一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法技术

本发明专利技术涉及一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法，该方法由以下步骤组成：首先配制混合内标溶液、混合标准品溶液和待检测进样液，再按下述方法进行检测：按进样量为1～10μL对柱温为20～40℃的Poroshell 120EC

【技术实现步骤摘要】
一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法


[0001]本专利技术涉及借助于测定材料的化学或物理性质来测试或分析材料，具体是涉及小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法。

技术介绍

[0002]小儿七星茶颗粒为中国药典收录的成方制剂(中华人民共和国药典2020年版一部第552页)，该药由薏苡仁893g、稻芽893g、山楂446g、淡竹叶670g、钩藤335g、蝉蜕112g和甘草112g为原料，经过提取浓缩配制灭菌包装加工制成。小儿七星茶颗粒的功能主治为开胃消滞、清热定惊。用于小儿积滞化热、消化不良、不思饮食、烦躁易惊、夜寐不安、大便不畅、小便短赤。但是，中国药典仅采用高效液相色谱法对方剂中的甘草酸(C
42
H
62
O
16
)的含量进行了规定，这显然还不能满足全面控制小儿七星茶颗粒质量的要求。
[0003]目前，已有学者开始小儿七星茶颗粒多成分测定的方法，如学者朱焕容等采用高效液相色谱法，经9次梯度洗脱，测定了小儿七星茶颗粒中甘草苷、绿原酸、芹菜素三种成分[朱焕容,赵小宁,王秀芬,等.小儿七星茶颗粒指纹图谱[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(13):93
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96.]，但一套梯度洗脱程序加上平衡到最初流动相要花费进118分钟，且分离色谱图基线高低不平，难以准确定量；再如申请公布号为CN108627581A的专利技术专利申请公开了一种小儿七星茶颗粒中钩藤碱和异钩藤碱含量测定方法，该方法利用高效液相色谱法，经9次梯度洗脱，测定小儿七星茶颗粒中钩藤碱和异钩藤碱两种成分，但提取方法复杂，分析一针花费测定时间43分钟。
[0004]此外，由于小儿七星茶颗粒由薏苡仁、稻芽、山楂、淡竹叶、钩藤、蝉蜕和甘草七味药制成，而根据相关报导其中每一味中药材中都含有好几种有效成分，远不止上述现有所公开的甘草酸、绿原酸、芹菜素、钩藤碱和异钩藤碱五种，因此寻求一种同时检测20种以上化学成分的方法，对于全面控制小儿七星茶颗粒质量具有重要意义。

技术实现思路

[0005]本专利技术要解决的问题是提供一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法，该方法具有能同时对小儿七星茶颗粒中26种有效成分进行定性和定量检测的优点。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案是：
[0007]一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法，该方法是高效液相色谱串联质谱法检测小儿七星茶颗粒中的各种有效成分，具体包括以下步骤：
[0008](1)配制混合内标溶液：分别精密称取磺胺甲恶唑900μg和氯霉素890μg，用体积浓度为的80％甲醇溶解并定容至10mL，即得所述混合内标溶液；
[0009](2)配制混合标准品溶液：分别精密称取标准品分别精密称取标准品N
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乙酰多巴胺二聚体A
a 880μg、N
‑
乙酰多巴胺二聚体A
b 930μg、毛钩藤碱1100μg、去氢毛钩藤碱1090μg、钩藤碱1220μg、异钩藤碱1240μg、异去氢钩藤碱1250μg、去氢钩藤碱1110μg、甘草苷1070μg、异甘草苷1140μg、甘草素1110μg、异甘草素1040μg、甘草酸1140μg、绿原酸1050μg、新绿原酸
1050μg、隐绿原酸1080μg、金丝桃苷1220μg、新西兰牡荆苷1020μg、日当要黄素1070μg、芦丁1095μg、对香豆酸1300μg、咖啡酸1015μg、枸橼酸1115μg、木犀草苷1200μg、木犀草素1010μg和槲皮素1160μg，加入步骤(1)制得的混合内标溶液10μL，用体积浓度为80％的甲醇溶解并定容至10mL，即得所述混合标准品储备液；
[0010](3)配制待检测进样液：分别称取薏苡仁8.93g、稻芽8.93g、山楂4.46g、淡竹叶6.70g、钩藤3.35g、蝉蜕1.12g和甘草1.12g；其中薏苡仁和稻芽加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至55℃下相对密度为1.08，加入乙醇使含醇量达体积百分数45％，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏；山楂、淡竹叶、钩藤、蝉蜕和甘草加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，滤液浓缩至适量，与所述的稠膏合并，负70～75℃减压干燥，得待检样品；
[0011]取所述待检样品0.5g，加入体积浓度为80％的甲醇10mL，在20℃的条件下超声30min，冷却至室温，补足减失的体积浓度为80％的甲醇质量，离心10min，吸取上清液200μL，加入步骤(1)制得的混合内标溶液10μL，用体积浓度为80％的定容至10mL，即得所述待检测进样液；
[0012](4)检测方法和条件：将待检进样液和混合标准品溶液分别按下述方法注入高效液相色谱串联质谱仪并采用HPLC
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MS/MS多反应监测法进行检测，获得被检测物以及标准品各化学成分的离子流谱图：其中，
[0013]高效液相色谱检测的方法和色谱条件为：按进样量为1～10μL对柱温为20～40℃的Poroshell 120EC
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C
18 3.0
×
50mm,2.7
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Micron色谱柱进样，接着用由A相为0.01～0.1％甲酸水溶液和B相为乙腈组成的流动相，以0.15～0.45mL/min的流速进行正负离子梯度洗脱，其中正离子洗脱的程序如下表1所示，负离子洗脱的程序如下表2所示；
[0014]表1正离子洗脱的程序
[0015][0016]表2负离子洗脱的程序
[0017][0018]质谱检测的方法和质谱条件为：正离子检测的毛细管电压为3300～3600V，负离子检测的毛细管电压为2800～3200V；喷嘴电压为400～550V；雾化气体、干燥气体和鞘气气体为氮气；干燥气体温度为300～400℃；雾化气体压力为30～60psi；干燥气体流速为4～6L/min；鞘气气体温度为300～400℃；鞘气气体流速为9～13L/min；
[0019]多反应监测的方法和条件为：正负离子交替进行检测分析26种成分的含量测定，其中26种成分和2种内标及MS
‑
MRM参数如下表3：
[0020]表3
[0021][0022][0023](5)化学成分的定性与定量测定：将获得被检测物与标准品各化学成分的离子流谱图进行比较，与混合标准品溶液各化学成分的离子流图谱中相应成分的保留时间相同的离子峰即是与该化学成分相同物质的特征峰；以标准品和内标定量离子与相应离子流峰面积的比值为纵坐标，以该标准品的浓度为横坐标绘制出线性回归曲线，得到每一标准品的标准曲线方程；然后，将待检进样液中每一待检测物和内标定量离子与相应离子流峰面积的比值分别代入相应的标准曲线方程中，即可计算出每一有效成分在待检进样液中的浓度，进而计算出所述小儿七星茶颗粒中各有效成分的含量。
[0024]本方法检测出所述小儿七星茶颗粒中的有效成分为下述26种化学成分：N
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乙酰多巴胺二聚体A
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种小儿七星茶颗粒有效成分的检测方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(1)配制混合内标溶液：分别精密称取磺胺甲恶唑900μg和氯霉素890μg，用体积浓度为的80％甲醇溶解并定容至10mL，即得所述混合内标溶液；(2)配制混合标准品溶液：分别精密称取标准品分别精密称取标准品N
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乙酰多巴胺二聚体A
a 880μg、N
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乙酰多巴胺二聚体A
b 930μg、毛钩藤碱1100μg、去氢毛钩藤碱1090μg、钩藤碱1220μg、异钩藤碱1240μg、异去氢钩藤碱1250μg、去氢钩藤碱1110μg、甘草苷1070μg、异甘草苷1140μg、甘草素1110μg、异甘草素1040μg、甘草酸1140μg、绿原酸1050μg、新绿原酸1050μg、隐绿原酸1080μg、金丝桃苷1220μg、新西兰牡荆苷1020μg、日当要黄素1070μg、芦丁1095μg、对香豆酸1300μg、咖啡酸1015μg、枸橼酸1115μg、木犀草苷1200μg、木犀草素1010μg和槲皮素1160μg，加入步骤(1)制得的混合内标溶液10μL，用体积浓度为80％的甲醇溶解并定容至10mL，即得所述混合标准品储备液；(3)配制待检测进样液：分别称取薏苡仁8.93g、稻芽8.93g、山楂4.46g、淡竹叶6.70g、钩藤3.35g、蝉蜕1.12g和甘草1.12g；其中薏苡仁和稻芽加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，浓缩至55℃下相对密度为1.08，加入乙醇使含醇量达体积百分数45％，静置，滤过，滤液回收乙醇并浓缩成稠膏；山楂、淡竹叶、钩藤、蝉蜕和甘草加水煎煮二次，每次2小时，煎液滤过，滤液合并，滤液浓缩至适量，与所述的稠膏合并，负70～75℃减压干燥，得待检样品；取所述待检样品0.5g，加入体积浓度为80％的甲醇10mL，在20℃的条件下超声30min，冷却至室温，补足减失的体积浓度为80％的甲醇质量，离心10min，吸取上清液200μL，加入步骤(1)制得的混合内标溶液10μL，用体积浓度为80％的定容至10mL，即得所述待检测进样液；(4)检测方法和条件：将待检进样液和混合标准品溶液分别按下述方法注入高效液相色谱串联质谱仪并采用HPLC
‑
MS/MS多反应监测法进行检测，获得被检测物以及标准品各化学成分的离子流谱图：其中，高效液相色谱检测的方法和色谱条件为：按进样量为1～10μL对柱温为20～40℃的Poroshell 120EC
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C
18 3.0

【专利技术属性】
技术研发人员：祝晨蔯，林朝展，刘方乐，谢远远，王美琪，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：