一种检测小儿七星茶颗粒有效成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种检测小儿七星茶颗粒有效成分的方法，该方法由以下步骤组成：首先配制待测检测进样液和混合标准品溶液，再按下述方法进行检测：按进样量为1～10μL对柱温为20～40℃的Waters Acquity BEH C

【技术实现步骤摘要】
一种检测小儿七星茶颗粒有效成分的方法


[0001]本专利技术涉及中药制剂质量控制
，特别是涉及小儿七星茶颗粒化学成分的检测方法。

技术介绍

[0002]小儿七星茶颗粒为中国药典收录的成方制剂(中华人民共和国药典2020年版一部第552页)，该药由薏苡仁893g、稻芽893g、山楂446g、淡竹叶670g、钩藤335g、蝉蜕112g和甘草112g为原料，经过提取浓缩配制灭菌包装加工制成。小儿七星茶颗粒的功能主治为开胃消滞、清热定惊。用于小儿积滞化热、消化不良、不思饮食、烦躁易惊、夜寐不安、大便不畅、小便短赤。但是，中国药典仅采用高效液相色谱法对方剂中的甘草酸(C
42
H
62
O
16
)的含量进行了规定，这显然还不能满足全面控制小儿七星茶颗粒质量的要求。
[0003]目前关于小儿七星茶颗粒的定性分析，主要为指纹图谱分析，但建立的方法耗时较长，损耗试剂较多，不利于高通量分析，对于复杂成分的指认也不够充分，如学者朱焕容等采用高效液相色谱法，经9次梯度洗脱，测定了小儿七星茶颗粒中甘草苷、绿原酸、芹菜素三种成分[朱焕容,赵小宁,王秀芬,等.小儿七星茶颗粒指纹图谱[J].中国实验方剂学杂志,2014,20(13):93
‑
96.]，但一套梯度洗脱程序加上平衡到最初流动相要花费进118分钟，且检测波长为254nm，分离色谱图基线高低不平，后续难以进行定量分析。
[0004]此外，现有小儿七星茶颗粒的定性分析未有能同时兼顾多种化合物类型，加之紫外有时选择性较差，因此无法定性检测出小儿七星茶颗粒中多达30种以上的化学成分。

技术实现思路

[0005]本专利技术提供一种检测小儿七星茶颗粒有效成分的方法，该方法具有能同时对小儿七星茶颗粒中31种有效成分进行定性检测的优点。
[0006]本专利技术解决上述技术问题的技术方案是：
[0007]一种检测小儿七星茶颗粒有效成分的方法，该方法是超高效液相色谱串联四极杆飞行时间质谱法检测小儿七星茶颗粒中的各种有效成分，具体包括以下步骤：
[0008](1)待测检测进样液的制备：取小儿七星茶颗粒研细，然后用有机溶剂溶解并提取纯化，最后用同样的有机溶剂定容至浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，过滤待测检测进样液；
[0009](2)配制混合标准品溶液：分别精密称取标准品N
‑
乙酰多巴胺二聚体A
a 88μg、N
‑
乙酰多巴胺二聚体A
b 93μg、毛钩藤碱110μg、去氢毛钩藤碱109μg、钩藤碱122μg、异钩藤碱124μg、异去氢钩藤碱75μg、去氢钩藤碱66.6μg、甘草苷535μg、异甘草苷570μg、甘草素555μg、异甘草素520μg、甘草酸570μg、甘草次酸356.25μg、绿原酸105μg、新绿原酸105μg、隐绿原酸108μg、金丝桃苷97.6μg、荭草苷65.25μg、异荭草苷57.32μg、芹糖甘草苷105.32μg、芒柄花苷68.68μg、新西兰牡荆苷81.6μg、日当要黄素856μg、芦丁876μg、对香豆酸143μg、咖啡酸81.2μg、枸橼酸111.5μg、木犀草苷96μg、木犀草素80.8μg和槲皮素9.28μg，用体积浓度为80％的甲醇溶解并定容至10mL，得单一储备标准品储备液；分别吸取单一储备标准品储备
window为0.1min；再返回菜单栏中选择Show下面Data and peak table的功能，导出“Data”和“Peak”数据并导出并保存为.text文本格式，其中所述“Data”和“Peak”数据包括保留时间，峰强度值、质荷比，峰面积值，峰高度值；再使用Microsoft Excel 2019内置除法公式将峰强度值、峰面积值、峰高度值均缩小10000倍；将各批次的指纹图谱数据导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统，设置参照图谱的时间窗宽度为0.1min，进行多点校正，计算相似度，即得被检测物的共有模式下指纹图谱；
[0019](5)共有模式下化学成分的定性：将步骤(4)获得的被检测物的共有模式下指纹图谱质谱数据导入AB SCIEX OS软件，通过对一级质谱图中准分子离子峰进行分析，控制质量误差小于
±
5ppm的分子式；选择混合标准品中每一化合物的二级碎片质谱信息，利用AB SCIEX OS软件辅助碎片离子预测该化合物的结构信息，然后将该结构信息与标准品的质谱裂解信息进行比对，当所述质谱裂解信息与混合标准品中相应化合物的结构信息一致时，即确定小儿七星茶颗粒中含有该化合物。
[0020]本方法定性检测出所述小儿七星茶颗粒中有效成分为以下31种化合物：N
‑
乙酰多巴胺二聚体A
a
、N
‑
乙酰多巴胺二聚体A
b
、毛钩藤碱、去氢毛钩藤碱、钩藤碱、异钩藤碱、异去氢钩藤碱、去氢钩藤碱、甘草苷、异甘草苷、甘草素、异甘草素、甘草酸、甘草次酸、绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、金丝桃苷、荭草苷、异荭草苷、芹糖甘草苷、芒柄花苷、新西兰牡荆苷、日当要黄素、芦丁、对香豆酸、咖啡酸、枸橼酸、木犀草苷、木犀草和槲皮素。
[0021]本专利技术方法中，所述最优的高效液相色谱条件为：按进样量为5μL对控制柱温为30℃的Waters Acquity BEH C
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色谱柱进样，接着用由A相为0.1％甲酸水溶液和B相为乙腈组成的流动相，以0.40mL/min的流速进行正负离子梯度洗脱。
[0022]本申请所述一种检测小儿七星茶有效成分的方法具有以下有益效果：
[0023](1)首次采用超高效液相色谱
‑
四极杆飞行时间质谱联用技术建立由7味原料药制成的小儿七星茶颗粒有效成分的指纹图谱，并将其与相似度评价系统相结合，计算指纹图谱与对照指纹图谱的相似度值，而且能直观快速鉴定31个特征共有峰，其中与标准品比对鉴定了31个特征共有峰，而且稳定好、重复性好的；
[0024](2)液质联用技术和指纹图谱相结合的方法，灵敏度高，扫描速度快，通量高，且兼顾多种化合物类型，避免紫外歧视效应，能快速方便表征出小儿七星茶颗粒整体质量水平；
[0025](3)洗脱程序和质谱检测方法科学合理，方便快速。
附图说明：
[0026]图1为本专利技术所述方法的一个具体实施例中11批次(S1～S11)小儿七星茶颗粒匹配后的指纹图谱。
[0027]图2为本专利技术所述方法的一个具体实施例中11批次(S1～S11)小儿七星茶颗粒生成的对照图谱。
[0028]图3为本专利技术所述方法的一个具体实施例中11批次(S1～S11)小儿七星茶颗粒31个共有指纹图谱的总离子流色谱图。其中，A图为正离子，B图为负离子。其中，A图为正离子，B图为负离子；图中各特征共有峰依次为：1号峰为枸橼酸，2号峰为新绿原酸，3号峰为绿原酸，4号峰为隐绿原酸，5号峰为新西兰牡荆苷，6号峰为咖啡酸，7号峰为异荭草苷，8号峰本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测小儿七星茶颗粒有效成分的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)待测检测进样液的制备：取小儿七星茶颗粒研细，然后用有机溶剂溶解并提取纯化，最后用同样的有机溶剂定容至浓度为0.1mg/mL～1mg/mL，过滤待测检测进样液；(2)配制混合标准品溶液：分别精密称取标准品N
‑
乙酰多巴胺二聚体A
a 88μg、N
‑
乙酰多巴胺二聚体A
b 93μg、毛钩藤碱110μg、去氢毛钩藤碱109μg、钩藤碱122μg、异钩藤碱124μg、异去氢钩藤碱75μg、去氢钩藤碱66.6μg、甘草苷535μg、异甘草苷570μg、甘草素555μg、异甘草素520μg、甘草酸570μg、甘草次酸356.25μg、绿原酸105μg、新绿原酸105μg、隐绿原酸108μg、金丝桃苷97.6μg、荭草苷65.25μg、异荭草苷57.32μg、芹糖甘草苷105.32μg、芒柄花苷68.68μg、新西兰牡荆苷81.6μg、日当要黄素856μg、芦丁876μg、对香豆酸143μg、咖啡酸81.2μg、枸橼酸111.5μg、木犀草苷96μg、木犀草素80.8μg和槲皮素9.28μg，分别用体积浓度为80％的甲醇溶解并定容至10mL，得单一储备标准品储备液；分别吸取单一储备标准品储备液50μL，用体积浓度为80％的甲醇溶解并定容至5mL，即得所述混合标准品储备液；(3)检测方法和条件：将待检进样液和混合标准品溶液分别按下述方法注入超高效液相色谱串联飞行时间质谱仪，获得被检测物以及标准品的总离子流谱图：其中，超高效液相色谱检测的方法和色谱条件为：按进样量为1～10μL对柱温为20～40℃的Waters Acquity BEH C
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色谱柱进样，接着用由A相为0.01～0.1％甲酸水溶液和B相为乙腈组成的流动相，以0.10～0.45mL/min的流速进行正负离子梯度洗脱，其中正负离子洗脱程序如下表1所示；表1正负离子洗脱的程序质谱检测的方法和质谱条件为：采用电喷雾离子源和AB SCIEX自动校正系统的AB SCIEX5600
+
质谱仪获取MS
n
模式的质谱数据，在每个TOF
‑
MS扫描后根据所设定的IDA条件进行8个MS/MS分析，且在采样过程中同时勾选动态背景扣除选项；其中，所述MS
n
模式为电喷雾正、负离子模式；所述质谱仪的运行参数如表2所示；表2质谱参数正离子模式负离子模式喷雾电压(ISVF)5500V
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【专利技术属性】
技术研发人员：祝晨蔯，林朝展，刘方乐，谢远远，
申请(专利权)人：广州中医药大学广州中医药研究院，
类型：发明
国别省市：