检测基因表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用技术

本申请公开了一种检测基因表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用，所述癌基因包括C

【技术实现步骤摘要】
检测基因表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用


[0001]本专利技术属于生物医药
，涉及一种检测C
‑
MYC、C
‑
FOS、K
‑
RAS、RB、P21和P53基因mRNA表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用，用于检测这几种基因在细胞内的表达。

技术介绍

[0002]肿瘤的发生及发展是一个逐级进行的复杂生物学过程，细胞内基因能通过易位插入到强启动子附近、自身在染色体内形成多个拷贝、丢失、碱基改变等方式发生突变。体外培养的干细胞具有分化的潜能，细胞内与细胞周期、分化相关的基因若发生突变，其表达水平会发生显著改变，影响细胞的各种生命活动，甚至发展成癌细胞。检测这些基因的表达水平，能够反映或间接反映突变情况。细胞内原癌基因的激活和抑癌基因的失活是肿瘤发生的本质原因。原癌基因与抑癌基因的表达水平和突变状况对于细胞生理的影响是一个动态的过程。原癌基因中，C
‑
MYC、C
‑
FOS和K
‑
RAS这3种基因相对比较重要；抑癌基因中，RB、P21和P53这3种基因相对比较重要。
[0003]现有技术中，癌基因表达的检测往往是这对单一的基因进行的，对不同的癌基因的检测只能逐一进行，不仅检测时间长，检测耗材用量大，对于样本量少的珍贵样本更是难以进行高效的检测。

技术实现思路

[0004]为解决上述技术问题，本申请公开了一种检测C
‑
MYC、C
‑
FOS、K
‑
RAS、RB、P21和P53基因mRNA表达量的引物、探针、试剂盒、检测方法及应用，能够解决现有技术中，癌基因的检测只能逐一进行检测的问题，有利于检测效率的提升和检测成本的降低。
[0005]为解决上述技术问题，本申请公开了一种检测6种癌基因表达量的引物和探针，所述癌基因包括C
‑
MYC、C
‑
FOS、K
‑
RAS、RB、P21和P53中的至少一种，其中，所述引物的序列和所述探针的序列包括：
[0006][0007][0008]进一步的，本申请还公开了包括上述引物及探针的试剂盒，其中，所述试剂盒包括：
[0009]细胞裂解试剂；
[0010]cDNA合成试剂；
[0011]qPCR定量检测试剂。
[0012]其中，所述细胞裂解试剂包括裂解液、RNA酶抑制剂及DNA酶；所述cDNA合成试剂包括2
×
反转录反应液。
[0013]其中，所述qPCR定量检测试剂包括2
×
Probe qPCR Mix、引物探针混合液1和引物探针混合液2。
[0014]其中，所述引物探针混合物1包括：内参基因的引物和探针；检测C
‑
MYC基因的引物和探针；检测C
‑
FOS基因的引物和探针；所述引物探针混合液2包括：检测K
‑
RAS基因的引物和探针；检测RB基因的引物和探针；检测P21基因的引物和探针；检测P53基因的引物和探针。
[0015]其中，所述内参基因为ATCB基因，引物序列包括SEQ ID NO:19和SEQ ID NO:20；探针序列包括SEQ ID NO:21。
[0016]进一步的，本申请还公开了使用上述的试剂盒进行癌基因表达量的检测方法，其中，所述方法包括：
[0017]使用细胞裂解试剂对目标细胞进行裂解，得到RNA；
[0018]使用cDNA合成试剂将所述RNA逆转录得到cDNA；
[0019]将所述cDNA、2
×
Probe qPCR Mix和所述引物探针混合物1和/或所述引物探针混合物2混合得到待测样本；
[0020]将所述待测样本放入定量荧光PCR检测仪中按照预设程序进行检测，并得到各基因的CT值。
[0021]其中，所述预设程序包括：95℃1min，95℃15s
×
40个循环，45℃40s
×
40个循环。
[0022]其中，所述方法包括：所述定量荧光PCR检测仪应至少可检测4种荧光：FAM、HEX、ROX和CY5:。
[0023]更进一步的，本申请还公开了所述试剂盒在检测C
‑
MYC、C
‑
FOS、K
‑
RAS、RB、P21和P53基因表达量中的应用。
[0024]区别于现有技术的，本申请公开的一种检测C
‑
MYC、C
‑
FOS、K
‑
RAS、RB、P21和P53基因mRNA表达量的引物和探针，能够根据需求设置相应的引物和探针，实现对至少一种癌基因的定量检测，能够解决癌基因的检测只能逐一进行检测的问题，有利于检测效率的提升和检测成本的降低。
附图说明
[0025]图1是本申请一种使用所述的试剂盒进行癌基因表达量的检测方法一实施方式的流程示意图。
[0026]图2是本申请计算目的基因在不同标本间的表达差异一实施方式的结果图。
[0027]图3是本申请中MSC细胞2～8℃放置实验过程一实施方式中细胞变化的结果图。
具体实施方式
[0028]以下结合附图实施例对本专利技术作进一步详细描述。
[0029]下面通过实施例对本专利技术作进一步详细说明，但对本专利技术没有限制。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围；对本专利技术的技术方案进行修改或者等同替换，并不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如分子克隆实验指南(第三版，J.萨姆布鲁克等著)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。
[0030]原癌基因是指存在于生物正常细胞基因组中的基因。正常情况下处于低表达或不表达状态，并发挥重要的生理功能。但在某些条件下，如病毒感染、化学致癌物或辐射作用等，原癌基因可被异常激活，转变为癌基因，能促进细胞增殖，阻止细胞凋亡使肿瘤逃逸周期抑制，从而使细胞失控生长诱导细胞发生癌变。其中C
‑
MYC、C
‑
FOS和K
‑
RAS这3种基因相对比较重要。C
‑
MYC，既是一种可易位基因，又是一种多种物质调节的可调节基因，也是一种可使细胞无限增殖，获永生化功能，促进细胞分裂的基因，与多种肿瘤发生发展有关。C
‑
FOS：参与细胞的正常分化、生长以及学习、记忆等过程，在脑内与皮层、海马、边缘系统、背海马、纹状体内FOS蛋白的表达密切相关。K
‑
RAS蛋白具有分子开关作用，在很多信号通路中具有重要作用。研究表明约30％的人类恶性肿瘤与RAS基因突变有关，RAS突变后的产物可以一本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测多种癌基因表达量的引物和探针，所述癌基因包括C
‑
MYC、C
‑
FOS、K
‑
RAS、RB、P21和P53中的至少一种，使用内参为ACTB，其特征在于，所述引物的序列和所述探针的序列包括：2.包括权利要求1所述引物及探针的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括：细胞裂解试剂；cDNA合成试剂；qPCR定量检测试剂。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述细胞裂解试剂包括裂解液、RNA酶抑制剂及DNA酶；所述cDNA合成试剂包括2
×
反转录反应液。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述qPCR定量检测试剂包括2
×
Probe qPCR Mix、引物探针混合液1和引物探针混合液2。5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述引物探针混合物1包括：内参基因的引物和探针；检测C
‑
MYC基因的引物和探针；检测C
‑
FOS基因的引物和探针；所述引物探针混合液2包括：检测K
‑
RAS基因的引物和探针；检测RB基因的引物和探针；检测P21基因的引物和探针；检测P53基因的引物和探针。6.根据权利要求5所述的试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈皓睿，刘沐芸，梁晓，梅秋红，侯凯翔，崔诗慧，魏殿华，
申请(专利权)人：深圳科诺医学检验实验室，
类型：发明
国别省市：