一种用于检测病原微生物的核酸提取试剂盒及其提取方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测病原微生物的核酸提取试剂盒及其提取方法。试剂盒中包括：裂解液、结合液、漂洗液Ⅰ、漂洗液Ⅱ、洗脱液、终止液、磁珠、裂解珠、复合酶。本发明专利技术采用机械法联合酶解法，并优化研磨和孵育条件，在提高革兰氏阳性菌和真菌的DNA得率的同时缩短裂解时间，并且减少核酸断裂及后续建库造成的片段丢失。采用磁珠法提取相较于柱提法减少核酸在硅胶柱纯化过程中造成的丢失，同时利于实现提取自动化和标准化。自动化和标准化。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测病原微生物的核酸提取试剂盒及其提取方法


[0001]本专利技术属于核酸提取
，具体涉及一种用于检测病原微生物的核酸提取试剂盒及其提取方法。

技术介绍

[0002]感染人类的病原微生物包括细菌、真菌、病毒、原虫、支原体和衣原体等，宏基因组测序为检测这些微生物组成提供了一种不需要分离培养的新方法。该方法可以实现对病原微生物组的高通量、大规模快速检测。然而来源于临床的病原样本，如肺泡灌洗液、脑脊液、腹水等，往往微生物浓度低，其中某些致病微生物的含量更是微乎其微。此外，微生物中的真菌和革兰氏阳性菌结构坚硬难以裂解。为有效分析临床样本的致病微生物群，DNA的提取方法尤为重要，直接关系到宏基因组测序和分类鉴定的质量。
[0003]目前在微生物核酸提取和纯化中，机械裂解法，如珠打被认为是裂解的金标椎。由于打珠能有效地裂解多种微生物，因此该方法一直被广泛用于革兰氏阳性和阴性菌的裂解。然而，珠打后获得的DNA大部分被剪切到非常小的片段，经片段筛选后获得的DNA产量十分有限，往往会丢失某些致病微生物的特异性片段。另外珠打法对于更易裂解的微本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于病原微生物核酸提取的试剂盒，包括：裂解液、结合液、漂洗液、洗脱液、终止液、磁珠、裂解珠、复合酶；所述复合酶包含：溶壁酶、壳多糖酶、溶葡球菌酶、溶菌酶；其中溶壁酶、壳多糖酶、溶葡球菌酶、溶菌酶之间的酶活力比值为：(5
‑
10)：(10
‑
30)：(25
‑
35)：(25
‑
35)。2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述裂解液包含：Tris
‑
HCl 0.2
‑
0.5M，EDTA 40
‑
50mM、EDTA
‑
2Na 40
‑
50mM、NaCl 0.2
‑
0.3M、KCl 0.15
‑
0.2M、ProClin300 0.01
‑
0.05％；优选地，所述结合液包含：盐酸胍3
‑
5M、Triton X
‑
100 5
‑
10％、吐温5
‑
10％。3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述漂洗液包含漂洗液I和漂洗液II，所述漂洗液I包含：盐酸胍3
‑
5M，乙醇50
‑
60％、异丙醇40
‑
50％；优选地，所述漂洗液II包含：Tris
‑
HCl 20
‑
30mM、乙醇70

【专利技术属性】
技术研发人员：雷春燕，尹晗琪，孙诗园，
申请(专利权)人：广州盘古医学检验实验室有限公司，
类型：发明
国别省市：