一种参仙升脉口服液超高效液相检测方法技术

本发明专利技术提供一种参仙升脉口服液超高效液相检测方法，该检测方法采用UHPLC

【技术实现步骤摘要】
一种参仙升脉口服液超高效液相检测方法


[0001]本专利技术涉及一种参仙升脉口服液超高效液相检测方法，属于中成药质量检测方法领域。

技术介绍

[0002]本专利技术所述药品为参仙升脉口服液，该药品是山东步长制药股份的独家品种。国家药品监督管理局批准文号为国药准字Z20080183(10ml)、其主要由乙酰谷酰胺和中药材红花组配而成配伍组成，本申请人对该产品布局多件专利申请，其申请号为：200710019161.5、201010275244.2、202010831085.3，上述专利技术保护主题为：该参仙升脉中药组方配比、临床治疗糖尿病新用途、口服液挥发性成分检测方法等。目前该药品国家质量标准为WS3
‑
065(Z
‑
010)
‑
2003(Z)，该标准中以人参皂苷Rb1、Re、Rg、盐酸麻黄碱、补骨脂素、异补骨脂素、淫羊藿苷、原儿茶醛的薄层含量定性鉴别。其中本品以每支含红参以人参皂苷Rg1进行单指标成分含量检测。
[0003]参仙升脉口服液是我国第一个专门治疗缓慢性心律失常的专利中成药，具有温补心肾，活血化瘀的作用。现代临床上常用于治疗轻、中度窦房结心动过缓(心率>50次)和轻度病态窦房结综合征不合并有室上性快速心律失常的心肾阳虚，寒凝血脉证。全方由红参、淫羊藿、补骨脂(盐炙)、枸杞子、麻黄、细辛、丹参、水蛭等八味中药组成。经查阅文献，仅发现参仙升脉口服液中单味药材的化学成分研究报道。其中，红参是经人参蒸制干燥而成，主要有效成分为人参皂苷，其特有成分为人参皂苷Rg3；淫羊藿有效成分主要为淫羊藿总黄酮和淫羊藿多糖；补骨脂主要成分为补骨脂素、异补骨脂素、补骨脂二氢黄酮等；枸杞子活性成分主要为多糖类；麻黄主要成分为生物碱，含有麻黄碱、伪麻黄碱等；细辛、丹参、水蛭的主要成分分别为咖啡酰类、丹参酮类、水蛭素。目前，对于中药复方产品的研究多局限于方中单一中药的化学成分，缺乏对参仙升脉口服液整体化学物质基础的系统研究。然而对于传统的中医药而言，药物的临床疗效是中药复方中多种有效成分协同作用的共同结果，单一中药成分的分析并不能够体现中药复方的整体性和化学成分的复杂多样性。然而单一的指标质控成分并不能从整体上反应该中药复方制剂的内在质量，因此有必要开展该产品的中药复方物质成分研究。

技术实现思路

[0004]本专利技术提供一种参仙升脉口服液超高效液相检测方法，该检测方法采用UHPLC
‑
Q Exactive Focus MS/MS技术手段，经对照品比对确认，本专利技术检测方法共鉴定出160个化学成分，包括29个黄酮类成分，24个有机酸类成分，21个生物碱类成分，19个萜类成分，15个苯丙素类成分，12个皂苷类成分和40个其他类成分；其中6个化学成分(芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素和补骨脂酚)。本专利技术检测方法能够对参仙升脉口服液的有效物质成分进行快速有效的全面表征，并进一步对所鉴定成分进行药味、类别归属，为参仙升脉口服液的有效成分物质基础研究和质量控制提供参考依据。
[0005]本专利技术提供的技术方案如下：
[0006]一种参仙升脉口服液超高效液相检测方法，所述检测方法包括以下步骤：
[0007]⑴
、对照品溶液的制备：称取芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂酚、补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别置于量瓶中，加甲醇溶解并定容，作为对照品贮备液；再用甲醇将各对照品贮备液稀释至适宜浓度，即得；
[0008]⑵
、供试品溶液的制备：取参仙升脉口服液，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
[0009]⑶
、色谱检测条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相采用甲醇(A)和0.07～0.12％甲酸水(B)梯度洗脱，洗脱程序为0～13min，5％～60％A；13～27min，60％～95％A；27～30min，95％A，流速0.1～0.5mL
·
min
‑1，进样量1～3μL，柱温25～35℃；
[0010]⑷
、质谱条件为：离子源为加热电喷雾离子源(H
‑
ESI)，喷雾电压为3～5kV，鞘气(N2)流量30～50arb，辅助气流量8～12arb，辅助加热器温度330～370℃，毛细管温度310～330℃，S
‑
lens射频水平45～55，自动增益控制(AGC)100～110，扫描方式采用正、负离子Full MS/dd
‑
MS2模式，Full MS分辨率60000～80000，dd
‑
MS2分辨率30000～40000；扫描范围m/z 100～2000，碰撞能量20～8eV；
[0011]⑸
、数据处理：根据质谱精确相对分子量信息，选择一级准分子离子峰质荷比实测值与理论值误差小于5ppm的分子，与参仙升脉口服液化学成分数据库信息进行匹配，初步推测化合物信息，采用Xcalibur 2.0软件进一步对目标化合物色谱峰及其二级碎片离子信息进行提取，并结合相关化学成分数据库和文献信息对目标化合物进行鉴定和确证。
[0012]优选的，所述检测方法步骤
⑴
对照品溶液的制备中对照品溶液的浓度为0.5～2ug/ml。
[0013]优选的，所述检测方法步骤
⑴
对照品溶液的制备中对照品溶液的浓度为1ug/ml。
[0014]优选的，所述检测方法步骤
⑵
供试品溶液的制备中，所述甲醇稀释的倍数8～12倍，最佳优选为10倍。
[0015]优选的，所述检测方法步骤
⑶
色谱检测条件为：所述色谱柱的型号为：Thermo Accucore aQ。
[0016]优选的，所述检测方法步骤
⑶
色谱检测条件为：流动相采用甲醇(A)和0.1％甲酸水(B)梯度洗脱，洗脱程序为0～13min，5％～60％A；13～27min，60％～95％A；27～30min，95％A，流速0.3mL
·
min
‑1；，进样量2μL，柱温30℃。
[0017]优选的，所述检测方法步骤
⑷
质谱条件为：喷雾电压为3.5kV，鞘气(N2)流量40arb，辅助气流量10arb，辅助加热器温度350℃，毛细管温度320℃，S
‑
lens射频水平50，自动增益控制(AGC)106，扫描方式采用正、负离子Full MS/dd
‑
MS2模式，Full MS分辨率70000，dd
‑
MS2分辨率35000；扫描范围m/z 120～1 800，碰撞能量30eV、50eV、70eV。
[0018]本专利技术检测条件色谱和质谱条件的优化：
[0019]①
、色谱条件
[0020]本实验针对流动相选择了甲醇
‑
水、甲醇
‑
0.1％甲酸水溶液和乙腈
‑
0.本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种参仙升脉口服液超高效液相检测方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：
⑴
、对照品溶液的制备：称取芦丁、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂酚、补骨脂素、异补骨脂素对照品，分别置于量瓶中，加甲醇溶解并定容，作为对照品贮备液；再用甲醇将各对照品贮备液稀释至适宜浓度，即得；
⑵
、供试品溶液的制备：取参仙升脉口服液，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得；
⑶
、色谱检测条件为：色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相采用甲醇(A)和0.07～0.12％甲酸水(B)梯度洗脱，洗脱程序为0～13min，5％～60％A；13～27min，60％～95％A；27～30min，95％A，流速0.1～0.5mL
·
min
‑1，进样量1～3μL，柱温25～35℃；
⑷
、质谱条件为：离子源为加热电喷雾离子源(H
‑
ESI)，喷雾电压为3～5kV，鞘气(N2)流量30～50arb，辅助气流量8～12arb，辅助加热器温度330～370℃，毛细管温度310～330℃，S
‑
lens射频水平45～55，自动增益控制(AGC)100～110，扫描方式采用正、负离子Full MS/dd
‑
MS2模式，FullMS分辨率60000～80000，dd
‑
MS2分辨率30000～40000；扫描范围m/z100～2000，碰撞能量20～8eV；
⑸
、数据处理：根据质谱精确相对分子量信息，选择一级准分子离子峰质荷比实测值与理论值误差小于5ppm的分子，与参仙升脉口服液化学成分数据库信息进行匹配，初步推测化合物信息，采用Xcalibur 2.0软件进一步对...

【专利技术属性】
技术研发人员：李晔，刘峰，刘洋，宗时宇，张红，孙婷婷，王春柳，龙凯花，
申请(专利权)人：山东步长制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：