【技术实现步骤摘要】
一种免疫球蛋白G4检测试剂盒及其制备方法
[0001]本专利技术属于体外诊断
，具体涉及一种免疫球蛋白G4检测试剂盒及其制备方法。
技术介绍
[0002]人免疫球蛋白G4是免疫球蛋白G的一个亚型，占总免疫球蛋白G的4％
‑
5％，相比于其他免疫球蛋白G亚型，免疫球蛋白G4浓度含量较低。但免疫球蛋白G4升高或降低，可见于多种免疫系统疾病。免疫球蛋白G4相关疾病是近年来新发现的一类病因不明的慢性、进行性炎症伴纤维化和硬化的疾病，主要特征为血清免疫球蛋白G4水平显著增高；受累器官组织由于大量淋巴细胞和免疫球蛋白G4阳性浆细胞浸润伴纤维化而发生肿大或结节/硬化性病变。在免疫球蛋白G4相关性疾病诊治中国专家共识(2021版)中明确指出血清免疫球蛋白G4升高是免疫球蛋白G4
‑
RD诊断和病情评估的重要指标。因此，血清免疫球蛋白G4浓度的检测具有一定的临床价值。
[0003]目前免疫球蛋白G4的测定方法有酶联免疫吸附法、荧光免疫层析法、免疫层析胶体金法、化学发光法、免疫比浊法、胶乳增强免疫比...
【技术保护点】
【技术特征摘要】 【专利技术属性】
1.一种免疫球蛋白G4检测试剂盒，其特征在于，由第一试剂R1和第二试剂R2组成：所述第一试剂R1，包括浓度为25～200mmol/L的两性离子缓冲液、5～10g/L无机盐、0.5w%～5w%表面活性剂1以及0.05w%～1w%防腐剂；所述第二试剂R2，包括浓度为25～200mmol/L两性离子缓冲液、5～10g/L无机盐、50～100g/L蔗糖、50～100g/L海藻糖、0.5w%～5w%表面活性剂2、1w%～5w%的被载体分子标记的偶联有免疫球蛋白G4单克隆抗体的胶乳微球、1w%～5w%封闭剂以及0.05w%～1w%防腐剂。2.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G4检测试剂盒，其特征在于，所述两性离子缓冲液为2
‑
（N
‑
吗啉代）乙磺酸、2[(2
‑
氨基
‑
2氧代乙基)氨基]乙磺酸、3
‑
(N
‑
吗啉代)丙磺酸、N
‑
(2
‑
羟乙基)哌嚓
‑
N/
‑
(2
‑
乙磺酸)中的一种或几种；所述无机盐为氯化钠或/和氯化钾；所述防腐剂为叠氮化钠或者ProClin
‑
300；所述封闭剂选自牛血清白蛋白、酪蛋白、吐温
‑
20中的一种或几种；所述表面活性剂1为吐温
‑
20、曲拉通X
‑
100、曲拉通X
‑
405或司盘
‑
20中的一种或几种；所述表面活性剂2为聚氧乙烯醚Brij58、月桂酰聚果糖、非离子表面活性剂A60中的一种或几种。3.根据权利要求1所述的免疫球蛋白G4检测试剂盒，其特征在于，所述胶乳微球为粒径为50～100nm、100～300nm的羧基聚苯乙烯胶乳微球的一种或几种，所述免疫球蛋白G4单克隆抗体在所述胶乳微球上的载量为（5～50）:1；所述载体分子为牛血清白蛋白、聚赖氨酸或天冬氨酸的一种或几种。4.根据权利要求1～3任意一项所述的免疫球蛋白G4检测试剂盒，其特征在于，所述第一试剂R1和第二试剂R2的pH为6.0～8.0。5.根据权利要求4所述的免疫球蛋白G4检测试剂盒的制备方法，其特征在于，分别在两种不同粒径的胶乳微球表面偶联载体分子，再与还原后的抗体进行定向偶联，生成所述被载体分子标记的偶联有免疫球蛋白G4单克隆抗体的胶乳微球。6.根据权利要求5所述的免疫球蛋白G4检测试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，取定量的所述两性离子缓冲液溶于纯化水，然后加入所述无机盐和防腐剂；搅拌均匀后，调节pH值到6.0～8.0，然后加入所述表面活性剂1，搅拌溶匀后定容，作为第一试剂R1；S2，（1）将定量的所述缓冲液溶于纯化水，再加入所述无机盐、蔗糖、海藻糖和防腐剂；搅拌均匀后，调节pH值到6.0～8.0，然后加入所述表面活性剂2，搅拌溶匀后定容，得到胶乳微球稀释液；（2）取粒径为50～100nm的所述胶乳微球，溶于活化缓冲液中；再依次加入1
‑
（3
‑
二甲氨基丙基）
‑3‑
乙基碳二亚胺盐酸盐和N
‑
羟基丁二酰亚胺，室温振荡反应0.5～1h；再离心去除上清液，用交联缓冲液重悬沉淀物，获得活化胶乳微球；（3）向所述活化胶乳微球中加入所述载体分子，室温振荡反应1～4h；加入封闭剂，继续反应0.5～1h；用所述交联缓冲液洗涤并离心去除上清液，用所述胶乳微球稀释液重悬沉淀物，获得胶乳微球
‑
载体分子复合物，置于2～8℃下保存备用；S3，取所述胶乳微球
技术研发人员：王琦，史小娟，肖禄生，彭珊，
申请(专利权)人：上海科华生物工程股份有限公司，
类型：发明
国别省市：
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