三价结合分子制造技术

本发明专利技术涉及包含第一多肽和第二多肽的三价结合分子，其中所述第一多肽包含两个结合结构域，所述第二多肽包含第三结合结构域。本发明专利技术还涉及用于药物特别是用于病症或疾病的预防、治疗或诊断的三价结合分子。治疗或诊断的三价结合分子。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】三价结合分子
[0001]本专利技术涉及包含第一多肽和第二多肽的三价结合分子，其中所述第一多肽包含两个结合结构域，所述第二多肽包含第三结合结构域。本专利技术还涉及用于药物特别是用于病症或疾病的预防、治疗或诊断的三价结合分子。

技术介绍

[0002]单克隆抗体已成为多种疾病的既定治疗方法。抗体工程通常用于调整人类治疗应用的成分和活性，包括降低产生嵌合、人源化或完全人抗体的免疫原性和修饰Fc介导的效应子功能，例如增加或消除ADCC(Presta，LG.2008，Molecular engineering and design of therapeutic antibodies.Curr Opin.Immunol.20，460
‑
470)。单克隆抗体对抗原的单个表位具有确定的特异性，因此只能针对单个靶标。然而，癌症或炎症性病症等复杂疾病通常是多因素的。这反映在疾病介导配体和受体的冗余以及信号级联之间的交互上。例如，TNF、IL
‑
1和IL
‑
6等几种促炎性细胞因子已被确定为炎症性疾病的关键因素。在癌症中，肿瘤细胞经常上调不同的促生长受体，这些受体可以独立发挥作用，也可以通过信号网络在细胞内交互。值得注意的是，获得对治疗的抗性通常与替代受体的上调以及两种受体之间的通路转换有关。因此，靶向单一抗原的单克隆抗体治疗有其局限性。
[0003]双特异性抗体和多特异性抗体在诊断和治疗方面的应用越来越受到关注(Kontermann，2012，Dual targeting strategies with bispecific antibodies，mAbs 4，182
‑
197)。双特异性抗体和多特异性抗体可以识别相同或不同抗原上的两个或更多个不同的表位(Garber K.Bispecific antibodies rise again.Nat.Rev.Drug Discov.2014；13：799
‑
801；Brinkmann&Kontermann，2017，The making of bispecific antibodies，mAbs 9，182
‑
212)。
[0004]已经开发了大量的双特异性抗体，用于将免疫效应细胞再靶向至靶细胞，以通过效应细胞的细胞毒性机制破坏靶细胞。这些双特异性抗体中的几种已经进入临床研究(Kontermann&Brinkmann，2015，mAbs 9：182
‑
212；Dahl
é
n等人，2018，Ther.Adv.Vaccines Immunother.6：3
‑
17；Yu&Wang，2019，J.Cancer Res.Clin.Oncol.145：941
‑
956)。T细胞是这种方法使用的主要效应细胞。T细胞通过T细胞受体(TCR)识别MHC呈递的肽从而在杀死靶细胞方面非常有效，其中T细胞受体(TCR)对MHC呈递的肽具有特异性。然而，由于缺乏Fc受体，正常免疫球蛋白(抗体)无法将T细胞募集至靶细胞。双特异性抗体被设计为同时结合效应细胞上的触发分子和靶细胞上的表面抗原。因此，这种类型的双特异性抗体充当介质，使效应细胞和靶细胞靠近，并通过触发细胞毒性免疫反应来激活效应细胞(Clynes&Desjarlais，2018，Annu.Rev.Med.70：437
‑
450)。对于T细胞，CD3是最常用的触发分子(Yu&Wang，2019，J.Cancer Res.Clin.Oncol.145：941
‑
956)，然而，T细胞上的其他分子如CD2、CD5、CD44、CD69、Mel14和Ly
‑
6.2C已被使用(Tutt等人，1991，Eur.J.Immunol.21：1351
‑
1358；Tita
‑
Nwa等人，2007，Cancer Immunol.Immunother.56：1911.1920；Segal等人，in Fanger，M.W.
″
Bispecific Antibodies
″
1995，MBIU RG Landes，pp 27
‑
42)。此外，这种方法也适用于其他效应细胞，例如自然杀伤细胞和粒细胞的再靶向和激活，例如通过与Fc受体
the CD137 costimulatory pathway by bispecific 5T4 x CD137 x CD137 TRIDENT molecules.AACR 2019，Abstract 3476)。尽管比Fab
‑
IgG分子小，但它也需要表达四种不同的多肽链以产生并正确组装为三价双特异性分子。
[0009]开发的其他三价双特异性分子包括i)三体(Schubert等人.，2011，mAbs 3：21
‑
30；Roskopf等人.，2016，Onoctarget 7：22579
‑
22589)，去由通过两个接头连接的三个scFv分子组成(由于高度灵活的连接，存在三个scFv的不同VH和VL结构域之间错配的风险)，ii)Fab
‑
scFv2分子(三体)(Schoonjans等人.，2000，J.Immunol.165：7050
‑
7057；Schoonjans等人.，2001，Biomol.Eng.17：193
‑
202)，其通过将scFv片段融合到Fab片段的轻链和重链的C端生成，iii)由通过对接锁定(DNL)方法连接至scFv分子的两个Fab片段组成的分子(Rossi等人.，2014，mAbs 6：381
‑
391)，和iv)由与VH
‑
CH3/VL
‑
CH3模块融合，在CH3结构域中具有knobs
‑
into
‑
holes突变以强制异二聚体化的两个相同的Fab臂组成的Tri
‑
Fabs(Dickopf等人.2019，Biol.Chem.400：343
‑
350)。
[0010]总之，目前可用的三价双特异性抗体存在以下一个或多于一个缺点：
[0011](1)他们需要产生三条或多于三条多肽链，并组装为双特异性分子，
[0012](2)他们很大(＞150kDa)，
[0013](3)它们缺乏便于通过亲和层析纯化的Fc区，
[0014](4)由于错配导致所需的三价结合分子的产率低；和/或
[0015](5)它们缺乏刚性结构和靶分子与触发分子的结合位点之间的小距离。
[0016]鉴于现有技术的缺陷，本专利技术人建立了单链双价抗原结合多肽(scDVAP)作为构建单元以生成解决上述障碍的三价双特异性分子本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种三价结合分子，其包含：(A)包含单链双价抗原结合多肽(scDVAP)的第一多肽，其中所述scDVAP含有包含第一可变链(VC1)和第二可变链(VC2)的第一结合结构域，以及包含第三可变链(VC3)和第四可变链(VC4)的第二结合结构域，其中VC1和VC2一起形成第一抗原结合位点，VC3和VC4一起形成第二抗原结合位点，其中(i)VC1和VC4通过第一肽接头(L1)连接，VC4和VC3通过第二肽接头(L2)连接，VC3和VC2通过第三肽接头(L3)连接，或(ii)其中VC4和VC1通过第一肽接头(L1)连接，VC1和VC2通过第二肽接头(L2)连接，VC2和VC3通过第三肽接头(L3)连接，(B)含有包含第五可变链(VC5)和第六可变链(VC6)的第三结合结构域的第二多肽，其中VC5和VC6一起形成第三抗原结合位点，其中(a)三价结合分子的两个结合位点特异性结合相同或不同的抗原，所述抗原不是免疫效应细胞上的触发分子，(b)三价结合分子的仅一个结合位点针对免疫效应细胞上的触发分子，以及(c)第一多肽和第二多肽相互连接。2.根据权利要求1所述的三价结合分子，其中：(i)scDVAP的第一结合位点和第二多肽的第三结合位点特异性结合相同或不同的抗原，scDVAP的第二结合位点特异性结合免疫效应细胞上的触发分子；或(ii)scDVAP的第一结合位点和scDVAP的第二结合位点特异性结合相同或不同的抗原，第二结合模块的第三结合位点特异性结合免疫效应细胞上的触发分子。3.根据权利要求1或2所述的三价结合分子，其中可变链(VC)各自选自TCRα
‑
链可变结构域、TCRβ
‑
链可变结构域、可变轻链(V
L
)结构域和可变重链(V
H
)结构域。4.根据权利要求1至3中任一项所述的三价结合分子，其中scDVAP为单链双抗。5.根据权利要求1至4中任一项所述的三价结合分子，其中VC5和VC6由第四肽接头(L4)连接，和/或其中特异性结合抗原的两个结合位点结合相同的抗原。6.根据权利要求1至4中任一项所述的三价结合分子，其中第二多肽选自单可变重链结构域或单可变轻链结构域、scFv和Fab片段。7.根据权利要求1至6中任一项所述的三价结合分子，其中第一多肽和第二多肽通过第五肽接头(L5)、肽键、二硫键相互连接或通过一个或多于一个二聚体化结构域相互连接。8.根据权利要求7所述的三价结合分子，其中一个或多于一个二聚体化结构域选自Fc区、异二聚体化Fc区、CH1/CL、EHD2、MHD2、hetEHD2、IgG、IgD、IgA、IgM或IgE的最后的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗兰，
申请(专利权)人：斯图加特大学，
类型：发明
国别省市：