一种人工培养黏菌孢子形成原生质团的培养方法技术

本发明专利技术公开了一种人工培养黏菌孢子形成原生质团的培养方法，属于微生物领域。该方法将黏菌孢子悬浮液进行暗培养，至形成游动胞或黏变形体时，向其中加入细菌培养物，继续暗培养至形成合子，之后将其转移至燕麦琼脂培养基中进行培养，得到黏菌的原生质团。本发明专利技术的培养方法首次获得灯笼菌C.cancellata，半网灯笼菌C.mirabilis，孔膜菌R.splendens，美发菌C.pulchella和凹斑亮皮菌L.gulielmae的原生质团，缩短了部分萌发无丝菌目和发网菌目黏菌的时间，同时提高了部分无丝菌目和发网菌目黏菌孢子形成原质团的萌发率，为开展后续科学研究奠定重要基础。究奠定重要基础。究奠定重要基础。

【技术实现步骤摘要】
一种人工培养黏菌孢子形成原生质团的培养方法


[0001]本专利技术涉及微生物领域，特别是涉及一种人工培养黏菌孢子形成原生质团的培养方法。

技术介绍

[0002]黏菌隶属于原生生物界Protista，变形虫门Amoebozoa，黏菌纲Myxogastria，是变形虫门下物种最丰富的群体。一般生长在潮湿阴暗处，黏菌主要应用于农业、科研领域，由于黏菌兼具了“动物”与“植物”的特征，因此，黏菌成为了动物界和植物界的联系纽带，是研究真核生物系统演化的模式生物，如多头绒泡菌Physarum polycephalum Schwein.常用于研究细胞生物学和发育生物学中细胞周期调控、细胞分化、细胞融合、DNA复制及发育过程中的基因表达、组蛋白修饰等。
[0003]同时随着蘑菇产业的发展，黏菌成为蘑菇病害之一，已发现受害食用菌为平菇、香菇、草菇、木耳、羊肚菌、茶树菇，例如木耳“流耳”现象，黏菌还对铁皮石斛的生产采收造成危害，使农民经济受到极大损失。因此萌发黏菌孢子形成原质团，对开展细胞生物学、遗传学、以及经济作物病害等研究至关重要。但是根据目前研究发现，对于可萌发黏菌的种类，主要集中在绒泡菌目黏菌中，在团毛菌目黏菌中较少，据统计有9种被培养，仅占黏菌总物种数4.69％，在无丝菌目黏菌中更少，只有7种被培养，占总物种数的4.43％。
[0004]而针对部分无丝菌目、发网菌目、绒泡菌目和团毛菌目的黏菌尚未被研究者通过常规方法培养出来，因此，本专利技术拟设计一种新的人工培养方法，以解决常规方法无法培养获得部分无丝菌目、发网菌目、绒泡菌目和团毛菌目黏菌原生质团的技术问题，为后续科学研究奠定基础。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的是提供一种人工培养黏菌孢子形成原生质团的培养方法，以解决上述现有技术存在的问题，该方法首次获得灯笼菌C.cancellata，半网灯笼菌C.mirabilis，孔膜菌R.splendens，美发菌C.pulchella和凹斑亮皮菌L.gulielmae的原生质团，缩短了部分萌发无丝菌目和发网菌目黏菌的时间，同时提高了部分无丝菌目和发网菌目黏菌孢子形成原质团的萌发率，为开展科学研究奠定基础。
[0006]为实现上述目的，本专利技术提供了如下方案：
[0007]本专利技术提供一种人工培养黏菌孢子形成原生质团的培养方法，将黏菌孢子悬浮液进行暗培养，至形成游动胞或黏变形体时，向其中加入细菌培养物，继续暗培养至形成合子，之后将其转移至燕麦琼脂培养基中进行培养，得到黏菌的原生质团。
[0008]进一步地，所述细菌培养物包括大肠杆菌，其浓度为1
×
107CFU/mL，加入量为10
‑
20μL。
[0009]进一步地，所述黏菌孢子悬浮液的浓度为2
×
105‑5×
106个/mL，其通过将黏菌子实体加入反渗透水中制得。
[0010]进一步地，所述暗培养的温度为19
‑
24℃，其培养至形成游动胞或黏变形体的时间为0.5
‑
3d，加入细菌培养物，继续暗培养至形成合子的时间为3
‑
8d。
[0011]进一步地，所述培养的条件为：19
‑
24℃避光培养4
‑
35d。
[0012]进一步地，所述燕麦琼脂培养基按以下步骤制得：将灭菌的燕麦粉散落在灭菌后凝固的水琼脂培养基表面，获得所述燕麦琼脂培养基。
[0013]进一步地，所述燕麦粉的加入量为20
‑
200mg。
[0014]进一步地，所述黏菌包括灯笼菌Cribraria cancellata、半网灯笼菌Cribraria mirabilis、孔膜菌Reticularia splendens、美发菌Comatricha pulchella、凹斑亮皮菌Lamproderma gulielmae、黑柄钙皮菌Didymium nigripes、圈绒泡菌Physarum gyrosum、鳞钙皮菌Didymium squamulosum或灰团网菌Arcyria cinerea。
[0015]本专利技术公开了以下技术效果：
[0016]本专利技术首次获得灯笼菌C.cancellata，半网灯笼菌C.mirabilis，孔膜菌R.splendens，美发菌C.pulchella，凹斑亮皮菌L.gulielmae的原生质团，缩短了部分萌发无丝菌目和发网菌目黏菌的时间，同时提高了部分无丝菌目和发网菌目黏菌孢子形成原质团的萌发率。并且本专利技术所用原料易得，成本低，培养过程简单易操作，易于推广应用。
附图说明
[0017]为了更清楚地说明本专利技术实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
[0018]图1为9种黏菌形成的原生质团图；
[0019]图2为半网灯笼菌C.mirabilis在实验组和对照组1
‑
3的培养基的生长状况对比图；A：培养0d；B：培养4d。
具体实施方式
[0020]现详细说明本专利技术的多种示例性实施方式，该详细说明不应认为是对本专利技术的限制，而应理解为是对本专利技术的某些方面、特性和实施方案的更详细的描述。
[0021]应理解本专利技术中所述的术语仅仅是为描述特别的实施方式，并非用于限制本专利技术。另外，对于本专利技术中的数值范围，应理解为还具体公开了该范围的上限和下限之间的每个中间值。在任何陈述值或陈述范围内的中间值以及任何其他陈述值或在所述范围内的中间值之间的每个较小的范围也包括在本专利技术内。这些较小范围的上限和下限可独立地包括或排除在范围内。
[0022]除非另有说明，否则本文使用的所有技术和科学术语具有本专利技术所述领域的常规技术人员通常理解的相同含义。虽然本专利技术仅描述了优选的方法和材料，但是在本专利技术的实施或测试中也可以使用与本文所述相似或等同的任何方法和材料。本说明书中提到的所有文献通过引用并入，用以公开和描述与所述文献相关的方法和/或材料。在与任何并入的文献冲突时，以本说明书的内容为准。
[0023]在不背离本专利技术的范围或精神的情况下，可对本专利技术说明书的具体实施方式做多
种改进和变化，这对本领域技术人员而言是显而易见的。由本专利技术的说明书得到的其他实施方式对技术人员而言是显而易见的。本专利技术说明书和实施例仅是示例性的。
[0024]关于本文中所使用的“包含”、“包括”、“具有”、“含有”等等，均为开放性的用语，即意指包含但不限于。
[0025]1实验方法
[0026]1.1实验材料：灯笼菌Cribraria cancellata，半网灯笼菌Cribraria mirabilis，孔膜菌Reticularia splendens，美发菌Comatricha pulchella，凹斑亮皮菌Lam本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种人工培养黏菌孢子形成原生质团的培养方法，其特征在于，将黏菌孢子悬浮液进行暗培养，至形成游动胞或黏变形体时，向其中加入细菌培养物，继续暗培养至形成合子，之后将其转移至燕麦琼脂培养基中进行培养，得到黏菌的原生质团。2.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述细菌培养物包括大肠杆菌，其浓度为1
×
107CFU/mL，加入量为10
‑
20μL。3.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述黏菌孢子悬浮液的浓度为2
×
105‑5×
106个/mL，其通过将黏菌子实体加入反渗透水中制得。4.根据权利要求1所述的培养方法，其特征在于，所述暗培养的温度为19
‑
24℃，其培养至形成游动胞或黏变形体的时间为0.5
‑
3d，加入细菌培养物，继续暗培养至形成合子的时间为3
‑
8d。5.根据权利要求1所述的培养方法...

【专利技术属性】
技术研发人员：王琦，窦文俊，张萌，彭雪嫣，孙也，张卉，苏玲，
申请(专利权)人：吉林农业大学，
类型：发明
国别省市：