一种用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激酶-1的检测试剂组合制造技术

本发明专利技术涉及一种用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激酶

【技术实现步骤摘要】
一种用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1的检测试剂组合


[0001]本专利技术属于血液标志物检测
，具体涉及一种胎盘生长因子、可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1的检测试剂组合、检测方法及其在早发型子痫诊断领域的应用，本专利技术还涉及一种孕产妇早发型子痫的诊断试剂盒及诊断方法。

技术介绍

[0002]公开该
技术介绍
部分的信息仅仅旨在增加对本专利技术的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
[0003]早发型子痫前期(early
‑
onset preeclampsia，EOPE)属于妊娠期高血压疾病的特殊类型，发生于孕20周后及孕34周前，临床表现为血压迅速升高且难以控制，出现大量蛋白尿，同时合并靶器官损伤，严重影响母婴健康。早期对EOPE进行诊断并干预治疗对减少不良母婴结局具有重要意义。EOEP发病机制尚未完全阐明，目前普遍认为血管内皮损伤、胎盘缺血缺氧与EOPE的发生、发展有关。可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1 (soluble FMS
‑
like tyrosine kinase，sFIt
‑
1)为抗血管生长因子，可引起血管内皮损伤及血管生成障碍，妊娠出现异常时血液中sFIt
‑
1水平显著升高，可反映血管内皮细胞功能损伤程度。胎盘生长因子(placenta growth factor，PLGF)是妊娠期重要蛋白质之一，属于血管内皮生长因子家族，可促进胎盘血管网络生成、保证胎儿生长发育。研究证实：子痫前期孕妇血清及尿液中sFIt
‑
1、PLGF水平高于正常孕妇。
[0004]孕妇血液中的可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1（sFIt
‑
1）属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族，分子量约为63.6KD；由细胞外区1~6个免疫球蛋白样结构域构成，不含酪氨酸激酶域，编码区与fms样酪氨酸激酶
‑
1（sFIt
‑
1）的胞外区完全一致，能与膜表面受体竞争结合血管内皮生长因子（VEGF）。最初于类脐静脉内细胞上被发现sFIt
‑
1作为VEGF和胎盘生长因子（PLGF）的直接抑制物，血清水平升高则可导致胎盘滋养细胞及血管生长不良，从而导致内细胞损伤。sFIt
‑
1主要通过与VEGF和PLGF结合，介导VEGF和PLGF的生物学功能，参与血管的形成、重塑和再植等作用，因而，sFIt
‑
1与子痫前期的预测已成为研究焦点。血循环中的PLGF与sFIt
‑
1浓度水平的变化可先于临床症状出现前鉴别正常妊娠和先兆子痫；PLGF与sFIt
‑
1是首个经过大规模临床试验验证的、可用于孕妇子痫前期预测及诊断的生化标志物。
[0005]目前，PLGF的检测已有酶联免疫吸附（ELISA）、时间分辨荧光免疫分析（TR
‑
FIA）、微流控、电化学发光法（ECL）等报道；而sFIt
‑
1的检测报道较少，主要是罗氏的电化学发光法，所有以上方法针对的样本类型均为血清样本。
[0006]考虑到量子点免疫荧光技术准确性高，操作简便、快速，对血液样本（全血、血清、血浆）的兼容大大拓宽了其临床应用范围，可实现随到随诊，方便临床应用；并且量子点免疫荧光技术可对血液中PLGF与sFIt
‑
1进行联检，可同时出具PLGF与sFIt
‑
1的浓度以及
sFIt
‑
1/PLGF比值检测结果，具有较高的临床应用价值。基于此，提供一种胎盘生长因子、可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1的量子点荧光检测方法具有重要的临床检测意义。

技术实现思路

[0007]正如
技术介绍
所介绍的，血液中胎盘生长因子（PLGF）、可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1（sFIt
‑
1）的浓度，对于孕期女性具有重要的检测意义。目前已知的检测方法存在样本受限或者灵敏度不足等缺陷。为了解决如上的技术问题，本专利技术提出了一种胎盘生长因子（PLGF）、可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1（sFIt
‑
1）的量子点荧光检测方法。
[0008]本专利技术第一方面，提供一种用于胎盘生长因子（PLGF）和可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1（sFIt
‑
1）的检测试剂组合，所述检测试剂组合中，包括用于清洗待测血液样本的洗涤剂及试纸条；所述洗涤剂中包括血清、聚乙二醇、非离子型表面活性剂及抑菌剂；所述试纸条包括底板，底板上覆盖层析结构，所述层析结构按照样品流动方向依次设置滤血膜、结合垫、检测垫和吸水纸，上述各部件相邻处交叠连接。
[0009]上述第一方面，提供一种用于同时检测胎盘生长因子（PLGF）和可溶性fms样酪氨酸激酶
‑
1（sFIt
‑
1）的检测试剂组合，该检测试剂以血液样本作为检测对象，基于双抗夹心方法对洗涤后样本中的PLGF与sFIt
‑
1进行量子点荧光检测。与现有检测方法的显著不同之处在于，本专利技术增加了洗涤步骤，通过上述洗涤剂对加样后的样本进行清洗，可以有效降低血液样本在之后层析检测过程中的非特异性结合，提升检测灵敏度。
[0010]优选的，所述血清为可采用胎牛血清、新生牛血清或小牛血清；进一步优选的方案中，采用新生牛血清，包括但不限于高级新生牛血清、标准新生牛血清或普通新生牛血清。
[0011]优选的，所述聚乙二醇的分子量为5000~25000，包括聚乙二醇高聚物或聚乙二醇的衍生物；具体的实例中，所述聚乙二醇可采用PEG6000、PEG8000或PEG20000。
[0012]优选的，所述非离子型表面活性剂选自S17,S18,S19,S21,S22,S24中的一种或几种的组合；进一步优选的，所述非离子型表面活性剂为S17。
[0013]优选的，所述抑菌剂为ProClin300（CAS No. 96118
‑
96
‑
6）。
[0014]另外，所述洗涤剂还应当保持与血液样本相似的渗透环境，采用生理盐水和/或缓冲液作为溶剂；所述缓冲液的一个具体实例如HEPES缓冲液；上述优选的技术方案的一种实施方式中，所述洗涤剂的配方如下：0.07~0.13M的HEPES缓冲液（pH7~8）中，含有0.8~1.0%NaCl，3~6%新生牛血清，1~2 % PEG20000，0.3~0.6%S17和0.03~0.06% Proclin300。
[0015]本专利技术第一方面提供的试纸条为一种免疫层析试纸条，考虑到全血样本中含有45%的血细胞，血细胞（绝大部分为红细胞）若破裂或者流过视窗会对检测结果产生影响，使检测值出现较大偏差，因此，在试纸本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激酶
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1的检测试剂组合，其特征在于，所述检测试剂组合包括用于清洗待测血液样本的洗涤剂及试纸条；所述洗涤剂中包括血清、聚乙二醇、非离子型表面活性剂及抑菌剂；所述试纸条包括底板，底板上覆盖层析结构，所述层析结构按照样品流动方向依次设置滤血膜、结合垫、检测垫和吸水纸，上述各部件相邻处交叠连接。2.如权利要求1所述用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激酶
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1的检测试剂组合，其特征在于，所述血清为新生牛血清；所述聚乙二醇的分子量为5000~25000，包括聚乙二醇高聚物或聚乙二醇的衍生物；所述非离子型表面活性剂选自S17,S18,S19,S21,S22,S24中的一种或几种的组合；所述抑菌剂为ProClin300。3.如权利要求2所述用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激酶
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1的检测试剂组合，其特征在于，所述洗涤剂的配方如下：0.07~0.13M的HEPES缓冲液中，含有0.8~1.0%NaCl，3~6%新生牛血清，1~2% PEG20000，0.3~0.6%S17和0.03~0.06% Proclin300。4.如权利要求1所述用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激酶
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1的检测试剂组合，其特征在于，所述滤血膜中包含抗红细胞抗体，用于过滤掉血液样本中的红细胞；所述滤血膜喷涂含RBC预处理液的方式进行制备，所述预处理的配方如下：0.07~0.13M的HEPES缓冲液中，含有0.8~1.0%NaCl、1~3%酪蛋白钠、1~3% PVP
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K30、0.4~1.0 %S17和0.03~0.06% Proclin300、140~160μg/mL抗红细胞抗体。5.如权利要求1所述用于胎盘生长因子和可溶性fms样酪氨酸激...

【专利技术属性】
技术研发人员：何长锋，谢煜萍，王学士，
申请(专利权)人：山东子峰生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：