一种快速分离磷脂各组分的方法技术

本发明专利技术公开了一种快速分离磷脂各组分的方法。所述方法采用自动过柱机，以普通磷脂为原料，将磷脂溶解后，装填至硅胶柱上，设置自动接收模式，依次利用流动相A洗脱出磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇，再通过流动相B洗脱出磷脂酰胆碱，然后通过流动相C洗脱出溶血磷脂酰胆碱。本发明专利技术采用自动过柱机，通过调节流动相种类、各流动相组成溶剂的比例和梯度，实现磷脂中磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和溶血磷脂酰胆碱的同时分离。酰胆碱的同时分离。

【技术实现步骤摘要】
一种快速分离磷脂各组分的方法


[0001]本专利技术属于分离纯化
，涉及一种快速分离磷脂各组分的方法。

技术介绍

[0002]磷脂常作为乳化剂用于药物制剂中，根据与3位磷酸侧链相连的X基团不同，可分为磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇等等。磷脂根据来源不同，可分为大豆来源、蛋黄来源等。以天然产物为原料制备磷脂文献报道较多，但是得到的产品纯度大都较低，并且主要是磷脂酰胆碱，含量约70%。目前通过提纯的方式可以同时实现磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和溶血磷脂酰胆碱的制备无报道。
[0003]柱层析法是目前分离纯化磷脂各组分的常用方法，此方法的重点在于固定相吸附剂和洗脱剂的选择，常用的固定相吸附剂有：三氧化二铝、硅胶等，洗脱剂有石油醚、氯仿、二氯甲烷、低碳醇或混合溶剂等。柱层析法可分离磷脂间组分。中国专利申请CN114644649A公开了一种采用两次柱层析的方式制备溶血磷脂酰胆碱的工艺，该工艺可以制备溶血磷脂酰胆碱含量为98%以上的产品，但是磷脂酰胆碱和含量仅为70%，且无其他组分的分离。
[0004]中国专利申请CN110563759A以提取磷脂酰胆碱的残渣为原料，通过柱层析的工艺得到高纯磷脂酰乙醇胺，但是无纯化磷脂酰肌醇和溶血磷脂酰胆碱的工艺。且柱层析法耗时费力，批次间差异大，难以程序化。过柱机是一种自动化的过柱机器，可对流动相准确计算和定量，可以极大地解决柱层析操作繁复的问题。

技术实现思路

[0005]为解决现有的柱层析操作繁复、难以重复的问题，本专利技术提供一种快速分离磷脂各组分的方法。该方法使用自动过柱机同时分离磷脂各组分。
[0006]本专利技术所述的一种快速分离磷脂各组分的方法，包括以下步骤：采用自动过柱机，使用少量含氯溶剂将磷脂溶解，将样品装填至硅胶柱内，依次利用流动相A、流动相B和流动相C进行梯度洗脱，设置自动接收模式，用自动部分收集器收集流出液，期间采用205nm紫外波长实时检测，梯度洗脱的具体方式为：先通过流动相A洗脱出磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇，再通过流动相B洗脱出磷脂酰胆碱，然后通过流动相C洗脱出溶血磷脂酰胆碱，其中流动相A为乙醇:水=90~95:5~10，流动相B为二氯甲烷:甲醇:水=64~68:28~32:4，流动相C为二氯甲烷:甲醇:水=50:44:6。
[0007]本专利技术中，各流动相中溶剂之间的比例为体积比。
[0008]进一步的，所述的含氯溶剂为二氯甲烷或三氯甲烷。
[0009]进一步的，所述的含氯溶剂与磷脂的体积质量比为5:0.5~1，mL：g。
[0010]进一步的，所述的磷脂为大豆磷脂或蛋黄卵磷脂。
[0011]与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：本专利技术使用自动过柱机，通过调节流动相的种类、各流动相组成溶剂的比例和梯度，实现了磷脂酰胆碱、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇和溶血磷脂酰胆碱的同时分离，且分离
得到的各组分的含量均大于95%。
具体实施方式
[0012]下面结合具体实施例对本专利技术作进一步详述。
[0013]实施例1使用5mL二氯甲烷将1.0g大豆磷脂溶解，将样品装填至硅胶柱内，开启自动过柱机，紫外检测波长为205nm，设置梯度洗脱模式，流动相A（1000mL）为乙醇：水=95:5，流动相B（1000mL）为二氯甲烷：甲醇：水=64:32:4，流动相C（1500mL）为二氯甲烷：甲醇：水=50:44:6，设置自动接收模式，洗脱样品，A相将磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇分别洗脱出来，B相洗脱磷脂酰胆碱，C相洗脱溶血磷脂酰胆碱。所得组分送检HPLC，其中，磷脂酰胆碱含量99%、磷脂酰乙醇胺98%、磷脂酰肌醇95%和溶血磷脂酰胆碱99%。
[0014]实施例2使用5mL二氯甲烷将1.0 g大豆磷脂溶解，将样品装填至硅胶柱内，开启自动过柱机，紫外检测波长为205nm，设置梯度洗脱模式，流动相A（1000mL）为乙醇：水=90:10，流动相B（1000mL）为二氯甲烷：甲醇：水=68:28:4，流动相C（1500mL）为二氯甲烷：甲醇：水=50:44:6，设置自动接收模式，洗脱样品，A相将磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇分别洗脱出来，B相洗脱磷脂酰胆碱，C相洗脱溶血磷脂酰胆碱。所得组分送检HPLC，其中，磷脂酰胆碱含量99%、磷脂酰乙醇胺99%、磷脂酰肌醇96%和溶血磷脂酰胆碱99%。
[0015]实施例3使用5mL三氯甲烷将0.5g大豆磷脂溶解，将样品装填至硅胶柱内，开启自动过柱机，紫外检测波长为205nm，设置梯度洗脱模式，流动相A（800mL）为乙醇：水=95:5，流动相B（1000mL）为二氯甲烷：甲醇：水=68:28:4，流动相C（1000mL）为二氯甲烷：甲醇：水=50:44:6，设置自动接收模式，洗脱样品，A相将磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇分别洗脱出来，B相洗脱磷脂酰胆碱，C相洗脱溶血磷脂酰胆碱。所得组分送检HPLC，其中，磷脂酰胆碱含量99%、磷脂酰乙醇胺99%、磷脂酰肌醇98%和溶血磷脂酰胆碱99%。
[0016]对比例1使用5mL三氯甲烷将0.5g大豆磷脂溶解，将样品装填至硅胶柱内，开启自动过柱机，紫外检测波长为205nm，设置梯度洗脱模式，流动相A（1000mL）为二氯甲烷：甲醇：水=68：28:4，流动相B（1000mL）为二氯甲烷：甲醇：水=50:44:6，设置自动接收模式，洗脱样品，A相将磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇洗脱出来，但是无法实现分离，可以实现磷脂酰胆碱的分离，B相洗脱溶血磷脂酰胆碱，所得组分送检HPLC，其中，磷脂酰胆碱含量99%、磷脂酰乙醇胺70%、磷脂酰肌醇24%和溶血磷脂酰胆碱99%。
[0017]对比例2使用5mL二氯甲烷将1.0 g大豆磷脂溶解，将样品装填至硅胶柱内，开启自动过柱机，紫外检测波长为205nm，设置梯度洗脱模式，流动相A（1000mL）为乙醇：水=90:10，流动相B（1000mL）为二氯甲烷：甲醇：水=68：28:4，设置自动接收模式，洗脱样品，A相将磷脂酰乙醇胺和磷脂酰肌醇分别洗脱出来，B相洗脱磷脂酰胆碱，其中溶血磷脂酰胆碱未洗脱出来。所得组分送检HPLC，其中，磷脂酰胆碱含量99%、磷脂酰乙醇胺99%、磷脂酰肌醇96%。
本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种快速分离磷脂各组分的方法，其特征在于，包括以下步骤：采用自动过柱机，使用少量含氯溶剂将磷脂溶解，将样品装填至硅胶柱内，依次利用流动相A、流动相B和流动相C进行梯度洗脱，设置自动接收模式，用自动部分收集器收集流出液，期间采用205nm紫外波长实时检测，梯度洗脱的具体方式为：先通过流动相A洗脱出磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇，再通过流动相B洗脱出磷脂酰胆碱，然后通过流动相C洗脱出溶血磷脂酰胆碱，其中流动相A...

【专利技术属性】
技术研发人员：胡承，李欢，郭如鑫，高正松，
申请(专利权)人：南京威尔药业科技有限公司，
类型：发明
国别省市：