促进细胞增殖的方法及包含细胞因子的化妆品或药物技术

本发明专利技术属于细胞培养技术领域。更具体地，涉及促进成纤维细胞增殖的组合物、富含细胞因子的成纤维细胞提取物及其制备和在化妆品或药物中的用途。其中所述促进成纤维细胞增殖的组合物，包含氧化苦参碱。试验结果显示，浓度范围介于0.1～3μmol/L的氧化苦参碱对皮肤成纤维的增殖、合成Ⅰ型胶原蛋白及分泌TGF

【技术实现步骤摘要】
促进细胞增殖的方法及包含细胞因子的化妆品或药物


[0001]本专利技术属于细胞培养
更具体地，涉及促进成纤维细胞增殖的组合物、富含细胞因子的成纤维细胞提取物及其制备和在化妆品或药物中的用途。

技术介绍

[0002]人的皮肤由包括角质层的表皮、真皮以及结合组织构成，其中角质层由通过作为表皮(epidermis)基底细胞的角质细胞(keratinocyte)的分化过程形成的死去的细胞层构成，起到从外部环境的影响中保护人体的作用。并且，存在于皮肤内部的真皮层由胶原蛋白(collagen)和弹性蛋白(elastin)构成，给皮肤带来弹性，起到防止皮肤下坠的作用。而人皮肤成纤维细胞(human skin fibroblast，人成纤维细胞)是皮肤组织重要结构成分，可合成和分泌胶原纤维、弹性纤维、网状纤维、透明质酸等细胞外基质，具有维持皮肤结构稳定、保持强度和弹性、修复损伤等功能。
[0003]植物天然成分能够调控成纤维细胞的增殖及其分泌胶原蛋白的能力已经有所报道，例如二氢黄酮衍生物或其盐能够通过作用角质化细胞从而增强成纤维细胞产生胶原蛋白的能力(CN101384246B)；丝瓜皂苷和苦瓜皂苷能够促进成纤维细胞的增殖，促进成纤维细胞分泌生物活性物质(CN108265023A)；人参皂苷Ro或含有该皂苷的植物提取物能够促进成纤维细胞生长培养基中胶原蛋白的合成(CN1146153)。另一方面，经植物天然成分诱导培养获得的成纤维细胞提取物通常被发现具有良好的美容或者医药方面的用途，例如经丝瓜皂苷和苦瓜皂苷诱导培养获得的成纤维细胞提取物被发现具有促进皮肤或毛发新生、促进创伤修复、抗皮肤光老化和减少疤痕形成等生物学功效。
[0004]氧化苦参碱(Oxymatrine,OM)，化学结构式如下式1。其具有多种药理作用，如抗癌、消炎、免疫调节、抗病毒和抗肝纤维化等，然而，迄今未见氧化苦参碱用作成纤维细胞的培养及诱导其产生更多有利的细胞因子的报道。
[0005]
技术实现思路

[0006]针对现有技术存在的缺陷和不足，本专利技术提供促进成纤维细胞增殖的组合物、富含细胞因子的成纤维细胞提取物及其制备和在化妆品或药物中的用途。
[0007]本专利技术其中一个专利技术目的是提供一种促进成纤维细胞增殖的组合物，包含氧化苦参碱。在本专利技术其中一个实施方式中，所述氧化苦参碱的浓度为0.1～3μmol/L；例如可以是0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.3μmol/L、0.4μmol/L、0.5μmol/L、0.6μmol/L、0.7μmol/L、0.8μ
mol/L、0.9μmol/L、1.0μmol/L、1.1μmol/L、1.2μmol/L、1.3μmol/L、1.4μmol/L、1.5μmol/L、1.6μmol/L、1.7μmol/L、1.8μmol/L、1.9μmol/L、2.0μmol/L、2.1μmol/L、2.2μmol/L、2.3μmol/L、2.4μmol/L、2.5μmol/L、2.6μmol/L、2.7μmol/L、2.8μmol/L、2.9μmol/L或3μmol/L；更好的是0.5μmol/L、1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L或3.0μmol/L；最好的是0.5μmol/L。
[0008]基于大量的前期研究发现，氧化苦参碱浓度介于0.1～3μmol/L时有促进成纤维细胞贴壁和增殖的能力，并且获得的细胞上清液中检测到更高含量的胶原蛋白和细胞因子；而随着氧化苦参碱浓度的增加，对成纤维细胞的增殖能力促进作用渐弱；当氧化苦参碱浓度＞10μmol/L时表现为不促进甚至抑制成纤维细胞的增殖及其分泌细胞因子的能力。
[0009]由表1可知：浓度范围介于0.1～3μmol/L之间的氧化苦参碱对皮肤成纤维的增殖具有促进的作用，作用随着浓度的降低而增强；10.0μmol/L的氧化苦参碱对皮肤成纤维细胞没有毒性作用，但也没有促进增殖的作用；12.0μmol/L氧化苦参碱对细胞具有一定的毒性作用，显微镜下观察部分细胞形态异常。
[0010]由表2可知，加入0.1～10μmol/L的氧化苦参碱均能促进成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白及分泌TGF
‑
β1和bFGF，其中0.5～3μmol/L的氧化苦参碱对成纤维细胞合成Ⅰ型胶原蛋白及分泌TGF
‑
β1和bFGF的促进效应最为明显，与对照组相比存在极显著的差异(P＜0.01)；随着氧化苦参碱浓度的增加，促进效应逐渐减弱。
[0011]另一方面，专利技术人发现，采用特定浓度的氧化苦参碱与右旋糖酐共同诱导培养成纤维细胞，其增殖能力、胶原蛋白合成能力更加显著，从而获得的上清液中胶原蛋白、细胞因子的含量更高。优选地，在本专利技术其中一个实施方式中，右旋糖酐的浓度通常介乎0.01～0.1％，例如可以是0.01％、0.02％、0.03％、0.04％、0.05％、0.06％、0.07％、0.08％、0.09％或0.1％；优选为0.05％。
[0012]由表3可知，0.05％的右旋糖酐与0.5～3.0μmol/L氧化苦参碱联合诱导培养后对成纤维细胞的促增殖作用、胶原蛋白合成及细胞因子分泌效应显著强于右旋糖酐或氧化苦参碱单独诱导培养时，联合诱导培养获得的培养上清中CollagenⅠ的含量高达200μg/mL以上。
[0013]本专利技术另一专利技术目的在于提供一种富含细胞因子的成纤维细胞提取物的制备方法，包括以下步骤：
[0014]步骤1：获取成纤维细胞；
[0015]步骤2：将成纤维细胞置于含有所述促进成纤维细胞增殖的组合物的基础培养基中培养，收集上清，过滤，浓缩，灭菌，即得。
[0016]在本专利技术其中一个实施方式中，所述步骤1中成纤维细胞可以来源于皮肤组织，其制备可以包括以下具体步骤：
[0017]对皮肤组织样本进行预处理，剪成组织块，酶化消化得到成纤维细胞进行原代培养，待细胞融合度达到80
‑
90％时，按比例进行传代培养，获得成纤维细胞群。
[0018]在本专利技术其中一个实施方式中，所述预处理包括：用含有青霉素的磷酸盐缓冲液冲洗皮肤组织样本1
‑
3次。优选的，磷酸盐缓冲液中青霉素的浓度为100U/ml。
[0019]在本专利技术其中一个实施方式中，酶化消化优选采用0.25％的中性蛋白酶过夜培养，过夜后分离表皮与真皮；收集的真皮组织采用胶原蛋白酶消化1～3小时。
[0020]在本专利技术其中一个实施方式中，步骤2中成纤维细胞最好是经传代至3
‑
5代的处于
生长旺盛期的细胞。
[0021]在本专利技术其中一个实施方式中，步骤2中基础培养基中含有0.1～3μmol/L浓度的氧化苦参碱，氧化苦参碱的浓度可以是0.1～3μmol/L范围内的任意值，例如可以是0.1μmol/L、0.2μmol/L、0.3μmol/L、0.4μmol/L、0.5μmol/L、0.6μmol/L、0.7μmol/L、0.8μmol/L、0.9μmo本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.促进成纤维细胞增殖的组合物，其特征在于，包含氧化苦参碱。2.根据权利要求1所述组合物，其特征在于，所述氧化苦参碱的浓度为0.1～3μmol/L。3.根据权利要求1或2所述组合物，其特征在于，还包含右旋糖酐0.01～0.1％。4.富含细胞因子的成纤维细胞提取物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1：获取成纤维细胞；步骤2：将成纤维细胞置于含有根据权利要求1～3任一项所述促进成纤维细胞增殖的组合物的基础培养基中培养，收集上清，过滤，浓缩，灭菌，即得。5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，步骤2中所述基础培养基为DMEM培养基。6.根据权利要求4或5所述制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗志平，
申请(专利权)人：广州源创生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：