一种细胞冻存液和细胞冻存和/或回输的方法技术

本申请涉及细胞冻存领域，特别是涉及一种细胞冻存液和细胞冻存和/回输的方法。该细胞冻存液的组分包括：5.0

【技术实现步骤摘要】
一种细胞冻存液和细胞冻存和/或回输的方法


[0001]本申请涉及细胞冻存
，特别是涉及一种细胞冻存液和细胞冻存和/或回输的方法。

技术介绍

[0002]细胞冻存是一种长期储存的技术，通常是指将细胞放在超低温环境，来减少细胞代谢。细胞冻存是主要保存细胞的方式，它能够起到细胞保种的作用。利用这个冻存技术将细胞置于
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196℃液氮中低温保存，这种处理可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞使用。
[0003]本申请的专利技术人在长期的研发过程中，发现，目前市面上的免疫细胞冻存液多以患者自体血浆、胎牛血清配制而成，这些细胞冻存液存在以下问题：1.患者自体血浆数量和来源有限，不适合细胞扩增培养后的大规模冻存，且冻存过程繁琐、批次控制较难；2.使用动物血清会引入外源蛋白，增加动物病原污染的可能性，不可应用于临床。

技术实现思路

[0004]基于此，本申请提供一种可直接用于静脉回输且无需程序降温的细胞冻存液和细胞冻存和/或回输的方法，以解决上述
技术介绍
中提出的技术问题。
[0005]为解决上述技术问题，本申请采用的一个技术方案是：提出一种细胞冻存液，所述细胞冻存液的组分包括：5.0
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9.0v/v％DMSO、25.0
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40.0v/v％人血白蛋白、 0.08
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0.12g/mL海藻糖、20.0
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40.0v/v％右旋糖酐、1.5
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2.2mg/mL甘氨酸、 20.0
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22.0mg/mL甘露醇，余量为复方电解质注射液。
[0006]优选的，所述复方电解质注射液为氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁的灭菌水溶液。其含总氯量应为0.35％(g/ml)，含钠应为0.30％(g/ml)，含钾应为0.019％(g/ml)，含镁应为0.0039％(g/ml)，含葡萄糖酸根应为0.40％(g/ml)和含醋酸根应为0.18％(g/ml)。
[0007]优选的，所述人血白蛋白为稀释液产品，包括人血白蛋白原液和生理盐水，其中，人血白蛋白原液:生理盐水＝1g:5mL，稀释液产品的人血白蛋白原液浓度为20％。
[0008]优选的，所述右旋糖酐为为稀释液产品，包括右旋糖酐原液和生理盐水，其中，右旋糖酐原液:生理盐水＝1g:10mL，稀释液产品的右旋糖酐原液浓度为10％。
[0009]优选的，所述DMSO为产品，其浓度高于99.9％。
[0010]优选的，所述海藻糖为产品，其纯度高于99.3％。
[0011]优选的，所述甘氨酸为产品，其纯度高于99.0％。
[0012]优选的，所述甘露醇为产品，其纯度高于99.9％。
[0013]为解决上述技术问题，本申请采用的一个技术方案是：提出一种细胞冻存和/ 或回输的方法，将细胞与如权利要求前述的细胞冻存液混合后，进行冻存和/或回输操作。
[0014]优选的，所述细胞为脐带间充质干细胞、脐带血单个核细胞或外周血CIK细胞。
[0015]优选的，所述冻存操作包括以下步骤：
[0016]将前述的细胞冻存液加入至细胞中，吹打混匀至呈均一状态，得到细胞混悬液，其中，细胞冻存密度为1
×
106/mL～1
×
108/mL；
[0017]将所述细胞混悬液分装至冻存管或者冻存袋中；
[0018]将分装后的所述细胞混悬液于
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60～
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80℃冷冻，过夜后，直接转移至
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196℃液氮罐长期保存。
[0019]优选的，当细胞需要应用于复苏扩增时，取出液氮罐中储存的冻存细胞，置于 37
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40℃复温设备中快速复温，细胞解冻后，吸取细胞悬液，直接加入细胞培养基中稀释混匀，取样测量细胞数量及活率，将细胞培养液转移至培养容器中培养；
[0020]或者，当细胞需要应用于临床使用时，取出液氮罐中储存的冻存细胞，置于 37
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40℃复温设备中快速复温，细胞解冻后，用注射器抽取细胞悬液，直接加入生理盐水中稀释混匀，取样测量细胞数量及活率，并进行无菌检测，用于临床静脉输注。
[0021]优选的，所述冷冻时间大于6小时；和/或
[0022]所述快速复温时间为1～5min；和/或
[0023]所述复温设备为恒温水浴设备，水浴温度为37℃。
[0024]优选的，所述细胞用于复苏扩增或临床使用时，稀释混匀比例至少为10倍，使 DMSO终浓度限制在0.5％以下。
[0025]与现有技术相比，本申请实施例具有以下有益效果：
[0026]1)本申请的细胞冻存液的成分明确，满足细胞冻存制剂要求；
[0027]2)本申请的细胞冻存液冻存细胞无需程序降温，保持较高细胞活性；
[0028]3)本申请的细胞冻存液各组分均为临床级原料，可用于临床静脉输注，适用于多种细胞类型；
[0029]4)本申请无需洗涤细胞冻存液可直接将复苏后的细胞用于临床静脉输注的方式，简化了细胞应用前的处理流程；
[0030]5)本申请无需洗涤细胞冻存液可直接将复苏后的细胞进行接种培养的方式，简化了细胞复苏流程。
[0031]6)本申请采用恒温水浴设备进行快速复温，可以充分提高水浴温度的均匀性，保证水浴的温度平衡，以保证细胞在固液相变时，不会产生温度波动，防止细胞由液态转固态时产生冰晶导致细胞破裂。
具体实施方式
[0032]下面将结合本申请实施例，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本申请保护的范围。
[0033]本申请实施例提供了一种细胞冻存液，细胞冻存液的组分包括： 5.0
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9.0v/v％DMSO(例如，5v/v％、6v/v％、7v/v％、8v/v％或9v/v％DMSO)、 25.0
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40.0v/v％人血白蛋白(例如，25v/v％、30v/v％、35v/v％或40v/v％人血白蛋白)、 0.08
‑
0.12g/mL海藻糖(例如，0.08g/mL、0.10g/mL或0.12g/mL海藻糖)、20.0
‑
40.0v/v％右旋糖酐(例如，20v/v％、30v/
v％或40v/v％右旋糖酐)、1.5
‑
2.2mg/mL甘氨酸(例如，1.5mg/mL、1.8mg/mL或2.2mg/mL甘氨酸)、20.0
‑
22.0mg/mL甘露醇(例如， 20mg/mL、21mg/mL或22mg/mL甘露醇)，余量为复方电解质注射液。
[0034]在某些实施例中，复方电解质注射液为氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液的组分包括：5.0
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9.0v/v％DMSO、25.0
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40.0v/v％人血白蛋白、0.08
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0.12g/mL海藻糖、20.0
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40.0v/v％右旋糖酐、1.5
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2.2mg/mL甘氨酸、20.0
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22.0mg/mL甘露醇，余量为复方电解质注射液。2.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述复方电解质注射液为氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁的灭菌水溶液，其含总氯量应为0.35％(g/ml)，含钠应为0.30％(g/ml)，含钾应为0.019％(g/ml)，含镁应为0.0039％(g/ml)，含葡萄糖酸根应为0.40％(g/ml)和含醋酸根应为0.18％(g/ml)。3.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述人血白蛋白为稀释液产品，包括人血白蛋白原液和生理盐水，其中，人血白蛋白原液:生理盐水＝1g:5mL，稀释液产品的人血白蛋白原液浓度为20％。4.根据权利要求1所述的细胞冻存液，其特征在于，所述右旋糖酐为为稀释液产品，包括右旋糖酐原液和生理盐水，其中，右旋糖酐原液:生理盐水＝1g:10mL，稀释液产品的右旋糖酐原液浓度为10％。5.一种细胞冻存和/或回输的方法，其特征在于，将细胞与如权利要求1至4中任一项所述的细胞冻存液混合后，进行冻存和/或回输操作。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述细胞为脐带间充...

【专利技术属性】
技术研发人员：王丹，刘沐芸，杨声，江静，黄颖桦，侯凯翔，陈鹏，
申请(专利权)人：深圳科诺医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：