本发明专利技术公开了一种定量检测生物样品中抗体含量的方法。实验证明，采用该方法定量检测生物样品中抗体含量，批内变异为3.41％—16.39％，批间变异为3.99％—11.07％，批内准确度在83.5％—117.25％，具有较好的准确度和精密度性能；且能够抵抗干扰物的干扰，样品中含有不同浓度的干扰物依然能够准确的定量检测样品的浓度；同时对于超高浓度的样品，未经稀释直接检测，检测结果大于标准曲线的定量上限，未表现出钩状效应，将样品进行不同倍数稀释，使其浓度在标准曲线定量范围内，检测结果显示不同稀释样品均符合准确度要求。由此可见，本发明专利技术提供的方法可以准确检测生物样品中抗体含量。本发明专利技术具有重要的应用价值。本发明专利技术具有重要的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
一种定量检测生物样品中抗体含量的方法
[0001]本专利技术属于生物
，具体涉及一种定量检测生物样品中抗体含量的方法。
技术介绍
[0002]抗体是机体在抗原的刺激下产生的能够和抗原结合的一类免疫球蛋白。抗体的检测方法众多，除传统的沉淀反应、凝集试验、补体结合试验外，标记免疫测定(如酶联免疫测定、放射免疫测定、荧光免疫测定、发光免疫测定等)已成为主要的免疫测定技术。抗体检测过程中最常见的挑战是抗原对抗体检测的干扰。
[0003]现有的抗药抗体检测方法包括ELISA
‑
桥法、ELISA
‑
间接法、电化学发光法等，但各有优缺点。ELISA
‑
桥法包被药物，用标记的抗原检测。该方法的优点是能检测各类抗体亚型，无种属特异性，可高通量检测；缺点是不易检测到低亲和力的抗体，包被或标记时可能会掩盖或改变药物的抗原表位，易受药物本身的干扰。ELISA
‑
间接法是将抗原直接固定在固相载体上，然后与被测的抗体结合，形成抗原抗体复合物，再利用二抗作为检测试剂进行分析。该方法简单、快速、灵敏度高、便于标准化，但其受抗原的干扰严重，在抗原浓度高的样品中的应用受到限制。电化学发光法源于电化学法和化学发光法，不仅可以应用于所有的免疫测定，还可用于DNA/RNA探针检测。该方法的优点是灵敏度高、可检测各种抗体亚型、无种属特异性、高通量，可使用高浓度基质，检测表面积大和信号稳定；缺点是需制备2种标记物(生物素和TAG)、标记物分子的表位可能会变化或标记过程会改变分子，所用试剂通用性差。由此可见，现有的抗药抗体检测方法普遍存在如下缺点：灵敏度偏低，抗原耐受水平低，靶点干扰无法消除，检测成本高等。
技术实现思路
[0004]本专利技术的目的是如何定量检测生物样品中抗体含量。
[0005]本专利技术首先保护一种定量检测生物样品中抗体含量的方法，包括步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)：
[0006]所述步骤(a)依次包括如下步骤：
[0007](a
‑
1)酸处理生物样品，获得游离的抗体；
[0008](a
‑
2)用抗原捕获(a
‑
1)获得的抗体；
[0009](a
‑
3)完成步骤(a
‑
2)后，酸处理，获得捕获的抗体；
[0010](a
‑
4)完成步骤(a
‑
3)后，用捕获试剂捕获抗体，之后使用标记抗原检测信号强度；
[0011]所述步骤(b)包括如下步骤：
[0012](b
‑
1)酸处理抗体标准溶液，获得游离的抗体；
[0013](b
‑
2)完成步骤(b
‑
1)后，用抗原捕获(b
‑
1)获得的抗体；
[0014](b
‑
3)完成步骤(b
‑
2)后，酸处理，获得捕获的抗体；
[0015](b
‑
4)完成步骤(b
‑
3)后，用捕获试剂捕获抗体，之后使用标记抗原检测信号强度；
[0016](b
‑
5)完成步骤(b
‑
4)后，根据抗体标准溶液中各个抗体浓度和相应信号强度绘制
标准曲线；
[0017]所述步骤(c)：将所述步骤(a
‑
4)得到的信号强度代入所述标准曲线，得到生物样品中抗体含量；
[0018]所述捕获试剂可为Protein A、Protein G、Protein L和所述抗体的抗体中的至少一种；
[0019]所述酸处理可为pH2.0
‑
6.0(如pH2.0
‑
3.0、pH3.0
‑
4.0、pH4.0
‑
5.0、pH5.0
‑
6.0、pH2.0、pH3.0、pH4.0、pH5.0或pH6.0)的乙酸溶液、磷酸溶液、柠檬酸溶液或盐酸溶液进行处理。
[0020]上述方法中，所述用捕获试剂捕获抗体时，捕获试剂的浓度可为0.01
‑
100μg/mL(如0.01
‑
1μg/mL、1
‑
5μg/mL、5
‑
50μg/mL、50
‑
100μg/mL、0.01μg/mL、1μg/mL、5μg/mL、50μg/mL或100μg/mL)。所述捕获试剂的溶剂可为pH7.2、10mM PBS缓冲液。
[0021]上述方法中，所述用捕获试剂捕获抗体时捕获试剂需要进行包被；包被条件可为2
‑
8℃(如2
‑
4℃、4
‑
8℃、2℃、4℃或8℃)孵育12
‑
72h(如12
‑
48h、48
‑
72h、12h、48h或72h)或20
‑
27℃(如20
‑
24℃、24
‑
27℃、20℃、24℃或27℃)孵育0.5
‑
6h(如0.5
‑
2h、2
‑
6h、0.5h、2h或6h)。
[0022]上述方法中，所述酸处理具体可为浓度为300mM的乙酸溶液(溶剂为pH3.0、10mM PBS缓冲液)进行处理。
[0023]上述方法中，所述酸处理的条件可为20
‑
60℃(如20
‑
30℃、30
‑
37℃、37
‑
50℃、50
‑
60℃、20℃、30℃、37℃、50℃或60℃)处理5
‑
60min(如5
‑
10min、10
‑
20min、20
‑
30min、30
‑
60min、5min、10min、20min、30min或60min)。
[0024]上述方法中，所述抗原可为蛋白、多肽、核酸、抗体片段、碳水化合物、脂或小分子化合物。
[0025]上述方法中，进行步骤(a
‑
2)或(b
‑
2)时，抗原需要固定化。抗原固定化的方法如下：取96孔板，每孔加入抗原，2
‑
8℃过夜；然后洗涤所述96孔板，拍干；之后向所述96孔板中每孔加入200μL 1％(m/v)BSA水溶液，37℃、600rpm处理60
±
5min；再洗涤所述96孔板，拍干。
[0026]上述方法中，进行步骤(a
‑
2)或(b
‑
2)时，捕获的条件可为20
‑
60℃(如20
‑
30℃、30
‑
37℃、37
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50℃、50
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60℃、20℃本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一种定量检测生物样品中抗体含量的方法，包括步骤(a)、步骤(b)和步骤(c)：所述步骤(a)依次包括如下步骤：(a
‑
1)酸处理生物样品，获得游离的抗体；(a
‑
2)用抗原捕获(a
‑
1)获得的抗体；(a
‑
3)完成步骤(a
‑
2)后，酸处理，获得捕获的抗体；(a
‑
4)完成步骤(a
‑
3)后，用捕获试剂捕获抗体，之后使用标记抗原检测信号强度；所述步骤(b)包括如下步骤：(b
‑
1)酸处理抗体标准溶液，获得游离的抗体；(b
‑
2)完成步骤(b
‑
1)后，用抗原捕获(b
‑
1)获得的抗体；(b
‑
3)完成步骤(b
‑
2)后，酸处理，获得捕获的抗体；(b
‑
4)完成步骤(b
‑
3)后，用捕获试剂捕获抗体，之后使用标记抗原检测信号强度；(b
‑
5)完成步骤(b
‑
4)后，根据抗体标准溶液中各个抗体浓度和相应信号强度绘制标准曲线；所述步骤(c)：将所述步骤(a
‑
4)得到的信号强度代入所述标准曲线，得到生物样品中抗体含量；所述捕获试剂为Protein A、Protein G、Protein L和所述抗体的抗体中的至少一种；所述酸处理为pH2.0
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6.0的乙酸溶液、磷酸溶液、柠檬酸溶液或盐酸溶液进行处理。2.根据...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵家根，举晓霞，王颖，
申请(专利权)人：北京阳光德美医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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