IL2突变蛋白制造技术

本发明专利技术涉及IL2突变蛋白及其在治疗人疾病中的用途。中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】IL2突变蛋白
[0001]相关申请的交叉引用
[0002]本申请要求于2020年1月14日提交的第62/960,847号美国临时申请的优先权，并通过引用全文纳入本文用于所有目的。
[0003]关于政府资金的声明
[0004]在构思本公开的主题或将其付诸实施时，没有使用美国政府的资金。

技术介绍

[0005]白细胞介素2(IL
‑
2)是一种主要由活化的CD4+ T细胞产生的多能性细胞因子，其参与产生正常的免疫反应。IL
‑
2对免疫系统产生广泛的影响，在调节免疫激活、抑制和内稳态方面发挥重要作用。IL
‑
2促进激活的T淋巴细胞的增殖和扩增，增强B细胞的生长，并激活单核细胞和自然杀伤细胞。人IL
‑
2(SEQ ID NO:1)的氨基酸序列可在Genbank中找到，登录号定位为NP_000577.2。
[0006]作为免疫系统刺激剂，IL
‑
2已被用于治疗癌症和慢性病毒感染。然而，IL
‑
2的作用也与调解自身免疫和移植排斥有关。IL2治疗，特别是高剂量的IL2治疗，与人对象的显著毒性有关。因此，治疗目标是保持IL2的理想作用，同时尽量最小化相关的自身免疫或免疫抑制反应。由于其在免疫调节和疾病中的作用，寻找新的IL
‑
2类似物和变体仍然是一个活跃的研究领域。
[0007]IL
‑
2通过与三种不同的细胞表面蛋白相互作用在哺乳动物免疫细胞上发挥作用：(1)CD25(也称为IL2受体α、IL
‑
2Rα、p55)，CD122(也称为白细胞介素
‑
2受体β、IL2Rβ、IL15Rβ和p70
‑
75)和CD132(也称为白细胞介素2受体γ、IL
‑
2Rγ；或共有γ链，由其为该家族中其他多聚体受体的组分)。
[0008]CD25是55kD的多肽，其在Treg细胞中组成型表达，并在其他T细胞上诱导型表达，以反应(例如，被CD3)激活。hIL
‑
2结合至hCD25的Kd约为10
‑8M。CD25在文献中也被称为"低亲和力"的IL
‑
2受体。人CD25表达为272个氨基酸的前蛋白，其包括21个氨基酸的信号序列，翻译后被去除，以形成251个氨基酸的成熟蛋白。氨基酸22
‑
240(成熟蛋白的氨基酸1
‑
219)对应于胞外结构域。氨基酸241
‑
259(成熟蛋白的氨基酸220
‑
238)对应于跨膜结构域。氨基酸260
‑
272(成熟蛋白的氨基酸239
‑
251)对应于胞内结构域。CD25的胞内结构域相对较小(13个氨基酸)，并且没有与任何独立的信号转导活性相关。尚未观察到IL2/CD25复合物产生可检测的胞内信号转导反应。人CD25的核酸和蛋白质序列可分别在Genbank登录号NM__000417和NP_0004Q8中找到。
[0009]CD122是单通道I型跨膜蛋白。人CD122(hCD122)表达为551个氨基酸的蛋白质，前26个氨基酸包括信号序列，其在成熟的525个氨基酸的蛋白质中翻译后被裂解。氨基酸27
‑
240(成熟蛋白的氨基酸1
‑
214)对应于胞外结构域，氨基酸241
‑
265(成熟蛋白的氨基酸225
‑
239)对应于跨膜结构域，氨基酸266
‑
551(成熟蛋白的氨基酸240
‑
525)对应于胞内结构域。如本文所用，术语CD122包括CD122蛋白的天然存在的变体，其包括S57F和D365E(根据成熟的hCD122蛋白的编号)。hCD122在UniProtKB数据库中被引为条目P14784。人CD122的核酸和
蛋白质序列可分别在Genbank登录号NM_000878和NP_000869中找到。
[0010]CD132是1型细胞因子受体，被IL
‑
4、IL
‑
7、IL
‑
9、IL
‑
15和IL
‑
21的受体复合物共有，因此被称为“共有”γ链。人CD132(hCD132)表达为369个氨基酸的前蛋白，包括22个氨基酸的N
‑
末端信号序列。氨基酸23
‑
262(成熟蛋白的氨基酸1
‑
240)对应于细胞外结构域，氨基酸263
‑
283(成熟蛋白的氨基酸241
‑
262)对应于21个氨基酸的跨膜结构域，氨基酸284
‑
369(成熟蛋白的氨基酸262
‑
347)对应于胞内结构域。hCD132在UniProtKB数据库中被引为条目P31785。人CD132的核酸和蛋白质序列可分别在Genbank登录号NM_000206和NP_000197中找到。
[0011]IL2受体蛋白组合以产生两个其他IL
‑
2受体复合物：(a)“中等亲和力”IL2受体，其包括CD122和CD132(也称为IL2Rβγ)和(b)“高亲和力”IL2受体复合物，其包括CD25、CD122和CD132蛋白(也称为IL2Rαβγ”)。hIL
‑
2对于中等亲和力的CD122/CD132(IL2βγ)受体复合物的Kd约为10e
‑
9M。中等亲和力的CD122/CD132(IL2βγ)受体复合物主要在静息的T细胞和NK细胞上表达。hIL
‑
2对于高IL
‑
2亲和力受体复合物的Kd约为10e
‑
11M。大多数细胞，例如静息的T细胞，对IL
‑
2的反应性很低，因为它们只表达CD122和CD132，相对于CD25/CD122/CD132高亲和力受体复合物，其对IL
‑
2的亲和力相对较低。高亲和力受体复合物主要在诱导型表达CD25的激活的淋巴细胞和组成型表达CD25的Treg细胞上被鉴定。
[0012]鉴于IL2分子的多能性作用，及其被证明有能力调节与人疾病相关的多种细胞类型的活性，保留了天然分子的某些所需特征同时根据治疗场景将不需要的特征最小化的IL
‑
2突变蛋白将能够用于治疗人的疾病。
[0013]Garcia等(国际申请号PCT/2018/062122，2019年5月31日公开的PCT国际公开号WO 2019/104092 A1，以下称为“Garcia
‘
092”)描述了某些具有包括第18、22和126位的修饰的IL2突变蛋白，此外，其表现出对CD132的结合减弱，同时保留部分IL2活性。
[0014]本专利技术提供了具有IL
‑
2部分激动剂和拮抗剂功能的IL...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种多肽，其包括下式的氨基酸序列：(AA1)
a
‑
(AA2)
b
‑
(AA3)
c
‑
(AA4)
d
‑
(AA5)
e
‑
(AA6)
f
‑
(AA7)
g
‑
(AA8)
h
‑
(AA9)
i
‑
T10
‑
Q11
‑
L12
‑
Q13
‑
L14
‑
E15
‑
H16
‑
L17
‑
(AA18)
‑
L19
‑
D20
‑
L21
‑
(AA22)
‑
M23
‑
124
‑
L25
‑
N26
‑
G27
‑
128
‑
N29
‑
N30
‑
Y31
‑
K32
‑
N33
‑
P34
‑
(AA35)
‑
L36
‑
T37
‑
(AA38)
‑
(AA39)
‑
L40
‑
T41
‑
F42
‑
K43
‑
F44
‑
Y45
‑
M46
‑
P47
‑
K48
‑
K49
‑
A50
‑
T51
‑
E52
‑
L53
‑
K54
‑
(AA55)
‑
L56
‑
Q57
‑
C58
‑
L59
‑
E60
‑
E61
‑
E62
‑
L63
‑
K64
‑
P65
‑
L66
‑
E67
‑
E68
‑
(AA69)
‑
L70
‑
N71
‑
L72
‑
A73
‑
(AA74)
‑
S75
‑
K76
‑
N77
‑
F78
‑
H79
‑
(AA80
‑
(AA81)
‑
P82
‑
R83
‑
D84
‑
(AA85)
‑
(AA86)
‑
S87
‑
N88
‑
(AA89)
‑
N90
‑
(AA91)
‑
(AA92)
‑
V93
‑
L94
‑
E95
‑
L96
‑
(AA97)
‑
G98
‑
S99
‑
E100
‑
T101
‑
T102
‑
F103
‑
(AA104)
‑
C105
‑
E106
‑
Y107
‑
A108
‑
(AA109)
‑
E110
‑
T111
‑
A112
‑
(AA113)
‑
1114
‑
V115
‑
E116
‑
F117
‑
L118
‑
N119
‑
R120
‑
W121
‑
I122
‑
T123
‑
F124
‑
(AA125)
‑
(AA126)
‑
S127
‑
I128
‑
I129
‑
(AA130)
‑
T131
‑
L132
‑
T133其中：
·
a、b、c、d、e、f、g、h和i各自单独地选自0或1；
·
AA1是A(野生型，a＝1)或缺失(a＝0)；
·
AA2是P(野生型，b＝1)或缺失(b＝0)；
·
AA3是T(野生型，c＝1)、C、A、G、Q、E、N、D、R、K、P或缺失(c＝0)；
·
AA4是S(野生型，d＝1)或缺失(d＝0)；
·
AA5是S(野生型，e＝1)或缺失(e＝0)；
·
AA6是S(野生型，f＝1)或缺失(f＝0)；
·
AA7是T(野生型，g＝1)或缺失(g＝0)；
·
AA8是K(野生型，h＝1)或缺失(h＝0)；
·
AA9是K(野生型，i＝1)或缺失(i＝0)；
·
AA18是L(野生型)或R、L、G、M、F、E、H、W、K、Q、S、V、I、Y、H、D或T；
·
AA22是Q(野生型)或F、E、G、A、L...

【专利技术属性】
技术研发人员：J，
申请(专利权)人：辛德凯因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：