与前列腺特异性膜抗原结合的纤连蛋白III型结构域和包含该结构域的细胞制造技术

包含嵌合抗原受体的细胞诸如巨噬细胞，所述嵌合抗原受体包含结合PSMA的FN3结构域，它们的缀合物、编码所述分子的分离的核苷酸、载体、宿主细胞及其制备方法可用于产生治疗性分子以及治疗和诊断疾病和疾患。子以及治疗和诊断疾病和疾患。子以及治疗和诊断疾病和疾患。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】与前列腺特异性膜抗原结合的纤连蛋白III型结构域和包含该结构域的细胞
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年5月5日提交的美国临时申请号63/020,363的优先权，其全部内容通过援引并入本文。


[0003]本专利技术的实施方式涉及包含前列腺特异性膜抗原结合分子的巨噬细胞或细胞以及制备和使用所述分子的方法。

技术介绍

[0004]前列腺特异性膜抗原(PSMA)，也称为谷氨酸羧肽酶II或N
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乙酰化α
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连接的酸性二肽酶1，是一种二聚体2型跨膜糖蛋白。PSMA切割若干种底物，包括叶酸和N
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乙酰基
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L
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天冬氨酰
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L
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谷氨酸，并且在许多组织中表达，其中在前列腺中表达最高，在小肠、中枢和周围神经系统、肾和肺中表达程度较低。PSMA通过网格蛋白包被小窝组成性内化。
[0005]PSMA是一种前列腺癌相关细胞膜抗原，经常在前列腺上皮内瘤(PIN)(在这种病症中，一些前列腺细胞已经开始出现异常的外观和行为)、原发性和转移性前列腺癌以及其他实体瘤(例如胸、肺、膀胱、肾)的新生血管中过表达。PSMA表达与疾病进展和Gleason评分相关。PSMA表达在转移性疾病、激素难治性病例和更高级别的病变中增加，并且在雄激素不敏感的肿瘤中进一步上调。
[0006]前列腺癌是男性中癌症的主要原因，也是癌症引起的死亡的第2大原因。在全球范围内，每年有约1,100,000例新病例和300,000例死亡，占所有癌症死亡人数的约4％。据估计，每6名男性中就有1名被诊断出患有这种疾病。在美国，超过90％的前列腺癌发生在局部或区域阶段。在这些早期阶段，5年生存率接近100％。然而，当癌症已经转移时，5年生存率会降低到约28％。局部前列腺癌通常可以通过激素剥夺来控制。
[0007]目前对前列腺癌的治疗包括外科手术、放射治疗和激素治疗。然而，肿瘤细胞经常变得对雄激素不敏感，并且仍然存在有限的治疗选择。通常，将癌症疫苗sipuleucel
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T、放射性药剂(诸如氯化镭223)、第二激素疗法(诸如阿比特龙或恩杂鲁胺)和/或化学疗法(多西他赛和卡巴他赛)依次添加到激素疗法中。
[0008]靶向PSMA的单克隆抗体已在临床上作为诊断显像剂和抗体
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药物缀合物进行了评估。最广泛评估的靶向PSMA的抗体
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药物缀合物(ADC)使用相同的人源化/去免疫抗PSMA mAb，J591。至少三种使用J591的不同ADC已使用各种接头和弹头在临床试验中进行了评估。Millenium Pharmaceuticals完成了评估MLN2704的1期临床试验，其是一种与二硫键连接的美登素缀合的抗PSMA mAb；Progenics利用西雅图遗传学技术使用缬氨酸
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瓜氨酸接头将J591与MMAE连接起来，并且ADCT正在启动与J591缀合的PBD的临床试验。迄今为止，有限的临床疗效伴随着严重的毒性和较短的血清半衰期，这可能是由于显著的肝脏摄取。尽管如此，在两项独立的临床研究中，有证据表明使用抗PSMA ADC重复治疗后PSA/CTC水平降低，
尤其是在较高剂量下。在Progenics的情况下，两种剂量限制性毒性导致中性粒细胞减少引起的脓毒症后死亡。
[0009]虽然这些治疗中的每一种都可以将癌症的生长延迟若干个月并减轻疾病产生的症状，但疾病最终会对它们产生抗性。
[0010]因此，需要额外的和改进的疗法来治疗前列腺癌和其他过表达PSMA的癌症。
[0011]一种包含多肽的细胞，所述多肽包含至少一个异源纤连蛋白III型(FN3)，其中所述至少一个异源FN3结构域在细胞表面上并且与人前列腺特异性膜抗原(PSMA)结合。

技术实现思路

[0012]在一些实施方式中，提供了在其表面上包含纤连蛋白III型(FN3)结构域的细胞，其中所述细胞靶向并结合表达人前列腺特异性膜抗原的细胞(PSMA表达细胞)。
[0013]在一些实施方式中，提供了包含多肽的细胞，所述多肽包含至少一个异源纤连蛋白III型(FN3)结构域，其中所述至少一个异源FN3结构域在细胞表面上并且与人前列腺特异性膜抗原(PSMA)结合。
[0014]在一些实施方式中，多肽包含第一FN3结构域和第二FN3结构域，其中第一和第二FN3结构域各自与人前列腺特异性膜抗原(PSMA)结合。在一些实施方式中，第一和第二FN3结构域与PSMA的不同表位结合。
[0015]在一些实施方式中，提供了包含嵌合抗原受体的巨噬细胞，所述嵌合抗原受体包含与刺激和/或共刺激分子的跨膜结构域和胞内结构域可操作地连接的至少一个异源纤连蛋白III型(FN3)结构域，其中所述至少一个异源FN3结构域位于所述细胞的表面上并与人前列腺特异性膜抗原(PSMA)结合。
[0016]在一些实施方式中，提供了嵌合抗原受体或多肽，其包含与刺激和/或共刺激分子的跨膜结构域和胞内结构域可操作地连接的具有式A1
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L
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A2的多肽，其中A1、L和A2如本文所提供。
[0017]在一些实施方式中，提供了包含本文提供的细胞、巨噬细胞或多肽的药物组合物。
[0018]提供了涉及治疗受试者的前列腺癌的方法的其他实施方式，包括给药如本文所述的细胞或包含所述细胞的药物组合物。在一些实施方式中，细胞是巨噬细胞。
[0019]提供了涉及治疗受试者的前列腺癌的方法的其他实施方式，包括给药包含如本文所述的多肽或嵌合抗原受体的药物组合物。
附图说明
[0020]图1显示了在雄性NSG小鼠中静脉内注射后非靶向
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Zr标记的Centyrin的生物分布。
[0021]图2A显示了在与食蟹猴PSMA二聚体的复合物中的P233FR9_H10 PSMA结合FN3结构域(H10)的整体晶体结构，表明H10与PSMA活性位点附近的区域结合。锌原子(Zn)指示PSMA活性位点的位置。指示了复合物之一的PSMA和H10分子的N末端和C末端。指示了细胞膜的大致位置。
[0022]图2B显示了在与食蟹猴PSMA的复合物中的H10 FN3结构域的晶体结构。显示了H10 FN3结构域中的A、B、C、D、E、F和Gβ链。显示了插入PSMA活性位点的带正电入口的H10的CD环
中带负电残基(残基W38、D39、D40、D41和E43)。H10残基编号根据SEQ ID NO：41。
[0023]图2C显示了在与食蟹猴PSMA的复合物中的H10 FN3结构域的晶体结构。在图中显示了H10接触残基W38、D39、D40、D41和E43。显示了接触H10(R511、K514和K545)、配位锌原子(H377、D387、E424、E425、D453和H553)或构成活性位点腔(R536和R534)的一些cyno P本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种包含嵌合抗原受体的巨噬细胞，所述嵌合抗原受体包含与刺激和/或共刺激分子的跨膜结构域和胞内结构域可操作地连接的至少一个异源纤连蛋白III型(FN3)结构域，其中，所述至少一个异源FN3结构域位于所述细胞的表面上并与人前列腺特异性膜抗原(PSMA)结合。2.根据权利要求1所述的巨噬细胞，其中，所述至少一个异源纤连蛋白III型(FN3)结构域与表达PSMA的前列腺细胞结合。3.根据权利要求2所述的巨噬细胞，其中，所述前列腺细胞是前列腺癌细胞。4.根据权利要求1
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3中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述胞内结构域还包含铰链区。5.根据权利要求4所述的巨噬细胞，其中，所述铰链结构域包含CD8铰链结构域或Ig铰链结构域。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述跨膜结构域包含CD8跨膜结构域、CD64跨膜结构域、CD16跨膜结构域、TLR1跨膜结构域、TLR2跨膜结构域、TLR4跨膜结构域、TLR5跨膜结构域或TLR6跨膜结构域。7.根据权利要求1
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6中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述胞内结构域包含双信号结构域。8.根据权利要求1
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7中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述胞内结构域包含CD3ζ胞内结构域、FcεRI共同γ亚基胞内结构域、Dectin
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1胞内结构域、CD16胞内结构域、TLR1胞内结构域、TLR2胞内结构域、TLR4胞内结构域、TLR5胞内结构域或TLR6胞内结构域。9.根据权利要求1
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8中任一项所述的巨噬细胞，还包含一个或多个将所述跨膜结构域连接到所述FN3结构域和/或所述胞内结构域的间隔结构域。10.根据权利要求1
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9中任一项所述的巨噬细胞，其中，与PSMA结合的所述至少一个异源FN3结构域具有选自由以下SEQ ID NO组成的组的氨基酸序列：35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、168和169。11.根据权利要求1
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10中任一项所述的巨噬细胞，其中，与PSMA结合的所述至少一个异源FN3结构域具有SEQ ID NO：39的氨基酸序列。12.根据权利要求1
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10中任一项所述的巨噬细胞，其中，与PSMA结合的所述至少一个异源FN3结构域具有SEQ ID NO：41的氨基酸序列。13.根据权利要求1
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12中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述嵌合抗原受体包含与PSMA结合的第一异源FN3结构域和第二异源FN3结构域。14.根据权利要求13所述的巨噬细胞，其中，所述第一异源FN3结构域和所述第二异源FN3结构域与PSMA上的不同表位结合。15.根据权利要求14所述的巨噬细胞，其中，PSMA上的所述不同表位不重叠。16.根据权利要求14所述的巨噬细胞，其中，所述第一异源FN3结构域和所述第二FN3结构域不同。17.根据权利要求13
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16中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述第一异源FN3结构域和所述第二FN3结构域各自独立地具有选自由以下SEQ ID NO组成的组的氨基酸序列：35、36、
37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、168和169。18.根据权利要求13
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17中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述嵌合抗原受体从N末端至C末端包含所述第一异源FN3结构域，然后是所述第二异源FN3结构域。19.根据权利要求13
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17中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述嵌合抗原受体从N末端至C末端包含所述第二异源FN3结构域，然后是所述第一异源FN3结构域。20.根据权利要求13
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17中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述第一异源FN3结构域具有SEQ ID NO：39的氨基酸序列并且所述第二异源FN3结构域具有SEQ ID NO：41的氨基酸序列。21.根据权利要求13
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17中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述第一异源FN3结构域和第二异源FN3结构域通过接头连接。22.根据权利要求21所述的巨噬细胞，其中，所述接头是肽接头。23.根据权利要求22所述的巨噬细胞，其中，所述肽接头是甘氨酸/丝氨酸或甘氨酸/丙氨酸接头。24.根据权利要求21
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23中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述接头包含(GGGGS/A)
n
的氨基酸序列，其中n为1
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5。25.根据权利要求21
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24中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述接头包含SEQ ID NO：148、149、150、151、152、153、154、142、162或163的氨基酸序列。26.根据权利要求21
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25中任一项所述的巨噬细胞，其中，所述接头包含SEQ ID NO：162的氨基酸序列。27.根据权利要求1
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【专利技术属性】
技术研发人员：K，
申请(专利权)人：ARO生物疗法公司，
类型：发明
国别省市：