一种用于多种类型临床样本的病原微生物核酸保存液及其应用制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，公开了一种用于多种类型临床样本的病原微生物核酸保存液及其应用，具体公开了一种样本保存液，包括以下成分：硫代氰酸盐、缓冲液、络合剂、表面活性剂、防腐剂、无机盐、蛋白物质和DNA稳定剂。本发明专利技术通过在保存液中加入硫代氰酸盐、缓冲液、络合剂、表面活性剂、防腐剂、无机盐、蛋白物质和DNA稳定剂，使保存液可以对微生物样本中的微生物进行常温保存，确保可以在室温条件下14天内有效保持微生物群结构及多样性，降低微生物保存的要求条件及成本，满足长途运输的需求，实现在外出采样、样品运输等特殊条件下对微生物样本中各微生物的有效保存。本中各微生物的有效保存。

【技术实现步骤摘要】
一种用于多种类型临床样本的病原微生物核酸保存液及其应用


[0001]本专利技术属生物
，具体涉及一种用于多种类型临床样本的病原微生物核酸保存液及其应用。

技术介绍

[0002]为了降低生物样本在保存和运输过程中的成本，解决核酸分子在常温下不稳定的问题，很多研究机构都报道了各种类型的样本保存液。主要集中在体液、粪便样本的保存，每种保存液适用的生物样本十分有限，如有的保存液只适用于脑脊液、血液、肺泡灌洗液、粪便、拭子样本中的一种或几种，且不同种保存液要求的采样量各不相同。面对临床生物样本种类的多样性而言，这无形中增加临床收样的复杂程度。另外很大一部分保存液在不破坏细胞/微生物结构的前提下，通过抑制各类核酸酶活性来保护胞内核酸的完整性，对病原微生物的灭活效果不佳。也有保存液通过裂解细胞/微生物结构来达到灭活的目的，但此时核酸暴露，极易降解，样本保存时间十分有限。在抑制微生物繁殖、避免微生物核酸降解的同时优化样本采集和预处理方法，从而减少采样方法、采样量对检测结果的影响，进一步提高样本处理效率，减轻检验人员感染风险，为此提供一种可用于临床多种样本类型其病原微生物核酸保存的保存液十分必要。

技术实现思路

[0003]本专利技术第一方面的目的，在于提供一种样本保存液。
[0004]本专利技术第二方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的样本保存液的制备方法。
[0005]本专利技术第三方面的目的，在于提供一种核酸提取试剂。
[0006]本专利技术第四方面的目的，在于提供一种试剂盒。r/>[0007]本专利技术第五方面的目的，在于提供本专利技术第一方面的样本保存液、本专利技术第三方面的核酸提取试剂或本专利技术第四方面的试剂盒在微生物样本保存中的应用。
[0008]本专利技术第六方面的目的，在于提供一种微生物样本保存方法。
[0009]为了实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案是：
[0010]本专利技术的第一个方面，提供一种样本保存液，包括以下成分：硫代氰酸盐、缓冲液、络合剂、表面活性剂、防腐剂、无机盐、蛋白物质和DNA稳定剂。
[0011]优选地，所述样本保存液包括以下成分：硫代氰酸盐1～10M、缓冲液50～300mM、络合剂200～400mM、表面活性剂5v/v％～30v/v％、防腐剂0.01v/v％
‑
0.1v/v％、无机盐50～250mM、蛋白物质0.05v/v％～0.3v/v％、DNA稳定剂1v/v％～10v/v％。
[0012]进一步优选地，所述样本保存液包括以下成分：硫代氰酸盐2～6M、缓冲液100～200mM、络合剂200～300mM、表面活性剂5v/v％～20v/v％、防腐剂0.01v/v％
‑
0.05v/v％、无机盐100～250mM、蛋白物质0.05v/v％～0.2v/v％、DNA稳定剂1v/v％～8v/v％。
[0013]更进一步优选地，所述样本保存液包括以下成分：硫代氰酸盐2～5M、缓冲液100～
200mM、络合剂200～250mM、表面活性剂5v/v％～15v/v％、防腐剂0.01v/v％
‑
0.05v/v％、无机盐50～200mM、蛋白物质0.05v/v％～0.1v/v％、DNA稳定剂1v/v％～5v/v％。
[0014]优选地，所述硫代氰酸盐为硫氰酸胍、硫氰酸钠、硫氰酸钾中的一种或多种；进一步为硫氰酸胍。
[0015]优选地，所述络合剂为EDTA、EDTA
‑
2Na(乙二胺四乙酸二钠盐)、DTPA(二乙基三胺五乙酸)、NTA(次氮基三乙酸)中的一种或多种；进一步为EDTA
‑
2Na。
[0016]优选地，所述无机盐为氯化钠、氯化铵、硫酸钠、硫酸铵、氯化钾、碳酸钾、磷酸铵、氯化锂、乙酸钠、碳酸锂、高氯酸钠、碘化钠中的一种或多种；进一步为氯化钠。
[0017]优选地，所述缓冲液为三氨基甲烷盐酸、三羟基氨基甲烷、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、乙磺酸钠、乙酸钠、柠檬酸、邻苯二甲酸氢钾、硼酸、磷酸二氢钾、碳酸二氢钠、碳酸钠、碳酸氢铵、二乙醇胺、丙磺酸、柠檬酸钠、磷酸二氢钠、乙酸铵、亮氨酸、N,N
‑
二羟乙基甘氨酸、3
‑
(环己胺)
‑1‑
丙磺酸、3
‑
吗啉丙磺酸、酒石酸钠、酒石酸中的一种或多种；进一步为三氨基甲烷盐酸(Tris
‑
HCl)。
[0018]优选地，所述表面活性剂为非离子性表面活性剂和阴离子性表面活性剂中的任一种或多种。
[0019]优选地，所述非离子性表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温80、曲拉通X
‑
100、Brij 35中的任一种或多种。
[0020]优选地，所述阴离子性表面活性剂包括十二烷基硫酸钠。
[0021]优选地，所述表面活性剂为吐温20、吐温40、吐温80中的任一种与曲拉通X
‑
100的组合。
[0022]优选地，所述表面活性剂为吐温20与曲拉通X
‑
100的组合。
[0023]进一步优选地，所述表面活性剂为2v/v％～20v/v％吐温20与3v/v％～10v/v％曲拉通X
‑
100的组合。
[0024]优选地，所述防腐剂为叠氮钠、氯霉素、庆大霉素、ProClin 300、硫酸新霉素中的任一种或多种；进一步为ProClin 300。
[0025]优选地，所述蛋白物质为酪蛋白、明胶、水解酪蛋白、牛血清白蛋白、羊血清、马血清中的一种或多种；进一步为牛血清白蛋白。
[0026]优选地，所述样本保存液的pH值为5～9；进一步为5～8；更进一步为8。
[0027]本专利技术提供的样本保存液通过破坏微生物结构，抑制微生物生长繁殖，释放其核酸，病原微生物被快速灭活，降低检验人员被感染风险。保护液内含有抑制核酸酶活性成分，避免核酸降解，同时溶液中含有的盐离子提供了长期保持核酸稳定性的缓冲体系。其中含有的DNA稳定剂，来源于一种化合嗜极生物，该化合物通过再水合作用，在核酸表面形成可溶的保护屏障，一种类似耐热玻璃一样的外壳，保证样本核酸在常温下稳定保存长达14天，微生物组成不发生明显变化，能够满足长途运输的需求。
[0028]使用时，将采集的样本放入含有保存液的保存管内，固体样本体积，如粪便、组织、拭子样本等，不超过保存液总体积的10％，固体样本需在液面下；液体样本与保存液按体积比1:(0.5～4)混合，盖紧盖子，上下颠倒混匀成均质的悬液即可。
[0029]本专利技术第二方面，提供本专利技术第一方面的样本保存液的制备方法，包括以下步骤：将硫代氰酸盐、缓冲液、络合剂、表面活性剂、防腐剂、无机盐、蛋白物质和DNA稳定剂溶于水
中，调节pH，即得到样本保存液。
[0030]优选地，所述制备方法还包括过滤步骤。
[0031]进一步优选地，所述过滤为采用0.1～0.5μm聚醚砜膜进行过滤。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种样本保存液，包括以下成分：硫代氰酸盐、缓冲液、络合剂、表面活性剂、防腐剂、无机盐、蛋白物质和DNA稳定剂。2.根据权利要求1所述的样本保存液，其特征在于，所述样本保存液包括以下成分：硫代氰酸盐1～10M、缓冲液50～300mM、络合剂200～400mM、表面活性剂5v/v％～30v/v％、防腐剂0.01v/v％
‑
0.1v/v％、无机盐50～250mM、蛋白物质0.05v/v％～0.3v/v％、DNA稳定剂1v/v％～10v/v％。3.根据权利要求2所述的样本保存液，其特征在于，所述硫代氰酸盐为硫氰酸胍、硫氰酸钠、硫氰酸钾中的一种或多种；所述络合剂优选为EDTA、EDTA
‑
2Na、DTPA、NTA中的一种或多种；所述无机盐优选为氯化钠、氯化铵、硫酸钠、硫酸铵、氯化钾、碳酸钾、磷酸铵、氯化锂、乙酸钠、碳酸锂、高氯酸钠、碘化钠中的一种或多种。4.根据权利要求1～3中任一项所述的样本保存液，其特征在于，所述缓冲液为三氨基甲烷盐酸、三羟基氨基甲烷、4
‑
羟乙基哌嗪乙磺酸、乙磺酸钠、乙酸钠、柠檬酸、邻苯二甲酸氢钾、硼酸、磷酸二氢钾、碳酸二氢钠、碳酸钠、碳酸氢铵、二乙醇胺、丙磺酸、柠檬酸钠、磷酸二氢钠、乙酸铵、亮氨酸、N,N...

【专利技术属性】
技术研发人员：雷春燕，尹晗琪，孙诗园，
申请(专利权)人：广州盘古医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：