猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒及其应用制造技术

本发明专利技术公开一种猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒及其应用，所述猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒包括检测板、标准品以及酶标二抗，其中，所述检测板包被有抗CSFV

【技术实现步骤摘要】
猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒及其应用


[0001]本专利技术涉及动物病毒性疫病监测和诊断试剂
，特别涉及一种猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒及其应用。

技术介绍

[0002]猪瘟是由猪瘟病毒(Classical swine fever virus，CSFV)引起的一种高度接触性传染病，对养猪业危害严重，是世界粮农组织和各国政府严密监控和检疫的主要传染病之一。CSFV属黄病毒科瘟病毒属成员，是有囊膜的单股正链RNA病毒，基因组大小约12.3kb，仅含有一个大的开放性阅读框架(ORF)。猪感染CSFV后主要产生针对结构蛋白E2的抗体。E2蛋白是病毒诱导机体产生中和抗体的主要保护性抗原，同时也是病毒吸附进入敏感细胞的必需蛋白。
[0003]猪瘟病毒的检测对于猪瘟的诊断具有特别重要的意义。目前猪瘟病毒检测方法主要有应用病毒分离鉴定、免疫组织化学法、反转录
‑
聚合酶链式反应 (RT
‑
PCR)和ELISA检测等。以上检测方法均为定性检测病原，目前未见有定量检测猪瘟病毒抗原蛋白的相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术的主要目的是提出一种猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒及其应用，旨在提出一种定量检测猪瘟病毒抗原蛋白的猪瘟病毒E2抗原ELISA 检测试剂盒。
[0005]为实现上述目的，本专利技术提出一种猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒，包括检测板、标准品以及酶标二抗；
[0006]其中，所述检测板包被有抗CSFV
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E2蛋白多克隆抗体，所述标准品为 CSFV
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E2蛋白标准品，所述酶标二抗为酶标记的抗CSFV
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E2蛋白单克隆抗体。
[0007]可选地，所述CSFV
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E2蛋白标准品包括样品稀释液和纯化的重组CSFV
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E2蛋白，所述CSFV
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E2蛋白标准品中，所述纯化的重组CSFV
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E2蛋白的浓度为10μg/mL。
[0008]可选地，所述检测板中，所述抗CSFV
‑
E2蛋白多克隆抗体的包被浓度为 0.1～0.5μg/孔。
[0009]可选地，所述检测板中，所述抗CSFV
‑
E2蛋白多克隆抗体的制备方法包括以下步骤：
[0010]将纯化的重组CSFV
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E2蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，采血分离血清后纯化，得抗CSFV
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E2蛋白多克隆抗体。
[0011]可选地，所述酶标记的抗CSFV
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E2蛋白单克隆抗体为辣根过氧化物酶标记的抗CSFV
‑
E2蛋白单克隆抗体。
[0012]可选地，所述抗CSFV
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E2蛋白单克隆抗体是将纯化的重组CSFV
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E2蛋白作为抗原免疫B/c小鼠后得到。
[0013]可选地，所述猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒还包括样品稀释液，所述样品稀释液为含有BSA和NaN3的磷酸盐缓冲液；和/或，
[0014]所述猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒还包括浓缩洗涤液，所述浓缩洗涤液为含有吐温
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20的PBS溶液。
[0015]可选地，所述猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒还包括底物液，所述底物液包括A液和B液，所述A液和所述B液的体积比为1：99，其中，所述A液为3,3
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5,5
’‑
四甲基联苯胺溶液，所述B液为含有双氧水的乙酸钠缓冲溶液；和/或，
[0016]所述猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒还包括终止液，所述终止液为硫酸溶液。
[0017]本专利技术还提出一种如上所述的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒在定量检测猪瘟病毒E2抗原上的应用。
[0018]本专利技术还提出一种如上所述的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒在检测猪瘟病毒E2蛋白亚单位疫苗的猪瘟病毒E2抗原的含量上的应用。
[0019]本专利技术提供的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒中由于配备了CSFV
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E2 蛋白标准品，使得待检样品中猪瘟病毒E2蛋白的含量可以被准确检测到，猪瘟病毒E2蛋白的最低检出量为40ng/mL；而通过对猪瘟病毒E2蛋白抗原的定量，大大促进了抗原生产在线监测、疫苗工艺优化、疫苗质量评估和疫苗效力检验；本猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒采用抗CSFV
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E2蛋白多克隆抗体包被来制备检测板，酶标记的抗CSFV
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E2蛋白单克隆抗体作为二抗，从而实现双抗夹心法ELISA检测猪瘟病毒E2抗原，不仅具有ELISA检测方法敏感、特异、操作简单、省时省力、稳定性好和适合于批量检测的优点，还克服了抗原空间构象问题所致的特异性低和二抗问题所致的灵敏度低等缺陷，显著提高了检测的特异性和灵敏度。
具体实施方式
[0020]为使本专利技术实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本专利技术实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本专利技术的一部分实施例，而不是全部的实施例。
[0021]需要说明的是，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。另外，全文中出现的“和/或”的含义，包括三个并列的方案，以“A和/或B”为例，包括A方案、或B方案、或A和B同时满足的方案。此外，各个实施例之间的技术方案可以相互结合，但是必须是以本领域普通技术人员能够实现为基础，当技术方案的结合出现相互矛盾或无法实现时应当认为这种技术方案的结合不存在，也不在本专利技术要求的保护范围之内。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。
[0022]猪瘟病毒的检测对于猪瘟的诊断具有特别重要的意义。目前猪瘟病毒检测方法主要有应用病毒分离鉴定、免疫组织化学法、反转录
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聚合酶链式反应 (RT
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PCR)和ELISA检测等。以上检测方法均为定性检测病原，目前未见有定量检测猪瘟病毒抗原蛋白的相关报道。
[0023]鉴于此，本专利技术提出一种猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒，包括检测板、标准品以及酶标二抗，其中，所述检测板包被有抗CSFV
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E2蛋白多克隆抗体，所述标准品为CSFV
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E2蛋白标准品，所述酶标二抗为酶标记的抗 CSFV
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E2蛋白单克隆抗体。
[0024]本专利技术提供的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒中由于配备了CSFV
‑
E 2蛋白标准品，使得待检样品中猪瘟病毒E2蛋白的含量可以被准确检测到，猪瘟病毒E2蛋白的最低检
出量为40ng/mL；而通过对猪瘟病毒E2蛋白抗原的定量，大大促进本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒，其特征在于，包括检测板、标准品以及酶标二抗；其中，所述检测板包被有抗CSFV
‑
E2蛋白多克隆抗体，所述标准品为CSFV
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E2蛋白标准品，所述酶标二抗为酶标记的抗CSFV
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E2蛋白单克隆抗体。2.如权利要求1所述的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述CSFV
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E2蛋白标准品包括样品稀释液和纯化的重组CSFV
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E2蛋白，所述CSFV
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E2蛋白标准品中，所述纯化的重组CSFV
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E2蛋白的浓度为10μg/mL。3.如权利要求1所述的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述检测板中，所述抗CSFV
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E2蛋白多克隆抗体的包被浓度为0.1～0.5μg/孔。4.如权利要求1所述的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述检测板中，所述抗CSFV
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E2蛋白多克隆抗体的制备方法包括以下步骤：将纯化的重组CSFV
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E2蛋白作为抗原免疫新西兰大白兔，采血分离血清后纯化，得抗CSFV
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E2蛋白多克隆抗体。5.如权利要求1所述的猪瘟病毒E2抗原ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述酶标记的抗CSFV
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E2蛋白单...

【专利技术属性】
技术研发人员：李建，张敏，石宝兰，漆世华，薛霜，朱薇，谢红玲，饶清宜，郑良益，秦红刚，李婷婷，
申请(专利权)人：国药集团动物保健股份有限公司，
类型：发明
国别省市：