一种准确快速测定抗体药物中2-脱氧-2-氟-L-岩藻糖含量的方法技术

本发明专利技术公开了一种准确快速测定抗体药物中2

【技术实现步骤摘要】
一种准确快速测定抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量的方法


[0001]本专利技术属于化学分析检测
，特别涉及一种准确快速测定抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量的方法。

技术介绍

[0002]2‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖是一种L
‑
岩藻糖类似物，可以在细胞内转化为GDP
‑2‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖，一种竞争性的α
‑
1,3
‑
岩藻糖基化转移酶抑制剂。它可以减少抗体中IgG的岩藻糖基化，增强抗体依赖的细胞毒性，从而增加抗体的治疗效果。但是，有研究表明2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖也是一种活性药物，可以与检验点抑制剂联合使用，有效治疗癌症。为防止其对目标抗体药物治疗效果的影响，在纯化过程中需要完全去除残留。
[0003]对于2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖的含量检测还未见文献报道，仅有一些关于L
‑
岩藻糖的检测方法。岩藻糖属于单糖，没有紫外可见光吸收，一般采用气相色谱法和高效液相色谱法测定。气相色谱法需要将岩藻糖衍生化才能检测，步骤繁琐。高效液相色谱法主要分为两种：直接测定法和柱前衍生法，其中无需衍生的高效液相色谱法是采用蒸发光散射检测器(ELSD)或示差折光检测器(RID)。示差折光检测器对环境温度的稳定性要求较高，不适合采用梯度洗脱分析，且灵敏度低，平衡时间长；蒸发光散射检测器灵敏度稍高于RID，但灵敏度仍不理想，且基线噪音大，重复性差；而柱前衍生高效液相色谱法，采用紫外检测器检测，步骤繁琐，空白干扰多。

技术实现思路

[0004]本专利技术所要解决的技术问题是针对上述现有技术存在的不足而提供一种准确快速测定抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量的方法，操作简单，分析速度快，准确度好。
[0005]为了解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案如下：
[0006]一种准确快速测定抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量的方法，包括以下操作步骤：
[0007](1)配制基质标准溶液；所述待测样品为液态抗体药物制剂，或者抗体药物配制成溶液；
[0008](2)将基质标准溶液和待测样品分别加入乙醇，摇匀震荡，进行蛋白沉淀后固液分离，分别得到标准溶液的上样液和待测样品的上样液；
[0009](3)将步骤(2)所得标准溶液的上样液采用超高效液相色谱和三重四级杆质谱联用仪进行分析，得到色谱图，然后以标准溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立线性标准曲线；
[0010](4)在与步骤(3)相同的条件下，将步骤(2)所得待测样品溶液的上样液采用超高效液相色谱和三重四级杆质谱联用仪进行分析，得到色谱图，将峰面积代入步骤(3)所得线性标准曲线中计算待测样品中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖的含量，即抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量。
[0011]按上述方案，步骤(1)中，所述基质标准溶液中标准品的浓度为5～100μg/L。基质标准溶液的配制方法为：将2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖标准品用水配制成标准品储备液，然后用基质稀释至2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖的浓度为5μg/L
‑
100μg/L；所述基质为不含2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖的单克隆抗体药物制剂。
[0012]按上述方案，所述待测样品一般为市售或者待上市的单克隆抗体药物制剂，通常为液态，直接蛋白沉淀后作为上样液。
[0013]按上述方案，步骤(2)中，所述乙醇为
‑
80℃～0℃预冷的乙醇；乙醇与基质标准溶液(或待测样品溶液)混合时，两者体积比为1:1～4:1；震荡时间为1～3min；固液分离采用离心的方式，离心转速8000～15000rpm，离心时间5～10min。
[0014]按上述方案，步骤(3)、步骤(4)中，所述超高效液相色谱为反相色谱；所述三重四极杆质谱条件为电喷雾电离、负离子扫描模式、多反应监测(MRM)方法。
[0015]优选地，所述三重四极杆质谱条件为：电喷雾电离，负离子扫描，雾化气2～3.0L/min，干燥气0～10L/min，加热气5～10L/min，离子源接口温度200℃～300℃，脱溶剂管温度150℃～300℃，加热模块温度300℃～400℃。
[0016]优选地，所述超高效液相色谱条件为：色谱柱为C18(100mm x 2.1mmI.D.,1.9μm)，流动相A相为水和甲酸的混合溶液，B相为乙腈和甲酸的混合溶液，梯度洗脱。其中，A相中水和甲酸的体积比为9995:5～9999:1，B相中乙腈和甲酸的体积比为9995:5～9999:1。
[0017]与现有技术相比，本专利技术的有益效果是：
[0018](1)本专利技术首次利用超高效液相色谱和三重四极杆质谱联用技术检测抗体药物制剂中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖的含量。糖类化合物的分析普遍存在在反相色谱体系没有保留，质谱分析电离效率低和碎片信息不完整等缺点，一般通过衍生化的方法提高色谱保留和质谱的电离效率及精细结构解析的准确度，但是衍生步骤繁琐。而且，对于抗体制剂中残留的微量2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖，衍生化更是难以实现。2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖在质谱分析中，受抗体药物制剂的基质干扰很大。本专利技术开发出一种不需要衍生化，分析速度快，基质干扰小，灵敏度高，重复性好的质谱分析方法。
[0019](2)在三重四极杆质谱分析中，本专利技术采用的多反应监测模式(MRM)将选定的特异性母离子进行碰撞诱导解离，去除其他子离子的干扰，只对选定的特异子离子进行质本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种准确快速测定抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量的方法，其特征在于包括以下操作步骤：(1)配制基质标准溶液；所述待测样品为液态抗体药物制剂，或者抗体药物溶液；(2)将基质标准溶液和待测样品分别加入乙醇摇匀震荡，进行蛋白沉淀后固液分离，分别得到标准溶液的上样液和待测样品的上样液；其中，乙醇为
‑
80℃～0℃预冷的乙醇；乙醇与基质标准溶液或待测样品混合时，两者体积比为1:1～4:1；(3)将步骤(2)所得标准溶液的上样液采用超高效液相色谱和三重四级杆质谱联用仪进行分析，得到色谱图，然后以标准溶液的浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，建立线性标准曲线；(4)在与步骤(3)相同的条件下，将步骤(2)所得待测样品溶液的上样液采用超高效液相色谱和三重四级杆质谱联用仪进行分析，得到色谱图，将峰面积代入步骤(3)所得线性标准曲线中计算待测样品中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖的含量，即抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量。2.根据权利要求1所述的一种准确快速测定抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述基质标准溶液中标准品的浓度为5～100μg/L。3.根据权利要求1所述的一种准确快速测定抗体药物中2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖含量的方法，其特征在于，基质标准溶液的配制方法为：将2
‑
脱氧
‑2‑
氟
‑
L
‑
岩藻糖标准品用水配...

【专利技术属性】
技术研发人员：何群，刘巧霞，郝红元，黄涛宏，
申请(专利权)人：岛津企业管理中国有限公司，
类型：发明
国别省市：