一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，尤其涉及一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法。该质控品包括GBS灭活菌株、内标质粒和稀释液；所述GBS灭活菌株包括Ia、Ib、III、V型中的至少一种；所述稀释液由P300、P950、硅酮、EDTA

【技术实现步骤摘要】
一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法


[0001]本专利技术涉及生物
，尤其涉及一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法。

技术介绍

[0002]B族链球菌(Group B Streptococci,GBS)为兼性厌氧的革兰氏阳性链球菌，是一种无症状的肠道和泌尿生殖道共有细菌，属于条件致病菌，正常寄居于阴道和直肠，正常妇女带菌率30％以上。GBS感染孕妇可通过产道传播给新生儿，引起新生儿的败血症、脑膜炎、肺炎等，是目前引发新生儿感染的主要致病菌之一。
[0003]1996年美国疾病控制中心(CDC)与其他机构共同制定了《围产期B族链球菌感染筛查及防治指南》，2002年、2010年美国CDC对该指南进行2次修订，针对妊娠期产妇GBS预防与治疗最终决定采用普遍筛查方案。其中提及到，在孕妇分娩时，如无培养结果或培养结果未知，且存在以下任一危险因素(分娩胎龄<37周、胎膜破裂≥18h、产前体温≥38℃)的孕妇应及时给予治疗；对没有任何危险因素的孕妇，可直接阴道和直肠取样进行核酸扩增，快速检测GBS阴阳性结果。
[0004]核酸检测主要通过孕妇生殖道和直肠道拭子中GBS靶标DNA的特异性扩增监测病人有无感染GBS，而B族链球菌核酸检测质控品则用于GBS核酸检测时的质量控制。但目前临床试验室所使用的GBS质控品基本上是上市核酸检测产品的附属产品，存在着稳定性不好，批间变异较大，各个单位标定的靶值不一致等诸多不稳定因素；而且，各厂家试剂盒中的阳性质控品有效成分均为含有靶标序列的质粒或利用靶标质粒构建的重组菌株，各厂家所选择扩增的靶标序列又不尽相同，只能被本试剂盒中的扩增试剂扩增检测出来，不能用于其他厂家试剂盒的质量控制，对于GBS核酸检测质量控制的统一性和规范性非常不利。另外，国内目前尚无单独生产质控品的厂家，且各厂家质控品需储存于
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20℃条件下，使用不便，更重要的是，反复的冻融对检测结果有较大影响。因此，急需提供一种通用性强、可稳定保存的B族链球菌核酸检测阳性质控品。

技术实现思路

[0005]有鉴于此，本专利技术提供了一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法。该阳性质控品具有良好的稳定性、通用性和一致性。
[0006]为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
[0007]一种检测B族链球菌的阳性质控品，包括GBS灭活菌株、内标质粒和稀释液；
[0008]所述GBS灭活菌株包括Ia、Ib、III、V型中的至少一种；
[0009]所述稀释液由P300、P950、硅酮、EDTA
·
2Na和HEPES缓冲液组成。
[0010]在一个具体实施例中，本专利技术考察了不同稀释液制成的阳性质控品的加速稳定性和长期稳定性，结果表明，本专利技术稀释液制得的阳性质控品能够有效防止质控品靶标和内标物质的降解，为质控品提供稳定的环境，延长质控品的保存时间，使得采用所述质控品保
存液制得的B族链球菌核酸检测质控品不易降解，可稳定保存。
[0011]本专利技术提供的阳性质控品中，所述稀释液中各组分占所述稀释液的百分比为：
[0012]0.1～0.2vol％P300、0.15～0.3vol％P950、0.01～0.02vol％硅酮消泡剂和0.035～0.07wt％EDTA
·
2Na。
[0013]一些具体实施例中，所述稀释液中各组分占所述稀释液的百分比为：
[0014]0.1vol％P300、0.15vol％P950、0.01vol％硅酮和0.035wt％EDTA
·
2Na；
[0015]或，0.2vol％P300、0.3vol％P950、0.02vol％硅酮和0.07wt％EDTA
·
2Na。
[0016]本专利技术中，所述内标质粒为含有人源性β珠蛋白基因的质粒。
[0017]进一步的，所述人β珠蛋白基因包括sequence ID为MK476491.1、MK476483.1、MK476464.1中的至少一种基因。
[0018]本专利技术中，所述GBS灭活菌株和人源性β珠蛋白基因的内标质粒的浓度可根据临床需要进行选择，一般为临床中低浓度。本专利技术中，所述GBS灭活菌株在所述阳性质控品中的浓度优选为1
×
104～1
×
105CFU/mL；所述有人源性β珠蛋白基因的内标质粒在所述阳性质控品中的浓度为1
×
104～1
×
105copies/mL。
[0019]本专利技术还提供了所述的阳性质控品的制备方法，包括以下步骤：
[0020]将GBS菌株活化、传代、扩大培养；经离心、重悬、灭活，获得GBS菌株菌悬液；
[0021]将GBS菌株菌悬液和含有人β珠蛋白基因的内标质粒溶液混合，加入P300、P950、硅酮消泡剂和EDTA
·
2Na，获得阳性质控品。
[0022]本专利技术还提供了所述的阳性质控品在制备检测B族链球菌的核酸检测试剂盒中的应用。
[0023]在一个具体实施例中，本专利技术经实验发现，上市各厂家的阳性质控品只能被各自配套试剂盒扩增检测出，不能被其他厂家试剂盒扩增检测出；本专利技术制备的GBS核酸检测阳性质控品可以被所有厂家试剂盒扩增出来，说明本专利技术质控品能作为一种通用阳性质控物，可广泛用于GBS核酸检测时的质量控制。
[0024]本专利技术提供的质控品具有良好的稳定性，37℃中稳定保存超过14天，2
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8℃环境稳定保存至少18个月，稳定性明显优于现有产品。该质控品与实际GBS临床拭子样本具有一致性，通用性强，可真实地模拟GBS在体外核酸检测过程，从而实现对GBS核酸检测的全方位监控；且产品具有成本低廉、稳定性高、便于存与转运等优势，便于工业级别的大规模生产，具有重要的价值与应用前景。
具体实施方式
[0025]本专利技术提供了一种检测B族链球菌的阳性质控品及其制备方法。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本专利技术。本专利技术的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本
技术实现思路
、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本专利技术技术。
[0026]本专利技术采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
[0027]下面结合实施例，进一步阐述本专利技术：
[0028]实施例1本专利技术稀释液和质控品的制备
[0029]稀释液组成：0.1vol％P300、0.15vol％P950、0.01vol％硅酮消泡剂、0.035wt％EDTA
·
2Na和HEPES缓冲液。
[0030]阳性质控品：含有靶核酸序列的GBS菌株
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浓度1
×
104CFU/mL、人β珠蛋白基因质粒
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【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种检测B族链球菌的阳性质控品，其特征在于，包括GBS灭活菌株、内标质粒和稀释液；所述GBS灭活菌株包括Ia、Ib、III、V型中的至少一种；所述稀释液由P300、P950、硅酮、EDTA
·
2Na和HEPES缓冲液组成。2.根据权利要求1所述的阳性质控品，其特征在于，所述稀释液中各组分占所述稀释液的百分比为：0.1～0.2vol％P300、0.15～0.3vol％P950、0.01～0.02vol％硅酮消泡剂和0.035～0.07wt％EDTA
·
2Na。3.根据权利要求2所述的阳性质控品，其特征在于，所述稀释液中各组分占所述稀释液的质量分数为：0.1vol％P300、0.15vol％P950、0.01vol％硅酮和0.035wt％EDTA
·
2Na；或，0.2vol％P300、0.3vol％P950、0.02vol％硅酮和0.07wt％EDTA
·
2Na。4.根据权利要求1所述的阳性质控品，其特征在于，所述内标质粒为含有人源性β珠蛋白基因的质粒。5.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：林松洋，曹琳琳，卢雪，余春霞，王华栋，王玮，栗梦婷，郭晴，金建闻，胡明明，郑业焕，
申请(专利权)人：郑州安图生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：