结合血清白蛋白的纤连蛋白III型结构域及其应用制造技术

与血清白蛋白结合的纤连蛋白III型结构域(FN3)、能够编码结合血清白蛋白的FN3结构域的相关多核苷酸、表达所述FN3结构域的细胞，以及相关载体、可检测标记的FN3结构域和融合到异源部分的FN3结构域，可用于延长分子在诊断和治疗应用中的半衰期。治疗应用中的半衰期。治疗应用中的半衰期。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】结合血清白蛋白的纤连蛋白III型结构域及其应用


[0001]本实施方式涉及结合血清白蛋白的纤连蛋白III型(FN3)结构域。这样的FN3结构域可用于例如延长药物或与其缀合的蛋白的体内血清半衰期。还提供了制造此类分子和包含它们的药物组合物的方法。

技术介绍

[0002]从血流中快速清除药物或生物治疗分子可能造成这些分子的临床有效性受限或导致对患者更频繁地给药。一种常见的清除方法是肾小球过滤引起的肾脏清除。这种清除途径与较小的生物治疗剂最相关，因为对于分子量大于50,000道尔顿的分子，肾脏过滤的速率会大大降低(Kontermann,Curr Opin Biotechnol 2011)。几种已获批准的生物治疗药物含有活性部分，它们本身低于过滤极限，并因此被迅速清除。为了克服这一限制，已经引入了许多技术来有效地增加治疗分子的大小以减少肾脏过滤。仍然需要增加药物或治疗剂半衰期的化合物或方法。本实施方式满足这些需求以及其他需求。

技术实现思路

[0003]本实施方式提供了结合血清白蛋白的纤连蛋白III型(FN3)结构域。还描述了能够编码所提供的FN3结构域的相关多核苷酸、表达所提供的FN3结构域的细胞以及相关的载体。另外，描述了使用所提供的FN3结构域的方法。例如，鉴于白蛋白的血清半衰期延长，白蛋白结合肽可用作融合伴侣，以产生具有较长或延长血清半衰期的治疗性蛋白质或药物。
[0004]除了结合白蛋白的FN3结构域之外，还提供了能够编码所述蛋白质的多核苷酸序列。还提供了包含所述多核苷酸的载体，如本文中表达结合白蛋白的FN3结构域的细胞。还描述了能够表达所公开的载体的细胞。这些细胞可以是哺乳动物细胞(诸如293F细胞、CHO细胞)、昆虫细胞(诸如Sf7细胞)、酵母细胞、植物细胞或细菌细胞(诸如大肠杆菌(E.coli))。还提供了产生所述FN3结构域(蛋白质)的过程。
[0005]本实施方式还提供了将所提供的结合白蛋白的FN3结构域融合或以其他方式关联至各种分子以延长这些分子的半衰期的方法。因此，结合白蛋白的FN3结构域能够用于例如延长治疗药物的半衰期。
[0006]在一些实施方式中，给药包含结合白蛋白的FN3结构域的药物组合物以改善治疗伴侣的体内半衰期。这种半衰期延长可以通过本领域已知的多种方法来测定，包括例如通过监测结合白蛋白的FN3结构域的药代动力学。在本文提供的实施例中提供了这些方法的此类测定的非限制性实例。
[0007]还提供了包括所提供的结合白蛋白的FN3结构域的试剂盒。该试剂盒可以用于执行使用本文提供的结合白蛋白的FN3结构域的方法，或本领域技术人员已知的其他方法。在一些实施方式中，所述试剂盒可以包括本文所述的FN3结构域和用于检测生物样品中人血清白蛋白存在的试剂。所述试剂盒可以包括本文所述的一种或多种FN3结构域和用于在不使用时容纳FN3结构域的容器、固定至固体支持物的FN3结构域的使用说明和/或FN3结构域
的可检测标记形式，如本文所述的。
附图说明
[0008]图1显示了使用结合白蛋白FN3结构域的来自食蟹猴和人血清的内源白蛋白的间接下拉(pull
‑
down)。与白蛋白的结构域1结合的FN3结构域用虚线框起来；与白蛋白的结构域3结合的FN3结构域用实线框起来。所有构建体均制备为具有一个无效FN3结构域(TC25)和一个结合白蛋白的FN3结构域的双特异性基因融合体。*ABD是指白蛋白结合结构域(参考J.T.Andersen,R.Pehrson,V.Tolmachev,M.B.Daba,L.Abrahmsen,C.Ekblad,J.Biol.Chem.286:5234
‑
5241 2011)。
[0009]图2显示了5mg/kg(H9)或5mg/kg(ALB40(B7)的单一IV剂量后食蟹猴中结合白蛋白的FN3结构域的药代动力学特性。
具体实施方式
[0010]定义
[0011]在整个说明书和权利要求中使用了与描述的方面相关的各种术语。除非另有说明，否则这些术语将被赋予其在本领域中的普通含义。其他具体定义的术语将以与本文提供的定义一致的方式进行解释。
[0012]如在本说明书和所附权利要求中使用的，单数形式“一个(a)”、“一种(an)”和“所述(the)”包括复数指示物，除非内容另有明确指示。因此，例如，提及“细胞(a cell)”包括两个或更多个细胞的组合等。
[0013]如本文所用的术语“约”在提及诸如量、持续时间等的可测量值时，意在涵盖从指定值至多达
±
10％的变化，因为这样的变化适合执行所公开的方法。除非另有说明，否则在说明书和权利要求中使用的所有表示成分的量、特性诸如分子量、反应条件等的数字应理解为在所有情况下均由术语“约”修饰。因此，除非有相反的指示，否则以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是近似值，其可以根据本专利技术寻求获得的所需特性而变化。至少，且不是试图限制将等同原则应用于权利要求的范围，每个数值参数至少应根据报告的有效数字的数量并通过应用普通的舍入技术来解释。
[0014]尽管阐述本专利技术宽泛范围的数值范围和参数是近似值，但在具体实例中阐述的数值尽可能精确地报告。然而，任何数值都固有地包含某些误差，这些误差必然是由于在它们各自的测试测量中发现的标准偏差而产生的。
[0015]“分离的”意指生物组分(诸如核酸、肽或蛋白质)已从该组分天然存在的生物体的其他生物组分，即其他染色体和染色体外DNA和RNA，以及蛋白质基本分离、另外产生或纯化。因此，已“分离”的核酸、肽和蛋白质包括通过标准纯化方法纯化的核酸和蛋白质。“分离的”核酸、肽和蛋白质可以是组合物的一部分，并且如果这种组合物不是核酸、肽或蛋白质的天然环境的一部分，则仍然是分离的。该术语还涵盖通过在宿主细胞中重组表达而制备的核酸、肽和蛋白质以及化学合成的核酸。如本文所用，“分离的”FN3结构域旨在指基本上不含具有不同抗原特异性的其他FN3结构域的FN3结构域(例如，特异性结合人血清白蛋白的分离的FN3结构域基本上不含特异性结合除人血清白蛋白以外的抗原的FN3结构域)。然而，与人血清白蛋白的表位、异形体或变体特异性结合的分离的FN3结构域可能与其他相关
抗原，例如来自其他物种的抗原(诸如血清白蛋白物种同源物)具有交叉反应性。
[0016]如本文所用，术语“纤连蛋白III型(FN3)结构域”(FN3结构域)是指在包括纤连蛋白、生腱蛋白、细胞内细胞骨架蛋白、细胞因子受体和原核酶在内的蛋白质中频繁出现的结构域(Bork和Doolittle,Proc Nat Acad Sci USA 89:8990
‑
8994,1992；Meinke et al.,J Bacteriol 175:1910
‑
1918,1993；Watanabe et al.,J Biol Chem 265:15659
‑
15665,1990)。示例性的FN3结构域是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68和69的氨基酸序列的蛋白质或包含与SEQ ID NO:51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68和69的氨基酸序列具有至少85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的氨基酸序列的蛋白质。2.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质包含对应于SEQ ID NO 1的残基位置6、11、22、25、26、52、53、61或88的至少一个残基位置中的半胱氨酸残基。3.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质还包含所述蛋白质的N端和/或C端处的半胱氨酸。4.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质包含对应于SEQ ID NO:51的位置10的位置处的置换。5.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述包含以下置换：A10V、N33A、A35S、W37A、P39A、G40A、I41A、G42A、W47A、R49A、K69A、W71A、H73A、A79S、S80A、P82A、I85A或R87A，其中所述位置对应于在SEQ ID NO:51中的位置。6.如权利要求1所述的蛋白质，其中所述蛋白质包含对应于SEQ ID NO:51的10、33、25、37、39、40、41、42、47、49、69、71、73、79、80、82、85或87的位置的位置处的置换。7.如权利要求4所述的蛋白质，其中所述置换是A10V、A10G、A10L、A10I、A10T或A10S。8.如权利要求1所述的分离的FN3结构域，其中所述FN3结构域包含与SEQ ID NO:51的氨基酸序列具有90％同一性的氨基酸序列，或当与SEQ ID NO:51的氨基酸序列相比时具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14个置换的氨基酸序列。9.如权利要求1
‑
8中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质与其他分子连接。10.如权利要求9所述的蛋白质，其中所述其他分子是药物或治疗剂、蛋白质、抗体、聚合物、毒素。11.如权利要求9所述的蛋白质，其中所述其他分子是与人白蛋白以外的分子结合的FN3结构域。12.如权利要求11所述的蛋白质，其中所述FN3结构域与CD71结合。13.如权利要求9
‑
12中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质与所述其他分子直接连接。14.如权利要求9
‑
12中任一项所述的蛋白质，其中所述蛋白质通过接头与所述其他分子连接。15.如权利要求14所述的蛋白质，其中所述接头是肽接头。16.如权利要求15所述的蛋白质，其中所述肽接头包含(GS)...

【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：ARO生物疗法公司，
类型：发明
国别省市：