一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法技术

本发明专利技术公开了一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法，所述方法包括：一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法，所述间充质干细胞免疫调控功能参数包括淋巴细胞增殖的变化量、特定淋巴细胞亚群的比例变化量，淋巴细胞分泌TNF

【技术实现步骤摘要】
一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法


[0001]本专利技术涉及干细胞与再生医学
，尤其涉及一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法。

技术介绍

[0002]间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是一类具有自我更新能力和多向分化潜能的成体干细胞，来源于发育早期的中胚层和外胚层，可以在骨髓、脂肪、和脐带等多种组织中分离，在不同条件诱导下，可以分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、心肌细胞、肝细胞等多种功能细胞。间充质干细胞通过多向分化与旁分泌作用发挥组织再生与损伤保护作用。间充质干细胞易于外源基因的转染和表达，也是细胞治疗、组织器官缺损修复及进行基因治疗的理想载体细胞。
[0003]间充质干细胞还特有免疫调控功能，通过细胞直接接触与分泌转化生长因子β、吲哚胺2，3双加氧酶、肝细胞生长因子、前列腺素E2、一氧化氮等因子，对自然杀伤细胞、树突状细胞以及B、T淋巴细胞等多种免疫细胞的活化、增殖与分化进行调控，并能提高调节性T(T regulatory，Treg)细胞的比例，维持体内免疫环境的稳定。目前间充质干细胞的免疫调控特性已被应用于机型移植物抗宿主病、系统性红斑狼疮、1型糖尿病、类风湿性关节炎、细胞因子释放综合征(Cytokine release syndrome，CRS)等免疫异常和炎症相关疾病的临床研究中。
[0004]为了检验间充质干细胞在免疫调控功能方面的生物有效性，现有技术中的检测方法需要对其生物有效性的多种标志物只能通过逐一制备样本，逐一检测；随着检测标志物数量的增多，逐一检测的方式不仅成本高，且操作繁琐，不利于技术的发展和进步。
[0005]可见，现有技术有待进一步改进。

技术实现思路

[0006]为解决上述技术问题，本申请公开了一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法，能够解决现有技术中间充质干细胞免疫调控功能检测过程繁琐的问题，有利于提高检测效率。
[0007]本专利技术的技术方案如下：
[0008]一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法，所述间充质干细胞免疫调控功能参数包括淋巴细胞增殖的变化量、特定淋巴细胞亚群的比例变化量，淋巴细胞分泌TNF
‑
α的变化量，其中，所述方法包括：按照需求培养和处理淋巴细胞及间充质干细胞；利用所述淋巴细胞及所述间充质干细胞制备共培养组及对照组；根据待检测项目的要求对所述共培养组及对照组进行检测处理，一次性输出间充质干细胞免疫评价功能参数中的至少两种的检测结果。
[0009]其中，所述按照需求培养和处理淋巴细胞及间充质干细胞包括：制备淋巴细胞悬液，并检测所述淋巴细胞悬液的浓度；及将间充质干细胞置于容器中，并将其培养至完全贴
壁。
[0010]其中，所述方法还包括：使用染色剂对所述淋巴细胞悬液进行染色处理，并检测染色处理后的所述淋巴细胞悬液的浓度。
[0011]其中，所述方法具体包括：向所述淋巴细胞悬液中加入CFSE染色剂，使得所述染色剂的终浓度在第一染色剂浓度范围内；对染色后的所述淋巴细胞悬液进行孵育及淋巴细胞完全培养基重选细胞操作，之后检测处理后的所述淋巴细胞悬液的浓度。
[0012]其中，所述利用所述淋巴细胞及所述间充质干细胞制备共培养组及对照组的方法包括：按照预设比例向容置有所述间充质干细胞的容器及空置容器中加入已知浓度的所述淋巴细胞悬液，得到所述共培养组和所述对照组；当加入的所述淋巴细胞悬液为染色后的所述细胞悬液时，得到第一共培养组和第一对照组；当加入的所述淋巴细胞悬液为未染色的所述细胞悬液时，得到第二共培养组和第二对照组。
[0013]其中，所述根据待检测项目的要求对所述共培养组及对照组进行检测处理，一次性输出间充质干细胞免疫评价功能参数中的至少两种的检测结果的方法包括：从所述第一共培养组和所述第一对照组中收集培养后的淋巴细胞，并分离得到细胞沉淀和/或上清液；对所述细胞沉淀和/或所述上清液进行检测，得到淋巴细胞增殖的变化量、特定淋巴细胞亚群的比例变化量和/或淋巴细胞分泌TNF
‑
α的变化量。
[0014]其中，所述方法具体包括：采用酶联免疫法对所述上清液中进行TNF
‑
α浓度进行检测，得到淋巴细胞分泌TNF
‑
α的变化量。
[0015]其中，所述方法具体包括：对所述细胞沉淀进行死活标记及Treg细胞特异性抗体标记；对标记后的所述细胞沉淀进行检测，得到淋巴细胞增殖的变化量、特定淋巴细胞Treg细胞亚群的比例变化量。
[0016]其中，所述根据待检测项目的要求对所述共培养组及对照组进行检测处理，一次性输出间充质干细胞免疫评价功能参数中的至少两种的检测结果的方法包括：对培养后的所述第二共培养组和所述第二对照组加入刺激剂，并使得所述刺激剂的浓度达到预设的刺激剂浓度范围；收集刺激处理后的淋巴细胞，并进行死活标记及Th1细胞、Th2细胞或Th17细胞中至少一种的特异性标记；对所述特异性标记后的淋巴细胞进行检测，确定特定淋巴细胞Th1细胞、Th2细胞或Th17细胞亚群中至少一种的比例变化量。
[0017]其中，所述方法包括：所述刺激剂包括佛波酯、离子霉素或莫能霉素中的至少一种；所述所述佛波酯的添加终浓度为5
‑
250ng/ml、所述离子霉素添加终浓度为0.1
‑
5μg/ml、所述莫能霉素添加终浓度为0.5
‑
5μg/ml。
[0018]区别于现有技术的，本申请通过合理安排实验方案，根据待检测项目的要求对所述共培养组及对照组进行检测处理，一次性输出间充质干细胞免疫评价功能参数中的至少两种的检测结果。在多参数检测的过程中，能够有效降低检测次数，同时降低检测成本，提高检测效率。
附图说明
[0019]图1是本专利技术一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法第一实施方式的流程示意图；
[0020]图1A为本专利技术实施例3中间充质干细胞对特定淋巴细胞亚群(Th1细胞)比例的影
响结果图；
[0021]图1B为本专利技术实施例3中间充质干细胞对特定淋巴细胞亚群(Th2细胞)比例的影响结果图；
[0022]图1C为本专利技术实施例3中间充质干细胞对特定淋巴细胞亚群(Th17细胞)比例的影响结果图；
[0023]图2A为本专利技术实施例4中间充质干细胞对淋巴细胞增殖的影响结果图；
[0024]图2B为本专利技术实施例4中间充质干细胞对特定淋巴细胞亚群(Treg细胞)比例的影响结果图；
[0025]图3为本专利技术实施例5中间充质干细胞对淋巴细胞TNF
‑
α分泌的影响结果图。
具体实施方式
[0026]下面将结合实施例对本专利技术的实施方案进行详细描述，但是本领域技术员将会理解，下列实施例仅用于说明本专利技术，而不应视为限制本专利技术的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。
[0027]除非另有说明，本文中所用的专业与科学术语与本领域本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种间充质干细胞免疫调控功能的检测方法，所述间充质干细胞免疫调控功能参数包括淋巴细胞增殖的变化量、特定淋巴细胞亚群的比例变化量，淋巴细胞分泌TNF
‑
α的变化量，其特征在于，所述方法包括：按照需求培养和处理淋巴细胞及间充质干细胞；利用所述淋巴细胞及所述间充质干细胞制备共培养组及对照组；根据待检测项目的要求对所述共培养组及对照组进行检测处理，一次性输出间充质干细胞免疫评价功能参数中的至少两种的检测结果。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述按照需求培养和处理淋巴细胞及间充质干细胞包括：制备淋巴细胞悬液，并检测所述淋巴细胞悬液的浓度；及将间充质干细胞置于容器中，并将其培养至完全贴壁。3.根据权利要求2所述的检测方法，其特征在于，所述方法还包括：使用染色剂对所述淋巴细胞悬液进行染色处理，并检测染色处理后的所述淋巴细胞悬液的浓度。4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于，所述方法具体包括：向所述淋巴细胞悬液中加入CFSE染色剂，使得所述染色剂的终浓度在第一染色剂浓度范围内；对染色后的所述淋巴细胞悬液进行孵育及淋巴细胞完全培养基重选细胞操作，之后检测处理后的所述淋巴细胞悬液的浓度。5.根据权利要求2或3所述的检测方法，其特征在于，所述利用所述淋巴细胞及所述间充质干细胞制备共培养组及对照组的方法包括：按照预设比例向容置有所述间充质干细胞的容器及空置容器中加入已知浓度的所述淋巴细胞悬液，得到所述共培养组和所述对照组；当加入的所述淋巴细胞悬液为染色后的所述细胞悬液时，得到第一共培养组和第一对照组；当加入的所述淋巴细胞悬液为未染色的所述细胞悬液时，得到第二共培养组和第二对照组。6.根据权利要求5所述的检测方法，其特征在于，所述根据待检测项目的要求对所述共培养组及对照组进行检测处理，一次性输出间充质干细胞免疫评价功能参数中的至...

【专利技术属性】
技术研发人员：侯凯翔，刘沐芸，梁晓，梅秋红，崔诗慧，魏殿华，陈鹏，
申请(专利权)人：深圳科诺医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：