用于快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的引物组及检测方法技术

本发明专利技术提出一种用于快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的引物组及检测方法，属于生物工程领域，能够解决常规的基因定量检测方法存在检测通量不高、检测效率低、耗时较长等的技术问题。该检测方法案包括总RNA的提取、逆转录反应制备cDNA模板、多重PCR反应、毛细血管电泳、产物片段分析，其中，针对工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因为包含Bap2

【技术实现步骤摘要】
NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57以及SEQ ID NO.59所示。
[0009]本专利技术还提供了一种用于快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的逆转录反应引物组，其特征在于，所述引物组针对工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因Bap2
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sc，Bap2
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sb，Bap3
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sc，Bap3
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sb，Gnp1
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sc，Gnp1
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sb，Agp1
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sc，Agp1
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sb，Tat1
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sc，Tat1
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sb，Tat2
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sc，Tat2
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sb，Dip5
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sc，Mup1
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sc，Mup1
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sb，Hip1
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sc，Hip1
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sb，Lyp1
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sc，Lyp1
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sb，Alp1
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sc，Alp1
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sb，Gap1
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sc，Gap1
‑
sb，Put4
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sc，Mep1
>‑
sc，Mep1
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sb，Mep2
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sc，Mep2
‑
sb，Mep3
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sc，Mep3
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sb设计得到30条引物，分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.58以及SEQ ID NO.60。
[0010]本专利技术又提供了一种快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的方法，包括以下步骤：
[0011]在NCBI数据库中查找酿酒酵母的氮代谢相关基因，通过BLASTn序列比对，锁定工业巴氏酵母T1
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1基因组中的同源基因序列信息，即工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因；
[0012]根据所述同源基因序列信息，分别对
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Sc和
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Sb来源的同一基因进行CLUSTAL W比对寻找非同源区段进行引物设计，得到逆转录反应引物组以及多重PCR反应引物组；
[0013]工业巴氏酵母总RNA提取；
[0014]以提取得到的总RNA作为模板，所述逆转录反应引物组作为引物进行逆转录反应制备cDNA模板；
[0015]以逆转录反应产物作为模板，所述多重PCR反应引物组作为引物进行多重PCR反应，并对多重PRC反应产物进行电泳及片段分析。
[0016]在一实施方式中，所述氮代谢相关基因包括参与氨基酸代谢调控基因、氮源代谢中NCR途径、SPS感应系统及TOR信号传导途径以及参与氮源转运的通透酶基因。
[0017]在一实施方式中，所述工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因为包含Bap2
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sc，Bap2
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sb，Bap3
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sc，Bap3
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sb，Gnp1
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sc，Gnp1
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sb，Agp1
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sc，Agp1
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sb，Tat1
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sc，Tat1
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sb，Tat2
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sc，Tat2
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sb，Dip5
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sc，Mup1
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sc，Mup1
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sb，Hip1
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sc，Hip1
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sb，Lyp1
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sc，Lyp1
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sb，Alp1
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sc，Alp1
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sb，Gap1
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sc，Gap1
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sb，Put4
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sc，Mep1
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sc，Mep1
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sb，Mep2
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sc，Mep2
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sb，Mep3
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sc以及Mep3
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sb在内的30个基因。
[0018]在一实施方式中，还包括作为内参基因的工业巴氏酵母β
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actin基因ACT1
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Sc、ACT1
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Sb，逆转录反应制备cDNA模板中内参基因引物如SEQ ID NO.62、SEQ ID NO.64所示；多重PCR反应中内参基因引物如SEQ ID NO.61、SEQ ID NO.63所示。
[0019]在一实施方式中，所述多重PCR反应的反应体系中，总反应体系为20μL，其中，25mM MgCl
2 4.0μL、5
×
PCR缓冲液4.0μL、DNA聚合酶0.7μL、多重PCR反应引物组2μL、cDNA模板9.3μL；
[0020]反应条件为：
[0021]S1、95℃预变性10分钟；
[0022]S2、94℃变性30秒；退火温度55℃，30秒；
[0023]S3、68
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70℃延伸1分钟，循环35次；
[0024]S4、4℃保存，其中，S2和S3步骤共计35个循环。
[0025]在一实施方式中，所述逆转录反应引物组中SEQ ID NO.2的使用浓度为500nM、SEQ ID NO.4的使用浓度为500nM、SEQ ID NO.6的使用浓度为500nM、SEQ ID NO.8的使用浓度为500nM、SEQ ID NO.10的使用浓度为15.625nM、SEQ ID NO.12的使用浓度为125nM、SEQ ID NO.14的使用浓度为500nM、SEQ ID NO.16的使用浓度为15.625nM、SEQ ID NO.18的使用浓度为500nM、SE本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.用于快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的多重PCR反应引物组，其特征在于，所述引物组针对工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因Bap2
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sc，Bap2
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sb，Bap3
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sc，Bap3
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sb，Gnp1
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sc，Gnp1
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sb，Agp1
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sc，Agp1
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sb，Tat1
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sc，Tat1
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sb，Tat2
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sc，Tat2
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sb，Dip5
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sc，Mup1
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sc，Mup1
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sb，Hip1
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sc，Hip1
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sb，Lyp1
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sc，Lyp1
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sb，Alp1
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sc，Alp1
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sb，Gap1
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sc，Gap1
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sb，Put4
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sc，，Mep1
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sc，Mep1
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sb，Mep2
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sc，Mep2
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sb，Mep3
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sc，Mep3
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sb设计得到30条引物，分别如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.5、SEQ ID NO.7、SEQ ID NO.9、SEQ ID NO.11、SEQ ID NO.13、SEQ ID NO.15、SEQ ID NO.17、SEQ ID NO.19、SEQ ID NO.21、SEQ ID NO.23、SEQ ID NO.25、SEQ ID NO.27、SEQ ID NO.29、SEQ ID NO.31、SEQ ID NO.33、SEQ ID NO.35、SEQ ID NO.37、SEQ ID NO.39、SEQ ID NO.41、SEQ ID NO.43、SEQ ID NO.45、SEQ ID NO.47、SEQ ID NO.49、SEQ ID NO.51、SEQ ID NO.53、SEQ ID NO.55、SEQ ID NO.57以及SEQ ID NO.59所示。2.用于快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的逆转录反应引物组，其特征在于，所述引物组针对工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因Bap2
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sc，Bap2
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sb，Bap3
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sc，Bap3
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sb，Gnp1
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sc，Gnp1
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sb，Agp1
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sc，Agp1
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sb，Tat1
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sc，Tat1
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sb，Tat2
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sc，Tat2
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sb，Dip5
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sc，Mup1
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sc，Mup1
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sb，Hip1
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sc，Hip1
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sb，Lyp1
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sc，Lyp1
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sb，Alp1
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sc，Alp1
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sb，Gap1
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sc，Gap1
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sb，Put4
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sc，Mep1
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sc，Mep1
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sb，Mep2
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sc，Mep2
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sb，Mep3
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sc，Mep3
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sb设计得到30条引物，分别如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.6、SEQ ID NO.8、SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.14、SEQ ID NO.16、SEQ ID NO.18、SEQ ID NO.20、SEQ ID NO.22、SEQ ID NO.24、SEQ ID NO.26、SEQ ID NO.28、SEQ ID NO.30、SEQ ID NO.32、SEQ ID NO.34、SEQ ID NO.36、SEQ ID NO.38、SEQ ID NO.40、SEQ ID NO.42、SEQ ID NO.44、SEQ ID NO.46、SEQ ID NO.48、SEQ ID NO.50、SEQ ID NO.52、SEQ ID NO.54、SEQ ID NO.56、SEQ ID NO.58以及SEQ ID NO.60所示。3.快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的方法，其特征在于，包括以下步骤：在NCBI数据库中查找酿酒酵母的氮代谢相关基因，通过BLASTn序列比对，锁定工业巴氏酵母T1
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1基因组中的同源基因序列信息，即工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因；根据所述同源基因序列信息，分别对
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Sc和
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Sb来源的同一基因进行CLUSTAL W比对寻找非同源区段进行引物设计，得到如权利要求2所述的逆转录反应引物组以及如权利要求1所述的多重PCR反应引物组；工业巴氏酵母总RNA提取；以提取得到的总RNA作为模板，所述逆转录反应引物组作为引物进行逆转录反应制备cDNA模板；以逆转录反应产物作为模板，所述多重PCR反应引物组作为引物进行多重PCR反应，并对多重PRC反应产物进行电泳及片段分析。4.根据权利要求3所述的快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的方法，其特征在于，所述氮代谢相关基因包括参与氨基酸代谢调控基因、氮源代谢中NCR途径、SPS感应系统及TOR信号传导途径以及参与氮源转运的通透酶基因。5.根据权利要求3所述的快速检测工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因表达的方法，其特征在于，所述工业巴氏酵母氮代谢转运通透酶基因为包含Bap2
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sc，Bap2
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sb，Bap3
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sc，
Bap3
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sb，Gnp1
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sc，Gnp1
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sb，Agp1
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sc，Agp1
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sb，Tat1
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sc，Tat1
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sb，Tat2
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sc，Tat2
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sb，Dip5
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sc，Mup1
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sc，Mup1
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sb，Hip1
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sc，Hip1
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sb，Lyp1
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sc，Lyp1
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sb，Alp1
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sc，Alp1<...

【专利技术属性】
技术研发人员：尹花，贺扬，董建军，胡淑敏，万秀娟，赵玉祥，侯晓平，陈嵘，
申请(专利权)人：青岛啤酒股份有限公司，
类型：发明
国别省市：