一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法技术

本发明专利技术公开了一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法。该方法首先将猕猴桃破碎打浆，加入抗氧化剂，采用惰性气体保护防止褐变，然后加入乙醇

【技术实现步骤摘要】
一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法


[0001]本专利技术属于植物多酚提取检测
，具体涉及一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法。

技术介绍

[0002]猕猴桃，又称奇异果，因其口味鲜美、营养价值高受到广大消费者的喜爱。猕猴桃含有丰富的VC、膳食纤维、氨基酸，钙、钾等矿物质元素以及多酚类化合物，其中猕猴桃多酚类化合物被认为是猕猴桃的主要活性物质。可以调节血液循环，影响血管的渗透性和柔韧度，从而预防血管老化和脑血管供血不足。尽管多酚广泛存在于猕猴桃中，然而猕猴桃中多酚的含量受诸多因素影响，如加工过程及储存条件等。多酚类物质如单宁、槲皮素、杨梅素、表儿茶素、原儿茶酸、绿原酸、对香豆酸、阿魏酸、没食子酸、根皮苷等，通过测定多酚类物质的含量高低，可以在一定程度上判断猕猴桃品质的好坏。
[0003]但是，植物多酚的应用及相关领域，多酚鉴定与其含量或纯度测定是非常重要也是最常遇到的问题，由于植物多酚与黄酮类、蒽醌类、简单酚和木质素等在植物体内共存并且性质相近，其本身更是一类结构和性质都极为相似的混合物，并且多酚性质较为活泼，很易发生缩合或者降解，因此对其进行精确定量比较困难，特别是用分离提纯的方法对其进行定量测定是极其困难的。目前关于植物多酚含量的测定方法有数十种，但是获得一种快速、简便、准确地测定出各类样品中多酚含量的方法尚处于进一步研究开发中，必须根据实际情况选择不同的测定方法及相关测试条件，如何选择合适的测定法和标准物，以及样品的制备与多酚的提取检测条件，均会对测定结果有很大影响。专利文献CN107621456A报道了一种猕猴桃多酚含量的测定方法，其包括浸提、测定吸光度数值、重复浸提、计算多酚当量、计算多酚含量等步骤，但其是针对总多酚含量进行测定，其提取率不高，检测结果不够精确，无法快速、准确测定出多种多酚的含量。期刊文献《从猕猴桃中提取多酚的研究》研究了提取猕猴桃中多酚的最佳工艺条件，得出采用30％的丙酮溶液按1:9的料液比，在35℃下提取30min，但其也仅仅是针对总酚含量进行测定，无法对猕猴桃果肉中数十种多酚含量进行检测，且其检测准确性不高，检测结果精密度不够。
[0004]综上所述，现有技术中有关猕猴桃中多酚类化合物的检测方法，存在提取效率不高或者是检测手段复杂，往往需要采用多种精密检测仪器进行联用的方法，才能较准确地测定出猕猴桃中各种多酚类物质的含量，对于猕猴桃多酚的检测方法，尚需提供一种准确度和精密度高，且检测手段操作简单、方便，能够快速精准检测出猕猴桃中植物多酚化合物的方法。

技术实现思路

[0005]本专利技术的目的就是为了解决上述技术问题，从而提供一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法，具备检测准确度和精密度高、多酚提取液稳定性好，能够同时检测出猕猴桃中多酚类化合物的含量。
[0006]为了实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
[0007]一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0008]A.猕猴桃多酚类化合物的提取：首先将猕猴桃破碎打浆，加入抗氧化剂，采用惰性气体保护防止褐变，然后加入乙醇
‑
水溶液超声提取，收集上清液后重复提取2
‑
3次，合并上清液，获得多酚提取液；
[0009]B.标准溶液的配制：取槲皮素、杨梅素、表儿茶素、原儿茶酸、绿原酸、对香豆酸、阿魏酸、没食子酸、根皮苷标准品，分别用色谱甲醇溶解，配制成600mg/L的基础液，再逐级稀释配成浓度为0.05、0.5、5、25、50、100mg/L的标准溶液，再配制成混合标准溶液备用，取20μL标准溶液进样分析，得到标准品色谱图，再制作成标准曲线；
[0010]C.采用高效液相色谱仪测定步骤A获得的多酚提取液中多酚类化合物的含量，色谱柱为：Atlantis C18(250mm*4.6mm，5μm)，流动相A为体积比为1％乙酸水溶液(V/V)；流动相B为体积比为0.2％乙酸
‑
乙腈水；选择柱温，选择流动相梯度洗脱，选择波长后检测，得到猕猴桃样品色谱图，根据高效液相色谱仪检测出的猕猴桃样品色谱图与标准品色谱图进行对比鉴定，通过标准曲线对猕猴桃中多酚类化合物进行定量分析。
[0011]其中步骤A中所述的惰性气体为氮气或氩气，所述的抗氧化剂为丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、抗坏血酸其中的任意一种。
[0012]其中步骤A中乙醇
‑
水溶液中乙醇的浓度为30
‑
60％。
[0013]其中步骤B中超声提取的功率为梯度洗脱程序如下：0
‑
30min，流动相A的体积占比为90％
‑
45％；30
‑
60min，流动相A的体积占比为45％
‑
0％；60
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70min，流动相A的体积占比为0％
‑
50％；70
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80min，流动相A的体积占比为50％
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90％。
[0014]其中步骤B中所述的槲皮素、杨梅素、表儿茶素、原儿茶酸、绿原酸、对香豆酸、阿魏酸、没食子酸、根皮苷标准品的纯度≥98％。
[0015]其中步骤C中所述的柱温25
‑
35℃。
[0016]其中步骤C中所述的检测波长为240
‑
380nm。
[0017]有益效果：采用本专利技术的检测方法共检测出槲皮素、杨梅素、表儿茶素、原儿茶酸、绿原酸、对香豆酸、阿魏酸、没食子酸、根皮苷等9种多酚类化合物，本专利技术提供的方法样品前处理简单，成本低，具备检测准确度和精密度高、多酚提取液稳定性好，可推广应用到快速富含多酚的水果检测中。
具体实施例
[0018]为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下实施例仅仅用于对本专利技术进行解释和说明，并不用于限定本专利技术。本领域技术人员根据上述
技术实现思路
所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本专利技术的保护范围。
[0019]实施例1
[0020]一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法，所述方法包括以下步骤：
[0021]A.猕猴桃多酚类化合物的提取：首先将猕猴桃破碎打浆，加入抗氧化剂，采用惰性气体保护防止褐变，然后加入乙醇
‑
水溶液超声提取，收集上清液后重复提取3次，合并上清
液，获得多酚提取液；
[0022]B.标准溶液的配制：取槲皮素、杨梅素、表儿茶素、原儿茶酸、绿原酸、对香豆酸、阿魏酸、没食子酸、根皮苷标准品，分别用色谱甲醇溶解，配制成600mg/L的基础液，再逐级稀释配成浓度为0.05、0.5、5、25、50、100mg/L的标准溶液，再配制成混合标准溶液备用，取20μL标准溶液进样分析，得到标准品色谱图，再制作成标准曲线；
[0023]C.采用高效液相色谱仪测定步骤A获得的多酚提取液中多酚类化合物的含量，色谱柱为：Atlantis C18本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：A.猕猴桃多酚类化合物的提取：首先将猕猴桃破碎打浆，加入抗氧化剂，采用惰性气体保护防止褐变，然后加入乙醇
‑
水溶液超声提取，收集上清液后重复提取2
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3次，合并上清液，获得多酚提取液；B.标准溶液的配制：取槲皮素、杨梅素、表儿茶素、原儿茶酸、绿原酸、对香豆酸、阿魏酸、没食子酸、根皮苷标准品，分别用色谱甲醇溶解，配制成600mg/L的基础液，再逐级稀释配成浓度为0.05、0.5、5、25、50、100mg/L的标准溶液，再配制成混合标准溶液备用，取20μL标准溶液进样分析，得到标准品色谱图，再制作成标准曲线；C.采用高效液相色谱仪测定步骤A获得的多酚提取液中多酚类化合物的含量，色谱柱为：Atlantis C18：250mm*4.6mm，5μm，流动相A为体积比为1％乙酸水溶液；流动相B为体积比为0.2％乙酸
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乙腈水；选择柱温，选择流动相梯度洗脱，选择波长后检测，得到猕猴桃样品色谱图，根据高效液相色谱仪检测出的猕猴桃样品色谱图与标准品色谱图进行对比鉴定，通过标准曲线对猕猴桃中多酚类化合物进行定量分析。2.根据权利要求1所述的基于高效液相色谱仪检测猕猴桃中多酚化合物的方法，其特征在于，步骤A中所述的惰性气体为氮气或氩气，所述的抗氧化剂为丁基羟基茴香醚、二丁基羟基甲苯、没食子酸丙酯、抗坏血酸其...

【专利技术属性】
技术研发人员：晏印雪，赵泽伟，乔世玉，
申请(专利权)人：贵阳海关综合技术中心贵州国际旅行卫生保健中心，贵阳海关口岸门诊部，
类型：发明
国别省市：