一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，属于体外诊断试剂技术领域。该试剂盒包括以下试剂R1和试剂R2，其中试剂R1的组分包括：Tris缓冲液、NaCl、PEG

【技术实现步骤摘要】
一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒及其制备方法


[0001]本专利技术属于体外诊断试剂
，具体涉及一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒及其制备方法。

技术介绍

[0002]类风湿关节炎(RA)是一种以侵蚀性关节炎为主要表现的全身性自身免疫病。病理表现为关节滑膜的慢性炎症、血管翳形成，并出现关节的软骨和骨破坏，若不能及时诊断及时正规治疗，最终可导致关节畸形和功能丧失。
[0003]抗环瓜氨酸肽抗体的检测对类风湿关节炎的诊断有高度的特异性，并可用于RA的早期诊断。目前认为抗CCP抗体对RA诊断敏感性为50～78％，特异性为96％，早期患者阳性率可达80％。此外，抗CCP抗体不仅是RA早期诊断诊断指标，还是鉴别侵袭性和非侵袭性RA的灵敏指标。其抗体阳性患者比抗体阴性的患者易发展更严重的关节骨质破坏。该抗体可先于疾病的临床表现出现，可以出现在RA典型临床症状的数年前，阳性比类风湿因子(RF)出现早，特异性比RF高，与联合RF检测，可以提高RA的实验室检出率。
[0004]目前临床主要的抗环瓜氨酸肽抗体测定方法有酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法、免疫比浊法等。其中，ELISA法检测一般采用手工操作，操作繁琐效率低，且人为影响因素大，结果只能定性或不精确地定量；化学发光法操作步骤多，测试成本高，且发射强度依赖于各种环境因素，在不同的环境体系中，发射强度和时间的曲线有较大的差别，所以必须严格控制外界的各种因素；免疫比浊法操作简单，抗干扰性更强，且可测线性范围也更宽，能利用普通的生化分析仪进行检测，容易实现自动化，可在各级基层医疗机构普及和应用。
[0005]胶乳增强免疫比浊法是将待测物质相对应的抗体或抗原包被在胶乳颗粒上，使抗原抗体结合物的体积增大，光通过之后，透射光和散射光的强度变化更为显著，从而在免疫比浊法的基础上提高试验的敏感性。
[0006]目前的胶乳增强免疫比浊法试剂盒测定环瓜氨酸肽抗体还存在以下问题：(1)试剂稳定性较差：由于试剂中封闭剂选用不合理，不能增加胶乳包被抗环瓜氨酸肽抗体的悬浮稳定性，相互聚集成大物质，试剂易产生沉淀；(2)试剂特异性不高，由于CCP抗原尺寸非常小，使得CCP抗体很难识别到，如果胶乳微球粒径选用不合理，导致大多数试剂不能很好的检出抗环瓜氨酸肽抗体。(3)与类风湿关节炎诊断阴阳符合率不高：由于大多试剂特异性不高，导致不能很好与类风湿因子项目的试剂检测结果一致。
[0007]基于以上所述的现有技术存在的问题，本专利技术提供一种特异性高、灵敏度高且稳定性好的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒。

技术实现思路

[0008]针对以上问题，本专利技术提供一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，该试剂盒稳定性高、灵敏度高、线性范围宽、准确度好和稳定性良好，抗干扰性强，使用方便。
[0009]本专利技术通过以下技术方案实现：
[0010]一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
[0011]所述试剂R1的各组分及含量包括：Tris缓冲液5
‑
10g/L、NaCl 5
‑
10g/L、PEG
‑
60000.1
‑
0.5％、ProClin300 0.1％；
[0012]所述试剂R2的各组分及含量包括：CCP致敏胶乳颗粒0.1
‑
0.5g/L、ProClin300 0.1％、MES缓冲液10
‑
25mM、硼酸
‑
硼砂缓冲液10
‑
150mmol/L、封闭剂1
‑
10ml/L、蔗糖50
‑
100g/L。
[0013]试剂R1和试剂R2中的ProClin300作为防腐剂，防止微生物的繁殖对试剂盒的品质的影响，抑制微生物的生长。
[0014]作为技术方案的优选，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；
[0015]所述试剂R1的各组分及含量包括：Tris缓冲液7g/L、NaCl 9g/L、PEG
‑
6000 0.2％、ProClin300 0.1％；
[0016]所述试剂R2的各组分及含量包括：CCP致敏胶乳颗粒0.25g/L、ProClin300 0.1％、MES缓冲液15mM、硼酸
‑
硼砂缓冲液20mmol/L、封闭剂8ml/L、蔗糖60g/L。
[0017]作为技术方案的优选，所述试剂R2中的封闭剂由三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白按照质量比0.5
‑
2:1:1
‑
4复配而成。
[0018]作为技术方案的优选，所述试剂R2中的封闭剂由三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白按照质量比1.5:1:2复配而成。
[0019]作为技术方案的优选，所述试剂R2中的CCP致敏胶乳颗粒为粒径为68nm、123nm和273nm的羧基胶乳颗粒。
[0020]作为技术方案的优选，所述试剂R2中的68nm羧基胶乳颗粒、123nm羧基胶乳颗粒和273nm羧基胶乳颗粒的体积比为3:2:1。
[0021]一种如上所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：
[0022]试剂R1的配制：
[0023](1)取纯化水，加入试剂R1的配制容器中，在搅拌条件下依次加入NaCl、Tris、PEG
‑
6000和ProClin300，搅拌至完全溶解；
[0024](2)测步骤(1)完全溶解后的溶液的pH值，用盐酸或氢氧化钠调节PH值至7.50
±
0.30；
[0025](3)定容：加入纯化水至规定配制量后，进行搅拌，搅拌时避免产生泡沫；
[0026](4)过滤：将步骤(3)定容后的溶液用滤膜过滤至另一清洁可密封加盖的贮存容器；试剂R2的配制：
[0027](1)在试剂R2的配制容器内加入CCP致敏胶乳颗粒与MES缓冲液，混匀；
[0028](2)在搅拌条件下加入NHS缓冲液与EDC缓冲液，在37℃环境下搅拌活化15
‑
20min；
[0029](3)在步骤(2)活化后的溶液中加入硼酸
‑
硼砂缓冲液，以及硼酸
‑
硼砂缓冲液与CCP抗原的混合液，在37℃环境下，于400
‑
500r/min的速度下搅拌标记3
‑
4h；
[0030](4)在步骤(3)标记后的溶液中依次加入MES缓冲液、封闭剂、蔗糖和ProClin300，于400
‑
500r/min的速度下搅拌1
‑
2h；
[0031](5)将步骤(4)搅拌结束后得到的溶液置于37℃环境下封闭23
‑
25h。
[0032]作为技术方案的优选，所述试剂R1的配制中的步骤(1)的搅拌为于400
‑
500r/min
的速度下搅拌30
‑
40min至完全溶解。本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1的各组分及含量包括：Tris缓冲液5
‑
10g/L、NaCl 5
‑
10g/L、PEG
‑
60000.1
‑
0.5％、ProClin300 0.1％；所述试剂R2的各组分及含量包括：CCP致敏胶乳颗粒0.1
‑
0.5g/L、ProClin300 0.1％、MES缓冲液10
‑
25mM、硼酸
‑
硼砂缓冲液10
‑
150mmol/L、封闭剂1
‑
10ml/L、蔗糖50
‑
100g/L。2.根据权利要求1所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述试剂R1的各组分及含量包括：Tris缓冲液7g/L、NaCl 9g/L、PEG
‑
6000 0.2％、ProClin300 0.1％；所述试剂R2的各组分及含量包括：CCP致敏胶乳颗粒0.25g/L、ProClin300 0.1％、MES缓冲液15mM、硼酸
‑
硼砂缓冲液20mmol/L、封闭剂8ml/L、蔗糖60g/L。3.根据权利要求2所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的封闭剂由三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白按照质量比0.5
‑
2:1:1
‑
4复配而成。4.根据权利要求3所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的封闭剂由三乙醇胺、甘氨酸和酪蛋白按照质量比1.5:1:2复配而成。5.根据权利要求2所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的CCP致敏胶乳颗粒为粒径为68nm、123nm和273nm的羧基胶乳颗粒。6.根据权利要求5所述的抗环瓜氨酸肽抗体检测试剂盒，其特征在于，所述试剂R2中的68nm羧基胶乳颗粒、123nm羧基胶乳颗粒和273nm羧基胶乳颗粒的体积比为3:2:1。7.一种如...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦佳志，李名星，张设熙，方运清，莫智林，杨添源，
申请(专利权)人：广西康柏莱科技有限公司，
类型：发明
国别省市：