炎和丁型肝炎核酸、基因、肽或蛋白质的免疫原性组合物或产品组合，其可用于抑制针对乙型肝炎和/或丁型肝炎感染的免疫应答。还公开了在受试者中使用免疫原性组合物或产品组合以产生针对HBV和/或HDV的免疫应答的方法，所述方法是通过以核酸引发和多肽增强方法施用所述组合物或组合。酸引发和多肽增强方法施用所述组合物或组合。酸引发和多肽增强方法施用所述组合物或组合。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】治疗和预防乙型肝炎和丁型肝炎的组合物和方法
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求2020年1月28日提交的第62/966970号美国临时专利申请的优先权，其全文通过引用明确并入本文。
[0003]对序列列表的引用
[0004]本申请与电子格式的序列表一起提交。序列表以名为SVF005SeqListing.TXT的文件提供，于2021年1月26日创建文件并做最后修改，大小为141377字节。此处通过引用将电子序列表中的信息全文明确并入本文。


[0005]本专利技术的方面总体上涉及工程化乙型肝炎(HBV)和丁型肝炎(HDV)核酸、基因、肽或蛋白质的免疫原性组合物或产品组合，其可用于抑制针对HBV和/或HDV感染的免疫应答。这种免疫反应包括产生中和抗体的活化免疫细胞和活化免疫细胞(如T细胞和B细胞)，或基本上由其或由其组成，以对抗HBV和/或HDV。本专利技术还总体上涉及在受试者中使用免疫原性组合物或产品组合以产生针对HBV和/或HDV的免疫应答的方法，通过使用同源或异源核酸和/或多肽引发(prime)和核酸和/或者多肽增强方法施用组合物或组合。

技术介绍

[0006]肝炎是一种导致肝脏肿胀和炎症的疾病。这种疾病通常由病毒引起，目前已知有五种类型(甲型、乙型、丙型、丁型和戊型肝炎)。乙型肝炎感染可以是急性的，也可以是慢性的，严重的慢性感染会导致慢性炎症、纤维化、肝硬化和肝细胞癌。乙型肝炎病毒具有部分双链环状DNA基因组，该基因组进入宿主细胞核，并由宿主RNA聚合酶转录成四个病毒mRNA分子。它们用于翻译病毒蛋白质，如衣壳蛋白和表面抗原，以及使用逆转录酶产生更多的DNA基因组。丁型肝炎是一种依赖乙型肝炎合并感染或超感染(superinfection)进行复制的类病毒。丁型肝炎的环状单链RNA使用宿主RNA聚合酶扩增，但也包括单个丁型肝炎抗原(HDAg)基因。在乙型和丁型肝炎合并感染或超感染期间，完整的丁型肝炎病毒被包裹在一个包括乙型肝炎表面抗原的包膜中，该包膜围绕着包被有HDAg蛋白的RNA基因组。乙型肝炎表面抗原的掺入对于丁型肝炎的传染性至关重要，因为丁型肝炎并不编码自身的受体结合蛋白。与丁型肝炎合并感染或超感染会导致更严重的并发症，增加肝衰竭、肝硬化和癌症的风险。目前需要有效的免疫原性组合物和疫苗来建立针对乙型肝炎和丁型肝炎感染的预防性免疫。

技术实现思路

[0007]本专利技术总体涉及包括HBV和/或HDV抗原的重组核酸、DNA、RNA、蛋白质、多肽或肽的用途，以诱导针对HBV或HDV感染的免疫应答、抗体产生、免疫保护或免疫。在一些实施方案中，包括HBV和/或HDV抗原的重组核酸、DNA、RNA、蛋白质、多肽或肽被用于DNA引发/蛋白质增强组合物方法。在一些实施方案中，与仅DNA、仅蛋白质或基于生物体的免疫原性组合物
相比，这种DNA引发/蛋白质增强组合物方法导致针对HBV或HDV感染更强的免疫应答、抗体产生、免疫保护或免疫力。
[0008]慢性乙型肝炎和丁型肝炎病毒(HBV/HDV)感染可导致癌症。目前使用核苷类似物(NA)的HBV治疗是终身的，可以降低但不能消除癌症风险。慢性乙型肝炎的一个标志是功能失调的HBV特异性T细胞反应。在一些实施方案中，是由HDV抗原(HDAg)特异性的幼稚健康T细胞驱动的免疫治疗，以绕过对HBV特异性T细胞的需要，从而引发阻止HBV进入的PreS1特异性T淋巴细胞和PreS1抗体。在一些实施方案中，对PreS1和/或HDAg序列的组合在体外和体内对PreS1抗体以及HBV特异性和HDV特异性T细胞进行的诱导评估。在一些实施方案中，在细胞培养物中对PreS1特异性小鼠和兔抗体对HBV的中和作用进行评估，并在重新注入人类肝细胞的小鼠中对兔抗PreS1对HBV的中和作用进行测试。在一些实施方案中，在人源化小鼠的后续攻毒后，过继转移PreS1抗体预防或调节了HBV感染。
[0009]在一些实施方案中，核酸或多肽组合物包括HBV、HDV、PreS1或HDAg的序列、基因或多肽。在一些实施方案中，PreS1是PreS1 A或PreS1 B。在一些实施方案中，HDAg是HDAg基因型1A株(1A)、HDAg基因型1B株(1B)、HDAg基因型2A株(2A)或HDAg基因基因型2B株(2B)。在一些实施方案中，所述组合物还包括自催化肽裂解位点。在一些实施方案中，手术自催化肽裂解位点是P2A自催化肽裂解位点。在一些实施方案中，PreS1和HDAg组分在组合物中组合在一起。在一些实施方案中，PreS1位于HDAg序列的下游或直接下游。在一些实施方案中，PreS1和HDAg基团通过自催化肽裂解位点分离。在一些实施方案中，PreS1和HDAg基团由P2A自催化肽裂解位点分离。
[0010]在一些实施方案中，所述核酸组合物是质粒、病毒、噬菌体、粘粒、福斯粘粒(fosmid)、噬菌体抗体、细菌人工染色体(BAC)、酵母人工染色体(YAC)或人类人工染色体(HAC)。在一些实施方案中，核酸组合物是圆形或线性的。在一些实施方案中，核酸组合物在生物系统中产生，包括但不限于哺乳动物细胞、人类细胞、细菌细胞、大肠杆菌(E.coli)、酵母、酿酒酵母(S.cerevisiae)或其他适当的生物系统。在一些实施方案中，HBV和/或HDV核酸或基因可在生物系统中包括转录和翻译所述核酸或基因所需元件的盒(cassette)中被找到。
[0011]在一些实施方案中，多肽组合物被适当折叠或变性。在一些实施方案中，多肽组合物在包括但不限于哺乳动物、细菌、酵母、昆虫或无细胞重组表达系统的生物系统中产生。在一些实施方案中，多肽组合物在哺乳动物细胞、人类细胞、原代细胞、永生化细胞、癌症细胞、干细胞、成纤维细胞、人胚胎肾(HEK)293细胞、中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、细菌细胞、大肠杆菌(Escherichia coli)细胞、酵母细胞、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)细胞、毕赤酵母(Pichia pastoris)细胞、昆虫细胞、草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9或草地贪夜蛾Sf21细胞或无细胞系统中产生。在一些实施方案中，使用本领域已知的技术纯化多肽组合物，包括但不限于提取、冻融、均质、渗透、离心、密度梯度离心、超速离心、沉淀、SDS
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聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS
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PAGE)、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(native PAGE)、尺寸排阻色谱、液相色谱、气相色谱、疏水相互作用色谱、离子交换色谱、阴离子交换色谱、阳离子交换色谱、亲和色谱、免疫亲和色谱、金属结合色谱、镍柱色谱、表位标签纯化或冻干。
[0012]在一些实施方案中，将核酸或多肽组合物施用于动物，包括但不限于人、小鼠、大鼠、兔子、猫、狗、马、牛、猪、羊、猴子、灵长类动物或鸡。在一些实施方案中，核酸或多肽组合
物施用1天、2天、3天、4天、5天、6天或7天，或1周、2周、3周、4周、5周、6周、7周、8周、9周或10周，本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种免疫原性组合物或产品组合，包括：(a)包括至少一个编码丁型肝炎抗原(HDAg)的核酸序列和至少一个编码PreS1的核酸序列的核酸；(b)包括至少一个HDAg多肽序列和至少一个PreS1多肽序列的多肽。2.根据权利要求1所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述编码HDAg的至少一种核酸序列包括SEQ ID NO:1、SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:3或SEQ ID NO：4或其任意组合。3.根据权利要求1或2的免疫原性组合物或产品组合，其中编码PreS1的至少一个核酸序列包括包括SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:10或包括包括两者。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述核酸被配置为使得每个HDAg核酸序列与PreS1核酸序列组合，并且其中所述PreS1核酸序列直接位于HDAg核酸序列的下游。5.根据权利要求4所述的免疫原性组合物或产品组合，进一步包括包括至少一个编码自催化肽裂解位点的核酸序列，其中所述组合的HDAg和PreS1核酸序列由编码自催化多肽裂解位点的至少一个核酸序列分离。6.根据权利要求5所述的免疫原性组合物或产品组合，其中编码所述自催化肽裂解位点的至少一个核酸序列包括包括选自猪捷申病毒
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1 2A(P2A)、口蹄疫病毒2A(F2A)、马鼻炎病毒2A(ERAV)2A(E2A)和明脉扁刺蛾病毒2A(T2A)核酸的核酸序列，并且其中每个编码的自催化肽裂解位点可以任选地在其N末端包括GSG(甘氨酸
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丝氨酸
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甘氨酸)基序。7.根据权利要求5或6所述的免疫原性组合物或产品组合，其中编码所述自催化肽裂解位点的至少一个核酸序列包括包括SEQ ID NO:13。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述核酸经过密码子优化以在人中表达。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述核酸包括包括与SEQ ID NO:15
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24或35
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36具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同源性的序列。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述核酸包括包括与SEQ ID NO:18或SEQ ID NO:35
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36具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同源性的序列。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述至少一种HDAg多肽包括包括SEQ ID NO:5、SEQ ID NO:6、SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:8或其任意组合。12.根据权利要求1
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11中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述至少一个PreS1多肽序列包括包括SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:12或包括包括两者。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述至少一个PreS1多肽序列位于至少一个HDAg多肽序列的下游。14.根据权利要求1
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13中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述多肽包括包括与SEQ ID NO:25
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34或37的序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同源性的序列。15.根据权利要求1
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14中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述多肽包
括包括与SEQ ID NO:29、31、32或37的序列具有至少80％、85％、90％、95％、99％或100％同源性的序列。16.根据权利要求1
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15中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述多肽重组表达。17.根据权利要求16的免疫原性组合物或产品组合，其中所述多肽在哺乳动物、细菌、酵母、昆虫或无细胞系统中重组表达。18.根据权利要求1
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17中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其进一步包括包括佐剂。19.根据权利要求18所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述佐剂是明矾、QS
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21或MF59或其任意组合。20.根据权利要求1
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19中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述核酸包括DNA。21.根据权利要求1
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20中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合，其中所述核酸在重组载体中提供。22.一种使用权利要求1
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21中任一项所述的免疫原性组合物或产品组合在受试者中产生免疫应答的方法，包括：向所述受试者施用包括所述核酸的至少一个引发剂量；以及向受试者施用至少一种包括多肽的增强剂量。23.根据权利要求22所述的方法，其中所述至少一种增强剂量还包括佐剂。24.根据权利要求23的方法，其中所述佐剂是明矾、QS
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21或MF59或其任意组合。25.根据权利要求22
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24中任一项所述的方法，其中在施用所述至少一种基本剂量后的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、24、36或48天或周内，或在由前述时间点中的任何两个限定的时间范围内，例如1
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48天或1
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48周内施用所述的至少一种增强剂量。26.根据权利要求22
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25中任一项所述的方法，其中所述施用是肠内、口服、鼻内、肠外、皮下、肌肉内、皮内或静脉内或其任意组合形式提供的。27.根据权利要求22
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26中任一项所述的方法，其中所述施用与抗病毒治疗结合进行。2...

【专利技术属性】
技术研发人员：马蒂，
申请(专利权)人：瑞典疫苗制药有限公司，
类型：发明
国别省市：