GC-MS/MS联用测定醰露替尼中游离肼的方法技术

本发明专利技术提供了GC

【技术实现步骤摘要】
GC
‑
MS/MS联用测定醰露替尼中游离肼的方法


[0001]本专利技术提供了GC
‑
MS/MS联用检测醰露替尼中游离肼的方法，本专利技术属于医药分析领域。

技术介绍

[0002]醰露替尼是一种选择性、ATP非竞争性MEK抑制剂。通过与MEK结合，阻断下游ERK1/2的磷酸化，抑制因RAS或RAF突变所致ERK信号通路的过度激活，使相应肿瘤细胞的增殖受到抑制，从而发挥靶点特异性抗肿瘤作用。
[0003]醰露替尼能选择性抑制MEK1活性，IC50为1.9nM，对MEK2的抑制作用较弱，IC50为888nM，对其它70多种激酶没有明显抑制活性。对A375细胞ERK磷酸化具有强大体外抑制活性(IC50为1.16nM)。对人肿瘤细胞特别是RAF或RAS突变的人肿瘤细胞具有选择性体外抗增殖作用，其中colo
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205、A375、HL
‑
60细胞最为敏感，IC50<1nM。而对正常细胞(MRC
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5)则没有明显抑制活性(IC50>1000nM)。体外抗肿瘤活性与Trametinib相近，强于AZD6244。
[0004]醰露替尼对A375、COLO
‑
205、Calu
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6、HT29等存在RAF或RAS突变的人肿瘤裸鼠移植模型均显示显著的体内抗肿瘤效应，在1
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9mg/kg范围药效呈现剂量依赖性。其中，A375和COLO
‑
205最为敏感，高剂量还可见一定程度的肿瘤消退。在A375裸鼠移植瘤模型，HL
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085起效剂量为1mg/kg，相应肿瘤抑制瘤(TGI)：60
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70％，瘤组织ERK磷酸化的抑制率可达73
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80％，相应血浆暴露水平：Cmax:309.8ng/ml，AUC(0
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t)：605.8ng/mL*h。3mg/kg肿瘤抑制率超过90％，与Trametinib 0.3mg/kg QD及AZD6244 25mg/kg BID相当，相应瘤组织ERK磷酸化的抑制率最高可达：90
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100％，单次给药抑制率50％以上可持续超过12h。显示本品抗肿瘤药效与抑制ERK磷酸化相关，p
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ERK可作为药效的生物标志物。此外，HL
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085对非RAF或RAS突变的人非小细胞肺癌细胞NCI
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H1975虽然没有明显体外抑制活性(IC50>1000nM)，但仍显示一定的体内抗肿瘤作用。在Calu
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6模型，本品与Docetaxel联用有一定增效作用。
[0005]醰露替尼在高剂量(6mg/kg,qd以上)下可观察到一定毒性反应，包括皮肤、消化道异常症状及动物体重增长减缓等，9mg/kg则接近最大耐受剂量。而在中低剂量(3mg/kg,qd及以下)，未观察到明显体重变化及其他毒性反应，显示出选择性抗肿瘤作用。
[0006]醰露替尼的化学名称为4
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氟
‑5‑
(2
‑
氟
‑4‑
碘苯胺)
‑
N
‑
(2
‑
羟基乙氧基)苯并[d]噻唑
‑6‑
甲酰胺，分子式C16H12F2IN3O3S，分子量491.25，化学结构如下：
[0007]醰露替尼抗肿瘤的药物，相应肿瘤细胞的增殖受到抑制，从而发挥靶点特异性抗肿瘤作用。
[0008]在醰露替尼的工艺合成中，使用到了肼类的化合物，而肼类化合物是明显的基毒
化合物，必须对其进行严格的控制。
[0009]现有的技术正对肼的检测方法有：
[0010]荧光探针检测法，中国专利CN108982447A公开了一种比率式荧光探针检测肼的方法，该方法操作复杂繁琐，耗时较长，主要应用于生物学领域。
[0011]离子色谱检测法，中国专利CN109682921A公开了一种离子色谱检测游离肼的方法，该方法使用电导检测器进行检测，色谱柱Thermo Dionex IonPac CS12A色谱柱，250mm*4mm，阳离子抑制器CERS 4mm，流动相：5mmol/l甲烷磺酸；流速：0.8ml/min
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1.3ml/min；柱温：28℃
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35℃。
[0012]紫外分光光度计法，中国专利CN102478521A中公开了一种将游离肼与对二甲氨基苯甲醛反应生成的黄色缩合物语456nm波长处有最大吸收，然后通过紫外分光光度计进行检测的方法。该方法需要检测前衍生增加了操作的难度，且要求产物在456nm处无吸收专属性不够强。
[0013]气相色谱检测法，中国专利CN103698459A中公开了一种应用顶空气相色谱(配有FID检测器)对药物中所含游离肼进行检测的方法。
[0014]目前尚未发现醰露替尼中游离肼的顶空气相质谱联用仪(EI源)检测方法。

技术实现思路

[0015]本专利技术针对现有技术中存在的不足，提供了一种GC
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MS/MS联用测定醰露替尼中游离肼的检测方法。可以用于醰露替尼中基毒杂质游离肼的测试，确保基毒杂质游离肼符合限度要求，保证醰露替尼的质量。
[0016]为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0017]一种醰露替尼中游离肼的检测分析方法，其特征在于，具体包括如下步骤：
[0018]1.一种用GC
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MS/MS联用检测方法测定醰露替尼中游离肼，其特征在于，选用石英毛细管色谱柱，以惰性气体为氦气为气源，柱子采取程序升温模式，分流模式，EI检测器，所述石英毛细管色谱柱30m～60m之间，柱径为0.25mm～0.53mm，涂层厚度在0.25um～3um之间，程序升温的条件为：起始温度为40℃～60℃，以5℃～20℃/min，最后温度为120℃～200℃，维持的时间为2～10min，再以20℃～40℃/min，升至180℃～260℃，维持的时间为3
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10min，恒定流速为1.0～5.0mL/min；顶空温度为85
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120℃，震摇时间为10
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50min，定量环平衡温度80
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130℃，传输线平衡温度105
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120℃；
[0019]2.质谱条件为：离子源为EI源。离子源温度200
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220℃，离子源接口温度210
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230℃，溶剂切除时间5.5min，质谱采集时间5.5
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15min，采集模式SIM，定量离子97，定性离子112。本专利技术一些实施方案中，石英毛细管色谱柱长度在30m～60m之间，柱径为0.25mm～0.53mm，涂层厚度在0.25um～3um之间。其中所述石英毛细管色谱柱长度优选30m，柱径优选0本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种醰露替尼中游离肼的分析方法，其特征在于，具体包括如下步骤：A.衍生化将游离肼对照品溶液或醰露替尼供试品溶液放入顶空瓶中，加入衍生化试剂，混合均匀，进行衍生，生成二丙酮腙，反应式见式I：(1)衍生化试剂：称量适量的苯甲酸固体，适量的N
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甲基吡咯烷酮溶解，加入一定体积的丙酮，混合均匀后，即为衍生化试剂；苯甲酸的浓度为0.05mg/mL～0.5mg/mL之间，丙酮的浓度为0.05mL/mL～0.5mg/mL之间；(2)取适量的游离肼对照品，加入0.5mg/mL～2.0mg/mL的EDTA二钠溶液溶解，各取一定体积的含游离肼对照品EDTA二钠溶液和衍生化剂放入顶空瓶中，混合均匀，作为对照品溶液；(3)取适量的醰露替尼供试品，加入0.5mg/mL～2.0mg/mL的EDTA二钠溶液溶解，各取一定体积的含醰露替尼供试品EDTA二钠溶液和衍生化剂放入顶空瓶中，加入顶空瓶中，混合均匀，作为供试品溶液；B.GC
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MS/MS条件为：所述方法是利用GC
‑
MS/MS联用检测方法进行的，其色谱条件为：气相色谱柱选用石英毛细管色谱柱，以惰性气体为气源，柱子采取程序升温模式，分流模式，EI检测器，其中所述惰性气体选择氦气，所述石英毛细管色谱柱30m～60m之间，柱径为0.25mm～0.53mm，涂层厚度在0.25um～3um之间，当所述载气气源是氦气时，程序升温的条件为：起始温度为40℃～60℃，以5℃～20℃/min，最后温度为120℃～200℃，维持的时间为2～10min，再以20℃～40℃/min，升至180℃～260℃，维持的时间为3
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10min，线速度为15～50cm/s；顶空温度为85
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120℃，震摇时间为10
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50min，定量环平衡温度80
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130℃，传输线平衡温度105
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120℃；C.质谱条件为：离子源为EI源。离子源温度200
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220℃，离子源接口温度210
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230℃，溶剂切除时间5.5min，质谱采集时间5.5
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15min，采集模式SIM，定量离子97，定性离子112。2.根据权利要求1(A)所述的方法，对照品和供试品的配样溶剂为EDTA二钠溶液，浓度为0.5mg/mL～2.0mg/mL，优选1.0mg/mL。3.根据权利要求1(A)所述的方法，其特征在于，在衍生化试剂中，苯甲酸的浓度为0.05mg/mL～0.5mg/mL之间，优选0.1mg/mL；丙酮的浓度为0.05mL/...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹平，左呈露，吴忠平，沈烨冰，
申请(专利权)人：江苏慧聚药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：