基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗及其制备方法技术

本申请涉及生物制药技术领域，尤其涉及基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗及其制备方法；所述广谱疫苗包括纳米材料包裹L2蛋白多肽所形成的纳米疫苗，纳米疫苗为核壳结构，其中，内核为L2蛋白多肽，外壳为纳米材料；所述方法包括：对HPV L2蛋白抗原进行表位分析和筛选，得到L2蛋白多肽；对所述L2蛋白多肽和所述纳米材料进行包载制备，得到纳米疫苗；对所述佐剂和所述纳米材料进行包载制备，得到纳米佐剂；收集所述纳米疫苗和纳米佐剂，得到广谱疫苗；通过采用纳米材料包裹L2蛋白多肽形成纳米疫苗，能避免L2蛋白多肽被破坏，同时能使得L2蛋白多肽在生物体内缓慢释放，综合提高L2蛋白多肽类疫苗的稳定性。蛋白多肽类疫苗的稳定性。蛋白多肽类疫苗的稳定性。

【技术实现步骤摘要】
基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗及其制备方法


[0001]本申请涉及生物制药
，尤其涉及基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗及其制备方法。

技术介绍

[0002]高危人乳头瘤病毒(Human papillomavirus，HPV)感染是导致宫颈癌的主要病因，HPV亚型众多，迄今已发现达220余种，根据其对人类致病危害程度可大致分为高危型和低危型两大类，其中，高危型主要包括HPV16，HPV18，HPV31，HPV33，HPV35，HPV39，HPV45，HPV51，HPV52，HPV56，HPV58和HPV59等，与人类宫颈癌及宫颈上皮内高度病变(CINII/III)的发生相关；低危型主要以HPV6、HPV11为代表，主要引起生殖器疣等良性增生性病变。
[0003]病毒预防性疫苗是以病毒抗原作为起始材料，采用生物技术制备而成，通过刺激机体免疫系统产生特异性免疫应答，从而预防相应病毒感染的生物制品，其中代表性的病毒预防性疫苗为HPV疫苗，HPV疫苗一般以病毒主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2为靶抗原，诱发机体产生高滴度的中和抗体和有效的局部免疫反应，以阻止HPV的长期感染和重复感染。
[0004]目前，大部分的HPV疫苗均由所包含病毒型别的主要衣壳蛋白L1基因重组后形成的病毒样颗粒构成，具有型特异性，只能够预防针对所包含型别的感染，不能完全保护机体免受其他HPV型别的感染；而L2蛋白在HPV各型别中高度保守，有许多多肽表位可与其他型别的HPV发生交叉中和反应，且其多为线性表位，其多肽分子量小，可在原核系统内生产，具有工艺简单，造价低廉，副作用少等优势，但是与L1蛋白相比，其诱导产生的抗体滴度较低，这是由于传统的蛋白多肽类疫苗会被体内酶和其他多种因素破坏，使得L2蛋白多肽在体内的稳定性差，导致L2蛋白多肽在体内的半衰期较短，因此如何提高L2蛋白多肽类疫苗在体内的稳定性，以提高L2蛋白多肽在体内的半衰期，是目前亟需解决的技术问题。

技术实现思路

[0005]本申请提供了基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗及其制备方法，以解决现有技术中L2蛋白多肽类疫苗在体内的稳定性较差的技术问题。
[0006]第一方面，本申请提供了一种基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗，所述广谱疫苗包括纳米材料包裹L2蛋白多肽所形成的纳米疫苗，所述纳米疫苗为核壳结构，其中，内核为L2蛋白多肽，外壳为纳米材料。
[0007]可选的，所述L2蛋白多肽的序列如SEQ ID NO.1。
[0008]可选的，所述广谱疫苗还包括纳米材料包裹佐剂所形成的纳米佐剂，所述纳米佐剂为核壳结构，其中，内核为佐剂，外壳为纳米材料。
[0009]可选的，所述佐剂包括咪喹莫特(即R837)。
[0010]可选的，所述纳米材料包括：TPGS
‑
b
‑
(PCL
‑
ran
‑
PGA)共聚物纳米材料。
[0011]第二方面，本申请提供了一种制备第一方面所述的广谱疫苗的方法，所述方法包
括：
[0012]对HPV L2蛋白抗原进行表位分析和筛选，得到如SEQ ID NO.1所示的L2蛋白多肽；
[0013]对所述L2蛋白多肽和所述纳米材料进行包载制备，得到纳米疫苗；
[0014]对所述佐剂和所述纳米材料进行包载制备，得到纳米佐剂；
[0015]收集所述纳米疫苗和所述纳米佐剂，得到广谱疫苗。
[0016]可选的，所述对HPV L2蛋白抗原进行表位分析和筛选，得到如SEQ ID NO.1所示的L2蛋白多肽，具体包括：
[0017]对HPV L2蛋白抗原的基因片段以DNA序列数据库中的基因序列进行比对，后进行分析，得到L2蛋白的氨基酸序列；
[0018]预测所述氨基酸序列的二级结构、亲水性、可塑性、抗原指数和表面可及性，后以目标条件进行考察和筛分，得到多条L2蛋白多肽序列；
[0019]对多条所述L2蛋白多肽序列进行筛选，得到如SEQ ID NO.1所示的L2蛋白多肽。
[0020]可选的，所述目标条件包括多肽的亲水性、多肽的空间结构、多肽的序列保守性和多条的免疫原性。
[0021]可选的，所述筛选包括以氨基酸的预设序列长度和是否有二级结构进行筛选，所述预设序列长度为8～20个。
[0022]可选的，所述纳米疫苗和所述纳米佐剂的粒径都为100m～600nm。
[0023]本申请实施例提供的上述技术方案与现有技术相比具有如下优点：
[0024]本申请实施例提供的一种基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗，通过采用纳米材料包裹L2蛋白多肽形成纳米疫苗，由于L2蛋白多肽分子量小，通过纳米材料的包裹，能一定程度上避免生物体内酶和其他多种因素对L2蛋白多肽造成破坏，同时通过纳米材料的承载，使得L2蛋白多肽在生物体内缓慢释放，发挥缓控释、长循环等效果，从而综合提高L2蛋白多肽类疫苗的稳定性。
附图说明
[0025]此处的附图被并入说明书中并构成本说明书的一部分，示出了符合本专利技术的实施例，并与说明书一起用于解释本专利技术的原理。
[0026]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，对于本领域普通技术人员而言，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0027]图1为本申请实施例提供的方法的流程示意图；
[0028]图2为本申请实施例提供的方法的详细流程示意图；
[0029]图3为本申请实施例提供的L2蛋白多肽的氨基酸序列免疫原性分析的示意图；
[0030]图4为本申请实施例提供的L2蛋白多肽序列结构分析的示意图；
[0031]图5为本申请实施例提供的复乳溶剂挥发法的流程示意图；
[0032]图6为本申请实施例提供的纳米疫苗TPP
‑
L2pep纳米粒的扫描电镜图；
[0033]图7为本申请实施例提供的纳米疫苗TPP
‑
L2pep纳米粒的粒径分布图；
[0034]图8为本申请实施例提供的纳米佐剂TPP
‑
R837纳米粒的粒径分布图；
[0035]图9为本申请实施例提供的纳米佐剂和纳米疫苗的体外释放曲线示意图；
[0036]图10为本申请实施例提供的细胞对空白纳米粒的摄取情况示意图；
[0037]图11为本申请实施例提供的细胞对带有荧光标记的纳米粒TPP
‑
FITC
‑
BSA的摄取情况示意图；
[0038]图12为本申请实施例提供的在1∶200稀释度条件下TPP
‑
L2pep组、TPP
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L2pep和TPP
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R837混合组的血清抗体水平对比情况图。
具体实施方式
[0039]下面本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于人乳头瘤病毒L2蛋白的宫颈癌广谱疫苗，其特征在于，所述广谱疫苗包括纳米材料包裹L2蛋白多肽所形成的纳米疫苗，所述纳米疫苗为核壳结构，其中，内核为L2蛋白多肽，外壳为纳米材料。2.根据权利要求1所述的广谱疫苗，其特征在于，所述L2蛋白多肽的序列如SEQ ID NO.1。3.根据权利要求1所述的广谱疫苗，其特征在于，所述广谱疫苗还包括纳米材料包裹佐剂所形成的纳米佐剂，所述纳米佐剂为核壳结构，其中，内核为佐剂，外壳为纳米材料。4.根据权利要求3所述的广谱疫苗，其特征在于，所述佐剂包括咪喹莫特。5.根据权利要求1或3所述的广谱疫苗，其特征在于，所述纳米材料包括：TPGS
‑
b
‑
(PCL
‑
ran
‑
PGA)共聚物纳米材料。6.一种制备如权利要求1
‑
5任一项所述的广谱疫苗的方法，其特征在于，所述方法包括：对HPV L2蛋白抗原进行表位分析和筛选，得到如SEQ ID NO.1所示的L2蛋白多肽；对所述L2蛋白多肽和所述纳...

【专利技术属性】
技术研发人员：邱立新，
申请(专利权)人：江汉大学，
类型：发明
国别省市：