一种脂联素试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种脂联素试剂盒及其制备方法，该脂联素试剂盒包括R1试剂、R2试剂，其中R1试剂包括：缓冲液A 25～100mM、稳定剂A 3～11g/L、防腐剂A 2～4g/L、反应增强剂2～7g/L、表面活性剂2～5g/L；R2试剂包括：缓冲液B 25～100mM、稳定剂B 3～11g/L、防腐剂B 2～4g/L、偶联有脂联素抗体的胶乳微球1～2mg/L。本发明专利技术的脂联素试剂盒灵敏度高、稳定性好、准确性高、线性范围宽，冷藏保存有效期18个月以上，操作简便，可用于临床检测，对肥胖、糖尿病、冠心病、心血管疾病等疾病进行防治。血管疾病等疾病进行防治。血管疾病等疾病进行防治。

【技术实现步骤摘要】
一种脂联素试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于生物检测
，尤其是一种脂联素试剂盒及其制备方法和应用。

技术介绍

[0002]脂联素(Adiponectin/ADPN)是脂肪细胞分泌的一种内源性生物活性多肽或蛋白质。对人体的研究发现，脂联素水平能预示II型糖尿病和冠心病的发展，并在临床试验表现出抗糖尿病、抗动脉粥样和炎症的潜力。
[0003]人类脂联素含244个氨基酸，包括3个区域：氨基末端信号序列、胶原结构域和羧基末端的球形结构域。脂联素以三聚体、六聚体和高分子量聚合体三种亚型存在于血液中。临床研究显示，脂联素与II型糖尿病、冠心病、胰岛素抵抗密切相关，具有抗动脉粥样硬化形成、抗炎症和血管损伤后抗内膜增生的特性。根据国际糖尿病联会的资料，目前全球有超过3亿8千万的糖尿病患者，并且有46％的患者直到发生严重的糖尿病并发症之后才被发现。脂联素试剂盒可以检测人血中的脂联素水平，可以为糖尿病等疾病提供有价值的信息，实现对糖尿病早发现、早治疗，从而降低糖尿病的发病率。
[0004]目前，脂联素的检测方法主要有化学发光法、酶联免疫分析法、放射免疫法和胶乳免疫比浊法。化学发光法虽然灵敏简便，但是选择性差，会对一个系列的化合物做出反应，而不是针对单个的某一化合物，特异性较差。酶联免疫分析法灵敏度较高，但是操作繁琐，且难易实现自动化检测。放射免疫法优点是灵敏度较高，但是有着操作繁琐、耗时长、易受人为操作和外界因素干扰、自动化程度低等缺点，且放射性标记物会对操作者产生危害，对环境造成污染。胶乳增强免疫比浊法由于快速简便，精密度高、易于自动化、适于大批量标本同时检测等优点，被人广泛应用。然而，现有的胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒仍存在一些缺陷有待改进，如有的试剂盒灵敏度不够，有的则是稳定性不够，或者是生产效率低，成本大。
[0005]为了促进脂联素检测方法的推广应用，有必要研究一种准确度高、灵敏度高、稳定性好的脂联素试剂盒。

技术实现思路

[0006]为解决上述问题，本专利技术提供一种脂联素试剂盒及其制备方法，该脂联素试剂盒具有准确度高、灵敏度高、稳定性好、生产效率高等优点。
[0007]为实现上述目的，本专利技术提供的方案如下：
[0008]一种脂联素试剂盒，包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，
[0009]所述的R1试剂包括：缓冲液A25～100mM、稳定剂A3～11g/L、防腐剂A2～4g/L、反应增强剂2～7g/L、表面活性剂2～5g/L；
[0010]所述的R2试剂包括：缓冲液B 25～100mM、稳定剂B 3～11g/L、防腐剂B 2～4g/L、偶联有脂联素抗体的胶乳微球1～2mg/L。
[0011]具体地，所述的缓冲液A和缓冲液B为甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液中的
两种或三种结合。
[0012]优选地，所述的缓冲液A和缓冲液B为甘氨酸缓冲液10～50mM，MES缓冲液5～25mM，MOPS缓冲液10～25mM。
[0013]优选地，所述的稳定剂A和稳定剂B成分为：牛血清白蛋白1～3g/L、酪蛋白1～3g/L、甘露醇1～5g/L。
[0014]优选地，所述的防腐剂A和防腐剂B成分为：叠氮钠1～2g/L、Proclin300 1～2g/L。
[0015]优选地，所述R1试剂中的反应增强剂成分为：聚乙二醇6000 1～4g/L、聚乙二醇80001～3g/L。
[0016]优选地，所述R1试剂中的表面活性剂成分为：Tween20 1～2.5g/L、Triton
‑
X100 1～2.5g/L。
[0017]优选地，所述的脂联素抗体为人脂联素单克隆抗体，抗体的加入量为0.1～0.5mg/L。
[0018]优选地，所述的偶联有脂联素抗体的胶乳微球的粒径为240nm。
[0019]具体地，所述脂联素试剂盒的制备方法为：
[0020]1)R1试剂的制备：按照脂联素R1试剂的组分含量，将各组分物质于同一容器中混合，混合均匀后，制得脂联素R1试剂；
[0021]2)R2试剂的制备：
[0022]①
活化：取缓冲液B总量的40
‑
60％，加入胶乳微球，在37℃摇床搅拌10
‑
15min混匀，再加入偶联剂，继续搅拌30
‑
35min混匀，分别得到活化胶乳微球；
[0023]②
标记：向活化胶乳微球中边搅拌边加入脂联素抗体，在37℃摇床搅拌60
‑
120min混匀，得到偶联有脂联素抗体的胶乳微球；
[0024]③
封闭：向偶联有脂联素抗体的胶乳微球加入防腐剂B和稳定剂B，充分溶解混合40
‑
60min进行封闭，即得封闭胶乳微球；
[0025]④
向封闭胶乳微球中加入剩余的缓冲液B，混合均匀，即得R2试剂；
[0026]3)将R1试剂以及R2试剂单独分装，密封保存，即得脂联素试剂盒。
[0027]具体地，所述的偶联剂为1
‑
乙基
‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺，偶联剂的加入量为0.1
‑
0.2g/L。添加偶联剂可将乳胶微球进行活化，提高欧联反应的效率。
[0028]本专利技术使用的脂联素单克隆抗体外购于南京立顶生物科技有限公司，胶乳微球外购于日本JSR公司，粒径为240nm。
[0029]本专利技术具有以下有益效果：
[0030]1、本专利技术的脂联素试剂盒灵敏度高、稳定性好、准确性高、线性范围宽，2～8℃条件下保存有效期18个月以上，操作简便，可用于临床检测，对肥胖、糖尿病、冠心病、心血管疾病等疾病的防治具有积极的意义。
[0031]2、本专利技术的缓冲液体系由甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液按照科学合理的配比组成，既能够有效的起到体系的缓冲能力，又能够较好的保护产品中的组分不受外界环境的影响，提高产品的稳定性和准确性。
[0032]3、本专利技术的脂联素试剂盒最低检出限为0.33mg/L，灵敏度可达5mg/L，线性范围为2
‑
40mg/L，具有灵活、普适的特点。
[0033]4、本专利技术的稳定剂由牛血清白蛋、酪蛋白、甘露醇配比组成，可有效提高试剂盒体
系的稳定性。稳定性作为体外诊断试剂保持产品安全有效的重要指标，对产品的生产、运输、保存和使用等过程具有重要意义。
[0034]5、本专利技术R1试剂中加入由聚乙二醇6000、聚乙二醇8000配比组成的反应增强剂，可有效提高产品检测的灵敏度。
[0035]6、本专利技术通过化学交联的方法，将脂联素抗体与胶乳微球进行偶联，结合率高，原料损耗低，且稳定性高，可有效提高检测灵敏度。
附图说明
[0036]图1是本专利技术实施例1与对比例1的脂联素试剂盒的稳定性趋势图。
[0037]图2是本专利技术实施例1与对本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种脂联素试剂盒，其特征在于：包括R1试剂、R2试剂，溶剂为纯化水；其中，所述的R1试剂包括：缓冲液A 25～100mM、稳定剂A 3～11g/L、防腐剂A 2～4g/L、反应增强剂2～7g/L、表面活性剂2～5g/L；所述的R2试剂包括：缓冲液B 25～100mM、稳定剂B 3～11g/L、防腐剂B 2～4g/L、偶联有脂联素抗体的胶乳微球1～2mg/L。2.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液A和缓冲液B为甘氨酸缓冲液、MES缓冲液、MOPS缓冲液中的两种或三种结合。3.根据权利要求2所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的缓冲液A和缓冲液B成分为：甘氨酸缓冲液10～50mM，MES缓冲液5～25mM，MOPS缓冲液10～25mM。4.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的稳定剂A和稳定剂B成分为：牛血清白蛋白1～3g/L、酪蛋白1～3g/L、甘露醇1～5g/L。5.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的防腐剂A和防腐剂B成分为：叠氮钠1～2g/L、Proclin300 1～2g/L。6.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述R1试剂中的反应增强剂成分为：聚乙二醇6000 1～4g/L、聚乙二醇8000 1～3g/L。7.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述R1试剂中的表面活性剂成分为：Tween20 1～2.5g/L、Triton
‑
X100 1～2.5g/L。8.根据权利要求1所述的脂联素试剂盒，其特征在于：所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：李名星，张设熙，韦佳志，黄多全，何彩玉，余思柳，
申请(专利权)人：广西康柏莱科技有限公司，
类型：发明
国别省市：