一种保护赖氨酸有关物质的检测方法技术

本发明专利技术属于医药技术领域，具体涉及一种保护赖氨酸有关物质的检测方法。采用高效液相色谱柱分离，以紫外检测器检测，以三氟乙酸水溶液为流动相A，三氟乙酸乙腈溶液为流动相B。本发明专利技术的检测方法，能够快速有效检测保护赖氨酸有关物质且主峰与各杂质间分离度较佳，线性关系良好，精密度高，准确度良好，重复性好。重复性好。

【技术实现步骤摘要】
一种保护赖氨酸有关物质的检测方法


[0001]本专利技术属于医药
，具体涉及一种保护赖氨酸有关物质的检测方法。

技术介绍

[0002]多肽类药物相对于小分子药物来说稳定性较差，在体内易降解，半衰期短，这些特殊性使得该类药物的主要临床应用剂型为注射剂。而且多肽类药物常用于治疗慢性疾病，需频繁注射，给患者带来了很大的痛苦。对多肽进行化学修饰，改善其在体内稳定性，延长其在体内半衰期以减少给药次数是一种有效的解决途径，引起学术界广泛关注。多肽起始物料为保护氨基酸，保护赖氨酸进行化学修饰的位点大多选择赖氨酸上的ε
‑
氨基，Lys中的ε
‑
氨基碱性很强，同时具有亲核作用。Fmoc策略中，Boc基团是比较好的保护基团，对碱的稳定性好，可以有效抑制副反应的发生。保护赖氨酸(Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH)的结构式如下：
[0003][0004]目前保护赖氨酸的合成及其在多肽类药物的应用多篇文献已经报道，但是保护赖氨酸有关物质的检测方法却鲜有报道，尤其是其中含有的杂质I Fmoc
‑
Lys
‑
OH
·
HCl、杂质II Fmoc
‑
β
‑
Ala
‑
OH、杂质III Fmoc
‑
β
‑
Ala
‑
Lys(Boc)
‑
OH和杂质IV Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
Lys(Boc)
‑
OH；各杂质具体结构如下所示:
[0005][0006][0007]作为合成多肽药物的重要原料之一，保护赖氨酸的质量也是影响多肽类药物质量的关键因素。尤其是杂质的存在，是影响临床用药安全的重要因素，对于起始物料中的杂质引入更应该尽量避免或减少。因此很有必要提供一种可以便捷、快速检测保护赖氨酸有关物质的方法，以尽可能的控制好保护赖氨酸作为原料在多肽药物中的应用。

技术实现思路

[0008]保护赖氨酸中含有杂质峰，现有技术在检测保护赖氨酸时杂质与主峰不能有效的分离。本专利技术的目的在于提供一种保护赖氨酸有关物质的检测方法，使保护赖氨酸中各组分的峰能够有效分离，快速定位并完成检测。
[0009]本专利技术的技术方案如下：
[0010]一种保护赖氨酸有关物质的检测方法，采用高效液相色谱法分离检测，色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，三氟乙酸水溶液为流动相A，三氟乙酸乙腈溶液为流动相B，以紫外检测器检测。
[0011]优选地，所述方法中，所述的色谱柱为Sino Chrom ODS
‑
BP、Ultimate SX
‑
C18、Agilent ZORBAX SB
‑
C18或Thermo BDS HYPERSIL C18。
[0012]优选地，所述方法中，所述的色谱柱规格为4.6mm
×
250mm。
[0013]优选地，所述方法中，待测样品的进样体积为5μL～20μL；优选为10μL。
[0014]优选地，所述方法中，所述流动相的流速为0.8～1.5ml/min；优选为1.0ml/min。
[0015]优选地，所述方法中，柱温为20℃～35℃；优选为30℃。
[0016]优选地，所述方法中，检测波长为220～265nm；优选为265nm。
[0017]进一步优选地，所述的流动相A的三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的浓度为0.08％～0.12％；流动相B的三氟乙酸乙腈溶液中三氟乙酸的浓度为0.08％～0.12％。
[0018]更一步优选地，所述方法中的流动相A为0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B为0.1％三氟乙酸乙腈溶液。
[0019]优选地，所述方法中的洗脱方式为以60～100％的B流动相梯度洗脱。
[0020]优选地，所述方法中梯度洗脱的条件如下：
[0021][0022]进一步优选地，所述方法中梯度洗脱条件如下：
[0023][0024]在一个优选的试验方案中，该检测方法包括如下步骤：
[0025]1.对照品溶液配制
[0026](1)杂质Ⅰ定位溶液
[0027]精密称取Fmoc
‑
Lys
‑
OH
·
HCl对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含5μg的溶液，作为杂质Ⅰ定位溶液。
[0028](2)杂质Ⅱ定位溶液
[0029]精密称取Fmoc
‑
β
‑
Ala
‑
OH对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含5μg的溶液，作为杂质Ⅱ定位溶液。
[0030](3)杂质Ⅲ定位溶液
[0031]精密称取Fmoc
‑
β
‑
Ala
‑
Lys(Boc)
‑
OH对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含5μg的溶液，作为杂质Ⅲ定位溶液。
[0032](4)杂质Ⅳ定位溶液
[0033]精密称取Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
Lys(Boc)
‑
OH对照品适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含5μg的溶液，作为杂质Ⅳ定位溶液。
[0034](5)保护赖氨酸定位溶液
[0035]精密称取Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为保护赖氨酸定位溶液。
[0036]2.供试品溶液的配制
[0037]精密称取Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH适量，加溶剂溶解并稀释制成每1ml中含1mg的溶液，作为供试品溶液。
[0038]3.混合溶液的配制
[0039]精密称取Fmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH适量，加溶剂溶解，再分别精密量取加入步骤(1)、(2)、(3)、(4)各杂质储备液，稀释制成每1ml中含1mgFmoc
‑
Lys(Boc)
‑
OH、含杂质Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ各5μg的溶液作为混合溶液。
[0040]采用高效液相色谱仪分析制得的待测样品，其色谱条件为：色谱柱：依利特
‑
Sino Chrom ODS
‑
BP，5μm,4.6mm
×
250mm；进样量为10μL，柱温：30℃；紫外检测器检测，检测波长为265nm，流速1.0ml/min，流动相A的三氟乙酸水溶液中三氟乙酸的浓度0.08％～0.12％；流动相B的三氟乙酸乙腈溶液中三氟乙酸的浓度为0.08％～0.12％；采用如下梯度洗脱：
[0041][0042]优选地，采用本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种保护赖氨酸有关物质的检测方法，其特征在于，采用高效液相色谱法分离检测，色谱柱填料为十八烷基硅烷键合硅胶，三氟乙酸水溶液为流动相A，三氟乙酸乙腈溶液为流动相B，以紫外检测器检测。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述的色谱柱为Sino Chrom ODS
‑
BP、Ultimate SX
‑
C18、Agilent ZORBAX SB
‑
C18或Thermo BDS HYPERSIL C18。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述色谱柱规格为4.6mm
×
250mm。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，待测样品的进样体积为5μL...

【专利技术属性】
技术研发人员：李铁健，杨欣茹，刘忠，
申请(专利权)人：山东新时代药业有限公司，
类型：发明
国别省市：