甘蔗叶片DNA的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种甘蔗叶片DNA的提取方法，其是在装有甘蔗叶片的离心管中加入不锈钢珠；取出与离心管大小匹配的离心管架的网格，将离心管置于所述网格中，再将所述网格置于液氮中处理后，上下晃动直至甘蔗叶片粉碎；再加入粗提溶液后进行金属浴，离心取上清，即得。本发明专利技术的甘蔗叶片DNA的提取方法简单、高效、省时省力，且提取的DNA可以直接用于PCR扩增，扩增条带清晰。条带清晰。条带清晰。

【技术实现步骤摘要】
甘蔗叶片DNA的提取方法


[0001]本专利技术属于生物
，更具体地，本专利技术涉及一种甘蔗叶片DNA的提取方法。

技术介绍

[0002]在甘蔗DNA的提取过程中，通常采用的方法为：取甘蔗幼嫩叶片0.5cm2左右剪碎，放入1.5mLEppendorf管中，加入100μL0.25mol/L的NaOH，将此离心管插入沸水中煮30s，取出加入100μL0.25mol/L的HCl和50μL1mol/LTris
‑
HCl(pH8.0)；再将该管放入沸水中孵育2min，室温条件下10000r/min离心2min，取上清2μL直接作为模板进行PCR反应。
[0003]该方法的不足之处在于：1、衰老甘蔗叶片的体内DNA会出现了一定程度的降解，由于没有磨碎样品的步骤，DNA从细胞中释放的难度加大，老化叶片扩增出来的条带模糊并且非常微弱，因此，该方法只能提取幼嫩叶片的DNA；2、该方法步骤繁琐，费时费力，需要加入两次溶液，增加工作量。
[0004]目前现有的磨样方法有研钵研磨法以及使用植物组织破碎仪。研钵研磨法缺点在于一次只能处理一个样本，费时费力，且植物组织样品在转移过程中损耗较多；植物组织破碎仪的缺点在于成本较高，操作过程中较危险且对植物样品研磨量有一定的要求。
[0005]因此，研究一种适用于甘蔗嫩叶及老叶磨碎及提取DNA的方法非常有必要。

技术实现思路

[0006]基于此，本专利技术的目的在于提供一种甘蔗叶片DNA的提取方法。
[0007]实现上述专利技术目的的技术方案包括如下。
[0008]本专利技术的第一方面，提供了一种甘蔗叶片DNA的提取方法，包括以下步骤：
[0009](1)、在装有甘蔗叶片的离心管中加入不锈钢珠；
[0010](2)、取出与步骤(1)所述离心管大小匹配的离心管架的网格，将步骤(1)所述离心管置于所述网格中，再将所述网格置于液氮中；
[0011](3)、上下晃动网格，直至离心管中的甘蔗叶片粉碎；
[0012](4)、打开离心管，迅速倒出不锈钢珠，再加入粗提溶液后进行金属浴，离心取上清，即得。
[0013]本专利技术的第二方面，提供了上述提取方法提取得到的甘蔗叶片DNA。
[0014]在本专利技术的甘蔗叶片DNA的提取方法中，通过在甘蔗叶片中加入不锈钢珠、以及利用离心管架的可拆卸网格，对甘蔗叶片进行液氮及晃动处理，即可实现甘蔗老叶和新叶的大通量磨碎处理，且无需进行样本转移；再通过开盖一次添加一次粗提溶液，使得提取的DNA可以直接用于PCR扩增，扩增条带清晰。本专利技术的方法简单、通量大、省时省力。
附图说明
[0015]图1为本专利技术中将离心管置于离心管架的网格中的示意图。
[0016]图2为本专利技术实施例1中提取的甘蔗叶片DNA的PCR扩增结果。
[0017]图3为本专利技术各处理下提取的甘蔗叶片DNA的PCR扩增结果，其中泳道1为采用本专利技术实施例1的方法提取的甘蔗新叶DNA；泳道2为采用本专利技术实施例1的方法提取的甘蔗老叶DNA；泳道3为采用试验例1的方法提取的甘蔗新叶DNA；泳道4为采用试验例1的方法提取的甘蔗老叶DNA；泳道5为采用试验例2的现有方法提取的甘蔗新叶DNA；泳道6为采用试验例2的现有方法提取的甘蔗老叶DNA。
具体实施方式
[0018]为了便于理解本专利技术，下面将对本专利技术进行更全面的描述。本专利技术可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本专利技术公开内容的理解更加透彻全面。
[0019]除非另有定义，本专利技术所使用的所有的技术和科学术语与属于本专利技术的
的技术人员通常理解的含义相同。本专利技术的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本专利技术。本专利技术所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
[0020]下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Green和Sambrook等人，分子克隆实验指南(MolecularCloning:ALaboratoryManual,2013)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。
[0021]在本专利技术的其中一些实施例中，公开了一种甘蔗叶片DNA的提取方法，包括以下步骤：
[0022](1)、在装有甘蔗叶片的离心管中加入不锈钢珠；
[0023](2)、取出与步骤(1)所述离心管大小匹配的离心管架的网格，将步骤(1)所述离心管置于所述网格中，再将网格置于液氮中；
[0024](3)、上下晃动网格，直至离心管中的甘蔗叶片粉碎；
[0025](4)、打开离心管，迅速倒出不锈钢珠，再加入粗提溶液后进行金属浴，离心取上清，即得。
[0026]本专利技术的甘蔗叶片DNA的提取方法，通过先在甘蔗叶片的离心管中加入不锈钢珠，再将离心管置于离心管架的可拆卸网格中，液氮处理后，上下晃动网格即可使甘蔗叶片粉碎。本专利技术的方法，无需使用昂贵的磨样机，仅通过简单的操作即可大通量地磨碎甘蔗叶片(除了可以磨碎甘蔗新叶，也能将衰老的甘蔗老叶磨碎)，且本专利技术的方法提取得到的DNA可以直接用于PCR扩增，扩增条带清晰。相比现有的手动研磨处理样品，本专利技术的方法一次可以处理很多叶片样品，且研磨好的叶片样品无需二次转移，可以尽可能减少样品损耗；在提取DNA的过程中，仅需要添加一个粗提溶液，只需开盖一次，省时省力。
[0027]在其中一些实施例中，步骤(2)中将所述网格盖上盖子，用橡皮筋固定后，再置于液氮中。
[0028]在其中一些实施例中，步骤(2)中所述网格置于液氮中1～2min。
[0029]在其中一些实施例中，步骤(2)中所述网格为36格、72格或100格。
[0030]在其中一些实施例中，步骤(1)中加入2～4颗不锈钢珠。
[0031]在其中一些实施例中，步骤(1)中所述甘蔗叶片为甘蔗老叶或甘蔗新叶。
[0032]在其中一些实施例中，步骤(3)中所述上下晃动时间为20～40s。
[0033]在其中一些实施例中，步骤(4)中所述粗提溶液包括以下浓度的成分：45～55mMNaOH，0.8～1.2％Tween20，45～55mMTris
‑
HCl，0.8～1.2mMEDTA。
[0034]在其中一些实施例中，步骤(1)中每g甘蔗叶片加入2mL步骤(4)中所述粗提溶液。
[0035]在其中一些实施例中，步骤(4)中所述金属浴的温度为94℃～96℃，时间为10～20min。
[0036]在其中一些实施例中，步骤(4)中所述离心速度为120000rpm～130000rpm，所述离心时间为1min～2min。
[0037]在本专利技术的另一些实施例中，公开了上述提取方法得到的甘蔗叶片DNA。
[0038]以下结合附图和具体实施例来详细说明本专利技术。
[0039]实施例1一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种甘蔗叶片DNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)、在装有甘蔗叶片的离心管中加入不锈钢珠；(2)、取出与步骤(1)所述离心管大小匹配的离心管架的网格，将步骤(1)所述离心管置于所述网格中，再将所述网格置于液氮中；(3)、上下晃动网格
，
直至离心管中的甘蔗叶片粉碎；(4)、打开离心管，迅速倒出不锈钢珠，再加入粗提溶液后进行金属浴，离心取上清，即得。2.根据权利要求1所述的甘蔗叶片DNA的提取方法，其特征在于，步骤(2)中将所述网格盖上盖子，用橡皮筋固定后，再置于液氮中。3.根据权利要求2所述的甘蔗叶片DNA的提取方法，其特征在于，所述网格置于液氮中1～2min。4.根据权利要求1所述的甘蔗叶片DNA的提取方法，其特征在于，所述网格为36格、72格或100格。5.根据权利要求1所述的甘蔗叶片DNA的提取方法，其特征在于，步骤(1)中加入2～4颗不...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾璇，张明永，李暄妍，李泽聪，夏快飞，陈建通，
申请(专利权)人：中国科学院华南植物园，
类型：发明
国别省市：