用于治疗肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素制造技术

本发明专利技术涉及用于治疗肢体痉挛或儿科肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)，其中通过肌内注射对个体的多块受影响的肌肉施用该经修饰的BoNT/A，其中在该多块受影响的肌肉处以53个单位至948个单位或26.5个单位至474个单位经修饰的BoNT/A的单位剂量施用该经修饰的BoNT/A。饰的BoNT/A。饰的BoNT/A。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素


[0001]本专利技术涉及使用经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)治疗肢体痉挛。

技术介绍

[0002]痉挛是一种运动症状，以速度依赖性牵张反射(stretch reflex)增加和腱反射(tendon jerks)亢进为特征，由牵张反射的高兴奋性引起，是运动神经元综合征的一个组成部分。痉挛与多种神经障碍有关，例如多发性硬化症、脑或脊髓损伤、创伤性脑损伤(TBI)和脑血管障碍(中风)。其特征是运动损伤(肌张力增加、肢体姿势异常、拮抗肌过度收缩和过度活跃反射)、功能残疾、疼痛和不适。
[0003]成人上肢(AUL)痉挛是中风后常见的并发症；它通常是痛苦的(与痉挛性肌肉收缩相关)，并可以通过干扰上肢运动和限制肢体用于主动功能任务而导致严重残疾。在严重的情况下，它也会妨碍“被动功能”，如清洗、穿衣和护理患肢，从而增加护理者的负担。继发性并发症可以包括自尊和身体形象不佳、生活质量受损(社交和家庭互动减少)和压力性溃疡。
[0004]由于患者表现及其目标的多样性，上肢中风后痉挛管理具有挑战性。在这些患者中，肌肉张力过高通常表现为由受影响肌肉决定的几种常见临床模式，这又与中枢神经系统损伤的大小、位置和年龄有关。这些模式在31个国家的临床医生进行的国际横断面调查中进行了描述，随后被用于对5种典型的AUL痉挛模式进行分类。这些根据肩关节、肘关节、前臂关节和腕关节的位置定义。目前的临床共识和现有指南建议，在为患者选择治疗时，应考虑痉挛的确切模式，并应相应调整肉毒神经毒素A(BoNT/A)治疗，选择合适的肌肉进行注射。然而，没有两名患者是完全相同的，需要定制/个性化的治疗方案。
[0005]专家小组进一步研究了这些模式，以便为每种临床模式提供有关上肢痉挛(ULS)治疗参数和目标肌肉的指导(见图1)。值得注意的是，为定向BoNT治疗，专家组定义了三种聚合姿势(aggregate posture)组合。这些组合是：
[0006](1)肩膀内收、肘屈曲、前臂旋前、腕屈曲、拳头握紧；
[0007](2)肘屈曲、前臂旋前、腕屈曲、拳头握紧；和
[0008](3)腕屈曲、拳头握紧。
[0009]图1所示的四个上肢关节已知在超过90％的个体中涉及(见图1)。大多数痉挛性上肢模式(五分之四)由肩部的内旋和内收以及肘关节的屈曲引起，其中前臂和手腕的姿势引起姿势差异。
[0010]总体ULS治疗旨在缓解痉挛的病征和症状——减少肌肉痉挛和疼痛，改善姿势，促进活动性和灵活性(自主运动功能，伸手达到、抓握、移动和释放)，最大限度地减少挛缩和畸形，提高患者护理以及卫生/自我护理的易行性和/或生活质量。可用的药物治疗选择，如口服(苯二氮卓类(benzodiazepines)、巴氯芬(baclofen)、替扎尼丁(tizanidine)和丹曲洛林(dantrolene))和鞘内(巴氯芬)药物，大多会导致非选择性肌无力，产生副作用，如全身无力和对中枢神经系统的副作用，包括共济失调、嗜睡、镇静、甚至是戒断症状。
[0011]治疗痉挛的最有效方法是物理治疗和肌内(i.m.)注射BoNT/A的组合，这是近年来由几项指南推荐的。BoNT/A已成为一种首选治疗方法，因为它具有最小的系统性副作用，并且是一种局部注射治疗方法，可以通过选择性靶向受影响的肌肉来适应个体的疾病表现。
[0012]是一种药物产品，含有从肉毒梭菌(Clostridium botulinum)A型菌株中分离和纯化的药物物质BoNT/A血凝素复合物(BTX
‑
A
‑
HAC)。由肉毒梭菌天然产生的其他几种药用BoNT/A产品也在市场上出售(例如和)。
[0013]BoNT/A选择性地抑制突触前神经末梢乙酰胆碱的释放，从而阻断神经肌肉接头处的胆碱能传递，诱导肌肉收缩和肌张力降低，导致注射的肌肉松弛。二十多年来，这种作用机制已被用于治疗多种临床神经病症，包括局灶性肌张力障碍、局灶性肌肉痉挛和美容病症(aesthetic conditions)。
[0014]然而，目前可用的BoNT/A产品的作用持续时间约为12至14周，在新神经末梢萌芽时允许神经功能恢复正常，原症状重现。因此，为了保持效果，需要定期重复注射。
[0015]因此，考虑到痉挛的慢性和所需治疗的长期性，BoNT/A注射的频率是治疗痉挛的一个重要考虑因素。事实上，这对患者和护理者的直接和间接健康成本、医院/诊所内的注射组织工作、以及最重要地患者生活质量都有影响。
[0016]被批准用于治疗上肢和下肢痉挛，每个治疗疗程的最大总剂量为1500单位(见图2——治疗上肢痉挛的最大剂量为1000单位)。临床医生需要对肢体的多个肌肉施用每个治疗疗程上限不超过总共1500个单位。临床医生在治疗患者期间被迫做出艰难的选择。换言之，在常规治疗方案中，临床医生必须在可施用的相对较低的BoNT/A总量(1500个单位或1000个单位用于上肢痉挛——由于BoNT/A的高毒性性质，这是必需的)和多个不同肌肉的有效量之间找到平衡。因此，某些肌肉被忽视，而其他肌肉接受次优量的BoNT/A，导致次优治疗。此外，目前的治疗方案不包括肩部治疗，肩部治疗需要在其多个肌肉处使用多个单位剂量。
[0017]此外，常规治疗方案复杂，导致临床医生为避免对患者的毒性而给药不足。因此，需要一种方便、安全和有效的单剂量单位、以及有关在治疗疗程中可以对肢体施用而不会产生患者毒性的单位数量(包括每块肌肉的注射部位数量)的相应指导。
[0018]总之，需要改进的肢体痉挛治疗，这将允许个性化的以患者为中心的方法，以便根据目标临床模式定制治疗，从而允许根据痉挛的分布、程度和严重程度注射不同的肢体肌肉组合，同时避免毒性并提供更持久的治疗(导致更低的给药频率)。还需要改进的治疗方案，以允许治疗被忽视的肌肉，如肩部肌肉。
[0019]本专利技术克服了上述一个或多个问题。
[0020]专利技术概述
[0021]本专利技术人已经令人惊讶地发现，经修饰的BoNT/A在治疗肢体痉挛方面具有特别的效用。经修饰的BoNT/A可包括对表面暴露的氨基酸残基的一个或多个修饰，导致净正电荷增加。增加的电荷促进多肽和阴离子细胞外成分之间的静电相互作用，从而促进多肽和细胞表面之间的结合。反过来，这会增加在施用部位的滞留(减少自施用部位的扩散)，并导致作用持续时间增加(例如6
‑
9个月)。备选地，经修饰的BoNT/A可以包括BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)，这类似地导致经修饰的BoNT/A在施用部位的
滞留增加(扩散减少)，作用持续时间增加(例如6
‑
9个月)。有利的是，与未经修饰的BoNT/A(例如，)相比，经修饰的BoNT/A具有改善的安全性特征。这种改善的安全性特征可以用本文所述的经修饰的BoNT/A的高安全性比(Safety Ratio)来表示。
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.用于治疗肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)，其中通过肌内注射对个体的多块受影响的肌肉施用该经修饰的BoNT/A，其中在该多块受影响的肌肉处以53个单位至948个单位经修饰的BoNT/A的单位剂量施用该经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD
50
)的经修饰的BoNT/A的量，其中该多块受影响的肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、肱二头肌、腓肠肌内侧头、腓肠肌外侧头、趾长屈肌、踇长屈肌、腓肠肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌、大内收肌、长内收肌、短内收肌、股薄肌、内侧腘绳肌、外侧腘绳肌、阔筋膜张肌、股直肌、股外侧肌、股内侧肌、股中间肌、臀大肌、胫前肌、趾短屈肌、踇长伸肌和踇短屈肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱肌、比目鱼肌、胫后肌、肱桡肌、大圆肌、髂腰肌和腓肠肌；和其中在受影响的第一组肌肉处施用单个单位剂量和/或在受影响的第二组肌肉处施用多个单位剂量，并且其中在治疗期间施用的总剂量至多为14220个单位，和其中该经修饰的BoNT/A在选自以下的一个或多个氨基酸残基处包含修饰：ASN 886、ASN 905、GLN 915、ASN 918、GLU 920、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、GLU 992、GLN 995、ASN 1006、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1032、ASN 1043、ASN 1046、ASN 1052、ASP 1058、HIS 1064、ASN 1080、GLU 1081、GLU 1083、ASP 1086、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN 1242、ASN 1243、SER 1274和THR 1277，其中该修饰选自：i.用碱性氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；ii.用不带电荷的氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；iii.用碱性氨基酸残基取代不带电荷的表面暴露的氨基酸残基；iv.插入碱性氨基酸残基；和v.缺失酸性表面暴露的氨基酸残基。2.权利要求1的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中5
‑
10pg(优选8.4pg)经修饰的BoNT/A对应于1个单位。3.用于治疗肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)，其中通过肌内注射对个体的多块受影响的肌肉施用该经修饰的BoNT/A，其中在该多块受影响的肌肉处以53个单位至948个单位经修饰的BoNT/A的单位剂量施用该经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD
50
)的经修饰的BoNT/A的量，其中该多块受影响的肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、肱二头肌、腓肠肌内侧头、腓肠肌外侧头、趾长屈肌、踇长屈肌、腓肠肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌、大内收肌、长内收肌、短内收肌、股薄肌、内侧腘绳肌、外侧腘绳肌、阔筋膜张肌、股直肌、股外侧肌、股内侧肌、股中间肌、臀大肌、胫前肌、趾短屈肌、踇长伸肌和踇短屈肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱
肌、比目鱼肌、胫后肌、肱桡肌、大圆肌、髂腰肌和腓肠肌；和其中在受影响的第一组肌肉处施用单个单位剂量和/或在受影响的第二组肌肉处施用多个单位剂量，并且其中在治疗期间施用的总剂量至多为14220个单位，和其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)。4.权利要求3的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B H
C
结构域，并且其中20
‑
30pg(优选24.04pg)经修饰的BoNT/A对应于1个单位。5.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A具有大于7的安全性比，其中该安全性比计算为：以pg/小鼠测量的
‑
10％体重变化所需的毒素剂量除以以pg/小鼠测量的DAS ED
50
，其中ED
50
＝产生DAS得分2所需的剂量。6.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该肢体痉挛是上肢痉挛。7.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为59个单位至889个单位经修饰的BoNT/A。8.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为795个单位至14220个单位。9.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为至多13335个单位。10.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为885个单位至13335个单位。11.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为2000个单位至13335个单位。12.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为450pg至8000pg经修饰的BoNT/A。13.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为500pg至7500pg经修饰的BoNT/A。14.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为6000pg至120000pg。15.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为至多112500pg。16.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为7500pg至112500pg。17.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为40000pg至112500pg。18.前述权利要求中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该多块肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱
肌、肱桡肌和大圆肌。19.权利要求1、2或5
‑
18中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该修饰包括选自以下的一个或多个氨基酸残基处的修饰(优选由其组成)：ASN 886、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1052、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN 1242、ASN 1243、SER 1274或THR 1277，并且其中该经修饰的BoNT/A由与选自SEQ ID NO:3、5、7和9的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列编码，和/或包含与选自SEQ ID NO:4、6、8和10的多肽序列具有至少70％序列同一性的多肽序列，优选地，其中该修饰包括选自以下的一个或多个氨基酸残基处的修饰(优选由其组成)：ASN 886、ASN 930、SER 955、GLN 991、ASN 1026、ASN 1052和GLN 1229，并且其中该经修饰的BoNT/A由与SEQ ID NO:3具有至少70％序列同一性的核酸序列编码，和/或包含与选自SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的多肽序列。20.权利要求1、2或5
‑
19中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该修饰是取代，优选用赖氨酸或精氨酸取代。21.权利要求3
‑
18中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A包含与SEQ ID NO:14具有至少70％序列同一性的多肽序列。22.经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)的单位剂型，该单位剂型包含：a.53个单位至948个单位经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量；或b.450pg至8000pg经修饰的BoNT/A；和c.可选地，可药用载体、赋形剂、助剂和/或盐，其中该经修饰的BoNT/A在选自以下的一个或多个氨基酸残基处包含修饰：ASN 886、ASN 905、GLN 915、ASN 918、GLU 920、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、GLU 992、GLN 995、ASN 1006、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1032、ASN 1043、ASN 1046、ASN 1052、ASP 1058、HIS 1064、ASN 1080、GLU 1081、GLU 1083、ASP 1086、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN 1242、ASN 1243、SER 1274和THR 1277，其中该修饰选自：i.用碱性氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；ii.用不带电荷的氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；iii.用碱性氨基酸残基取代不带电荷的表面暴露的氨基酸残基；iv.插入碱性氨基酸残基；和v.缺失酸性表面暴露的氨基酸残基。23.经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)的单位剂型，该单位剂型包含：a.53个单位至948个单位经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量；或b.450pg至8000pg经修饰的BoNT/A；和c.可选地，可药用载体、赋形剂、助剂和/或盐，其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)。24.权利要求22或23的单位剂型，其包含：a.59个单位至889个单位经修饰的BoNT/A；或
b.500pg至7500pg经修饰的BoNT/A。25.药盒，其包括：a.权利要求22
‑
24中任一项的单位剂型；和b.用于治疗肢体痉挛的说明书；和c.可选地，稀释剂。26.用于治疗肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)，其中通过肌内注射对个体的多块受影响的肌肉施用该经修饰的BoNT/A，其中在该多块受影响的肌肉处以31个单位至707个单位经修饰的BoNT/A的单位剂量施用该经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD
50
)的经修饰的BoNT/A的量，其中该多块受影响的肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、肱二头肌、腓肠肌内侧头、腓肠肌外侧头、趾长屈肌、踇长屈肌、腓肠肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌、大内收肌、长内收肌、短内收肌、股薄肌、内侧腘绳肌、外侧腘绳肌、阔筋膜张肌、股直肌、股外侧肌、股内侧肌、股中间肌、臀大肌、胫前肌、趾短屈肌、踇长伸肌和踇短屈肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱肌、比目鱼肌、胫后肌、肱桡肌、大圆肌、髂腰肌和腓肠肌；和其中在受影响的第一组肌肉处施用单个单位剂量和/或在受影响的第二组肌肉处施用多个单位剂量，并且其中在治疗期间施用的总剂量至多为10605个单位，和其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)。27.权利要求26的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B H
C
结构域，并且其中20
‑
30pg(优选24.04pg)经修饰的BoNT/A对应于1个单位。28.权利要求26或27的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A具有大于7的安全性比，其中该安全性比计算为：以pg/小鼠测量的
‑
10％体重变化所需的毒素剂量除以以pg/小鼠测量的DAS ED
50
，其中ED
50
＝产生DAS得分2所需的剂量。29.权利要求26
‑
28中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该肢体痉挛是上肢痉挛。30.权利要求26
‑
29中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为42个单位至666个单位经修饰的BoNT/A。31.权利要求26
‑
30中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为465个单位至10605个单位。32.权利要求26
‑
31中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量至多为9990个单位。33.权利要求26
‑
32中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为630个单位至9990个单位。34.权利要求26
‑
33中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为
1498个单位至9990个单位。35.权利要求26
‑
34中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为750pg至17000pg经修饰的BoNT/A。36.权利要求26
‑
35中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为1000pg至16000pg经修饰的BoNT/A。37.权利要求26
‑
36中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为12750pg至255000pg。38.权利要求26
‑
37中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量至多为240000pg。39.权利要求26
‑
38中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为15000pg至240000pg。40.权利要求26
‑
39中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为85333pg至240000pg。41.权利要求26
‑
40中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该多块肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱肌、肱桡肌和大圆肌。42.权利要求26
‑
41中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A包含与SEQ ID NO:14具有至少70％序列同一性的多肽序列。43.经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)的单位剂型，该单位剂型包含：a.31个单位至707个单位经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量；或b.750pg至17000pg经修饰的BoNT/A；和c.可选地，可药用载体、赋形剂、助剂和/或盐，其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)。44.权利要求43的单位剂型，其包含：a.42个单位至666个单位经修饰的BoNT/A；或b.1000pg至16000pg经修饰的BoNT/A。45.药盒，其包括：a.权利要求43或44的单位剂型；和b.用于治疗肢体痉挛的说明书；和c.可选地，稀释剂。46.用于治疗儿科肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)，其中通过肌内注射对个体的多块受影响的肌肉施用该经修饰的BoNT/A，其中在该多块受影响的肌肉处以26.5个单位至474个单位经修饰的BoNT/A的单位剂量施用该经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量，
其中该多块受影响的肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、肱二头肌、腓肠肌内侧头、腓肠肌外侧头、趾长屈肌、踇长屈肌、腓肠肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌、大内收肌、长内收肌、短内收肌、股薄肌、内侧腘绳肌、外侧腘绳肌、阔筋膜张肌、股直肌、股外侧肌、股内侧肌、股中间肌、臀大肌、胫前肌、趾短屈肌、踇长伸肌和踇短屈肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱肌、比目鱼肌、胫后肌、肱桡肌、大圆肌、髂腰肌和腓肠肌；和其中在受影响的第一组肌肉处施用单个单位剂量和/或在受影响的第二组肌肉处施用多个单位剂量，并且其中在治疗期间施用的总剂量至多为7110个单位，和其中该经修饰的BoNT/A在选自以下的一个或多个氨基酸残基处包含修饰：ASN 886、ASN 905、GLN 915、ASN 918、GLU 920、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、GLU 992、GLN 995、ASN 1006、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1032、ASN 1043、ASN 1046、ASN 1052、ASP 1058、HIS 1064、ASN 1080、GLU 1081、GLU 1083、ASP 1086、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN 1242、ASN 1243、SER 1274和THR 1277，其中该修饰选自：i.用碱性氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；ii.用不带电荷的氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；iii.用碱性氨基酸残基取代不带电荷的表面暴露的氨基酸残基；iv.插入碱性氨基酸残基；和v.缺失酸性表面暴露的氨基酸残基。47.权利要求46的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中5
‑
10pg(优选8.4pg)经修饰的BoNT/A对应于1个单位。48.用于治疗儿科肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)，其中通过肌内注射对个体的多块受影响的肌肉施用该经修饰的BoNT/A，其中在该多块受影响的肌肉处以26.5个单位至474个单位经修饰的BoNT/A的单位剂量施用该经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量，其中该多块受影响的肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、肱二头肌、腓肠肌内侧头、腓肠肌外侧头、趾长屈肌、踇长屈肌、腓肠肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌、大内收肌、长内收肌、短内收肌、股薄肌、内侧腘绳肌、外侧腘绳肌、阔筋膜张肌、股直肌、股外侧肌、股内侧肌、股中间肌、臀大肌、胫前肌、趾短屈肌、踇长伸肌和踇短屈肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱肌、比目鱼肌、胫后肌、肱桡肌、大圆肌、髂腰肌和腓肠肌；和其中在受影响的第一组肌肉处施用单个单位剂量和/或在受影响的第二组肌肉处施用多个单位剂量，并且其中在治疗期间施用的总剂量至多为7110个单位，和其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)。
49.权利要求48的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B H
C
结构域，并且其中20
‑
30pg(优选24.04pg)经修饰的BoNT/A对应于1个单位。50.权利要求46
‑
49中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A具有大于7的安全性比，其中该安全性比计算为：以pg/小鼠测量的
‑
10％体重变化所需的毒素剂量除以以pg/小鼠测量的DAS ED
50
，其中ED
50
＝产生DAS得分2所需的剂量。51.权利要求46
‑
50中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为29.5个单位至444.5个单位经修饰的BoNT/A。52.权利要求46
‑
51中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为397.5个单位至7110个单位。53.权利要求46
‑
52中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量至多为6667.5个单位。54.权利要求46
‑
53中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为442.5个单位至6667.5个单位。55.权利要求46
‑
54中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为1000个单位至6667.5个单位。56.权利要求46
‑
55中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为225pg至4000pg经修饰的BoNT/A。57.权利要求46
‑
56中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为250pg至3750pg经修饰的BoNT/A。58.权利要求46
‑
57中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为3000pg至60000pg。59.权利要求46
‑
58中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量至多为56250pg。60.权利要求46
‑
59中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为3750pg至56250pg。61.权利要求46
‑
60中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为20000pg至56250pg。62.权利要求46
‑
61中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的单位剂量总数至多为10x单位剂量。63.权利要求46
‑
62中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为265个单位至4740个单位。64.权利要求46
‑
63中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中治疗期间所施用的总剂量为4740个单位。65.权利要求46
‑
64中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该多块肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱肌、肱桡肌和大圆肌。
66.权利要求46、47或50
‑
65中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该修饰包括选自以下的一个或多个氨基酸残基处的修饰(优选由其组成)：ASN 886、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1052、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN 1242、ASN 1243、SER 1274或THR 1277，并且其中该经修饰的BoNT/A由与选自SEQ ID NO:3、5、7和9的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列编码，和/或包含与选自SEQ ID NO:4、6、8和10的多肽序列具有至少70％序列同一性的多肽序列，优选地，其中该修饰包括选自以下的一个或多个氨基酸残基处的修饰(优选由其组成)：ASN 886、ASN 930、SER 955、GLN 991、ASN 1026、ASN 1052和GLN 1229，并且其中该经修饰的BoNT/A由与SEQ ID NO:3具有至少70％序列同一性的核酸序列编码，和/或包含与选自SEQ ID NO:4的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的多肽序列。67.权利要求46、47或50
‑
66中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该修饰是取代，优选用赖氨酸或精氨酸取代。68.权利要求48
‑
65中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A包含与SEQ ID NO:14具有至少70％序列同一性的多肽序列。69.经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)的单位剂型，该单位剂型包含：a.26.5个单位至474个单位经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量；或b.225pg至4000pg经修饰的BoNT/A；和c.可选地，可药用载体、赋形剂、助剂和/或盐，其中该经修饰的BoNT/A在选自以下的一个或多个氨基酸残基处包含修饰：ASN 886、ASN 905、GLN 915、ASN 918、GLU 920、ASN 930、ASN 954、SER 955、GLN 991、GLU 992、GLN 995、ASN 1006、ASN 1025、ASN 1026、ASN 1032、ASN 1043、ASN 1046、ASN 1052、ASP 1058、HIS 1064、ASN 1080、GLU 1081、GLU 1083、ASP 1086、ASN 1188、ASP 1213、GLY 1215、ASN 1216、GLN 1229、ASN 1242、ASN 1243、SER 1274和THR 1277，其中该修饰选自：i.用碱性氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；ii.用不带电荷的氨基酸残基取代酸性表面暴露的氨基酸残基；iii.用碱性氨基酸残基取代不带电荷的表面暴露的氨基酸残基；iv.插入碱性氨基酸残基；和v.缺失酸性表面暴露的氨基酸残基。70.经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)的单位剂型，该单位剂型包含：a.26.5个单位至474个单位经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量；或b.225pg至4000pg经修饰的BoNT/A；和c.可选地，可药用载体、赋形剂、助剂和/或盐，其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)。71.权利要求69或70的单位剂型，其包含：a.29.5个单位至445.5个单位经修饰的BoNT/A；或b.250pg至3750pg经修饰的BoNT/A。
72.药盒，其包括：a.权利要求69
‑
71中任一项的单位剂型；和b.用于治疗肢体痉挛的说明书；和c.可选地，稀释剂。73.用于治疗儿科肢体痉挛的经修饰的肉毒神经毒素A(BoNT/A)，其中通过肌内注射对个体的多块受影响的肌肉施用该经修饰的BoNT/A，其中在该多块受影响的肌肉处以15.5个单位至353.5个单位经修饰的BoNT/A的单位剂量施用该经修饰的BoNT/A，其中1个单位是对应于小鼠中计算的半数致死剂量(LD50)的经修饰的BoNT/A的量，其中该多块受影响的肌肉选自：第一组，其包括：指浅屈肌、指深屈肌、桡侧腕屈肌、尺侧腕屈肌、肱桡肌、旋前圆肌、肱二头肌、腓肠肌内侧头、腓肠肌外侧头、趾长屈肌、踇长屈肌、腓肠肌、三角肌、提肩胛肌、旋前方肌、拇长屈肌、拇内收肌、拇短屈肌、掌长肌、蚓状肌、拇对掌肌、大内收肌、长内收肌、短内收肌、股薄肌、内侧腘绳肌、外侧腘绳肌、阔筋膜张肌、股直肌、股外侧肌、股内侧肌、股中间肌、臀大肌、胫前肌、趾短屈肌、踇长伸肌和踇短屈肌；和第二组，其包括：肱三头肌(长头)、肩胛下肌、胸肌(例如胸大肌)、背阔肌、肱二头肌、肱肌、比目鱼肌、胫后肌、肱桡肌、大圆肌、髂腰肌和腓肠肌；和其中在受影响的第一组肌肉处施用单个单位剂量和/或在受影响的第二组肌肉处施用多个单位剂量，并且其中在治疗期间施用的总剂量至多为5302.5个单位，和其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B受体结合结构域(H
C
结构域)。74.权利要求73的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A包含BoNT/A轻链和易位结构域以及BoNT/B H
C
结构域，并且其中20
‑
30pg(优选24.04pg)经修饰的BoNT/A对应于1个单位。75.权利要求73或74的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该经修饰的BoNT/A具有大于7的安全性比，其中该安全性比计算为：以pg/小鼠测量的
‑
10％体重变化所需的毒素剂量除以以pg/小鼠测量的DAS ED
50
，其中ED
50
＝产生DAS得分2所需的剂量。76.权利要求73
‑
75中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为21个单位至333个单位经修饰的BoNT/A。77.权利要求73
‑
76中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为232.5个单位至5302.5个单位。78.权利要求73
‑
77中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量至多为4995个单位。79.权利要求73
‑
78中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为315个单位至4995个单位。80.权利要求73
‑
79中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为749个单位至4995个单位。81.权利要求73
‑
80中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为375pg至8500pg经修饰的BoNT/A。
82.权利要求73
‑
81中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中该单位剂量为500pg至8000pg经修饰的BoNT/A。83.权利要求73
‑
82中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为6375pg至127500pg。84.权利要求73
‑
83中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量至多为120000pg。85.权利要求73
‑
84中任一项的用于应用的经修饰的BoNT/A，其中所施用的总剂量为7500pg至120000pg。86...

【专利技术属性】
技术研发人员：N，
申请(专利权)人：益普生生物制药有限公司，
类型：发明
国别省市：