一种重组融合蛋白及其制备方法和应用技术

本发明专利技术公开了一种金黄色葡萄球菌α

【技术实现步骤摘要】
NO.1所示。
[0010]本专利技术所述的重组融合蛋白由4条金黄色葡萄球菌α
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溶血素抗原表位多肽和4条金黄色葡萄球菌β
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溶血素抗原表位多肽、连接子以及His标签组成。
[0011]本专利技术所述的4条金黄色葡萄球菌α
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溶血素抗原表位多肽的氨基酸序列分别为：
[0012]抗原表位多肽2：LVTYDKENGMAKKVFYSFID；
[0013]抗原表位多肽5：TLKYVQPDFKTILESPTDKK；
[0014]抗原表位多肽9：TMDRKASKQQTNIDVIYERV；
[0015]抗原表位多肽10：WTDRSSERYKIDWEKEEMTN。
[0016]本专利技术所述的4条金黄色葡萄球菌β
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溶血素抗原表位多肽的氨基酸序列分别为：
[0017]抗原表位多肽17：TQSEDSRCGAGHDRKIRAEQ；
[0018]抗原表位多肽18：AEQMKEISDFVKKKNIPKDE；
[0019]抗原表位多肽21：YPNGKPEHLDYIFTDKDHKQ；
[0020]抗原表位多肽22：EVVTEKPKPWDVYAFPYYYV。
[0021]本专利技术所述的连接子的氨基酸序列为：GGGGS。
[0022]再一方面，本专利技术还公开了一种疫苗，所述的疫苗含有所述的重组融合蛋白。
[0023]再一方面，本专利技术还公开了一种所述的重组融合蛋白在制备金黄色葡萄球菌α
‑/>溶血素和β
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溶血素抗体检测试剂中的应用。如ELISA试剂盒中，作为包被抗原使用。
[0024]本专利技术公开的重组融合蛋白具有良好的抗原性，适用于金黄色葡萄球菌中α
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溶血素和β
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溶血素的抗体检测。且在检测过程中，只需要包被本专利技术公开的重组融合蛋白，即可满足金黄色葡萄球菌中α
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溶血素和β
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溶血素抗体检测的需求，不需要使用金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素分别包被酶标板进行检测，节约成本和时间。
[0025]另外，使用本专利技术公开的重组融合蛋白制备疫苗，具有良好的免疫原性。说明，本专利技术的一个重组融合蛋白即可达到金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素重组蛋白的免疫效果，可降低生产成本。
[0026]再者，本专利技术的重组融合蛋白包含4条金黄色葡萄球菌α
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溶血素和4条β
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溶血素的抗原表位多肽。这8条抗原表位多肽单独免疫小鼠均可产生较高的抗体效价，说明这8条抗原表位多肽具有良好的免疫原性。为金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素重组蛋白的研究提供了重要的参考(无需突变即可实现无毒且有良好免疫原性的重组蛋白的制备)，也为后续开发金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素的单克隆抗体提供了重要的线索(每条抗原表位多肽均可直接作为单克隆抗体开发中的免疫原使用，从而筛选特定靶位的单克隆抗体)。
附图说明
[0027]图1金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素重组融合蛋白SDS
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PAGE图，其中1是纯化后的金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素重组融合蛋白。
[0028]图2疫苗免疫后相对抗体效价检测结果。
具体实施方式
[0029]除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具
体的实施例的目的，不是旨在于限制本专利技术。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0030]除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。除非特别说明，以下实施例所用试剂和材料均为市购。
[0031]实施例1：金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素突变体重组蛋白的制备
[0032]参见中国专利技术专利CN201610068723实施例1～实施例5制备α
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溶血素突变体重组蛋白。参见中国专利技术专利CN201610068816实施例1～实施例6制备β
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溶血素突变体重组蛋白。
[0033]实施例2：金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素抗原表位多肽的设计和筛选
[0034]对实施例1中设计的α
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溶血素突变体重组蛋白和β
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溶血素突变体重组蛋白分别进行分析，设计合成了23条抗原表位多肽(表1)，其中α
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溶血素突变体重组蛋白10条，β
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溶血素突变体重组蛋白13条。将23条抗原表位多肽分别免疫小鼠，采集小鼠血清分别进行ELISA抗体效价检测，筛选抗体效价最高的抗原表位多肽。经过检测，共有8条抗原表位多肽的抗体效价最高(表1)，其中α
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溶血素突变体重组蛋白4条，β
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溶血素突变体重组蛋白4条。因此，选择这8条抗原表位多肽(第2、第5、第9、第10、第17、第18、第21、第22)作为后续研究的重点，其中第2、第5、第9、第10为α
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溶血素突变体重组蛋白筛选得到，第17、第18、第21、第22为β
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溶血素突变体重组蛋白筛选得到。
[0035]使用常规的ELISA方法检测抗体效价，简述为：使用α
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溶血素突变体重组蛋白和β
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溶血素突变体重组蛋白(实施例1制备)分别包被酶标板，100ng/孔，0.1ml/孔，4℃包被过夜；洗涤3次后，使用含2％的BSA的PBST封闭，37℃孵育2h；用PBS将小鼠血清做10倍系列稀释(10～107)，再分别加到相应的酶标板中，0.1ml/孔，37℃孵育1h；洗涤3次后，加入1:5000倍稀释的HRP标记的羊抗鼠IgG二抗，0.1ml/孔，37℃孵育30min；洗涤3次后，加入0.1ml TMB单组分显色液，37℃孵育10min；加入终止液(2M硫酸)，测定OD450nm值；当OD450nm值大于0.1时判定为阳性。
[0036]表1α
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溶血素和β
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溶血素重组蛋白抗原表位多肽筛选结果
[0037][0038][0039]实施例3：金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素重组融合蛋白的设计和制备
[0040]合并实施例2筛选到的8条抗原表位多肽，两两之间通过连接子进行连接，所述连接子的氨基酸序列为GGGGS，并在C端添加His标签，形成本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种重组融合蛋白，其特征在于，所述重组融合蛋白为金黄色葡萄球菌α
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溶血素和β
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溶血素重组融合蛋白，所述的重组融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。2.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，其特征在于，所述的重组融合蛋白由4条金黄色葡萄球菌α
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溶血素抗原表位多肽和4条金黄色葡萄球菌β
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溶血素抗原表位多肽、连接子以及His标签组成。3.根据权利要求1所述的重组融合蛋白，其特征在于，所述的4条金黄色葡萄球菌α
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溶血素抗原表位多肽的氨基酸序列分别为：抗原表位多肽2：LVTYDKENGMAKKVFYSFID；抗原表位多肽5：TLKYVQPDFKTILESPTDKK；抗原表位多肽9：TMDRKASKQQTNIDVIYERV；抗...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈健江，
申请(专利权)人：广州源创生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：