一种SLC16A2基因点突变检测引物、检测方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种SLC16A2基因点突变检测引物、检测方法及其应用，属于基因工程技术领域。本发明专利技术设计了六对SLC16A2基因扩增引物，通过提取gDNA、SLC16A2六个外显子特异性扩增、Sanger测序、序列比对，检测SLC16A2基因六个外显子上的已知突变位点和未知突变位点，本发明专利技术可提前筛查成人女性遗传AHDS(Allan

【技术实现步骤摘要】
一种SLC16A2基因点突变检测引物、检测方法及其应用


[0001]本专利技术属于基因工程
，具体地说，涉及一种SLC16A2基因点突变检测引物、检测方法及其应用。

技术介绍

[0002]AHDS(Allan
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Herndon
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Dudley syndrome)是罕见的X连锁隐性遗传病，属于遗传性痉挛性截瘫中甲状腺功能缺陷的一个亚型。临床表现复杂，主要表现为锥体束征(剪刀布态)、肌张力减退、肌肉萎缩等运动发育迟滞以及智商<30、冷漠、基本交际能力和语言永久缺失、饮食二便无法自理等智力发育迟缓，给家庭和社会带来了沉重负担。
[0003]AHDS(Allan
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Herndon
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Dudley syndrome)是以X连锁方式遗传，由SLC16A2基因突变导致(其中点突变比例为85％，拷贝数突变比例为15％)。SLC16A2基因编码一种完整的膜蛋白：单羧酸转运蛋白8(Monocarboxylate transporter 8，MCT8)，负责转运甲状腺激素。MCT8有助于细胞摄取四碘甲状腺原氨酸(T4)、三碘甲状腺原氨酸(T3)、反向三碘甲状腺原氨酸(rT3)和二碘甲状腺原氨酸(T2)。而SLC16A2基因在许多组织中表达，并且在中枢神经系统的发育中起重要作用。因此，男性SLC16A2基因突变会导致中枢性甲状腺功能减退症，并且存在严重的神经系统异常，包括整体发育迟缓，中枢性肌张力低下，痉挛性四肢瘫痪，肌张力障碍运动，眼球震颤以及视线和听力受损；在其他组织(肌肉，心脏，皮肤，骨骼，肠)中，临床表现为甲状腺激素利用率降低，并伴有外周甲状腺功能减退。另外，SLC16A2突变杂合子女性的甲状腺相关表型较轻，没有神经系统缺陷。SLC16A2突变杂合子女性虽然没有明显的临床表现，但是其长大成人一旦怀孕后，若腹中胎儿是男孩则百分之百患病，将会给家庭及社会带来沉重负担。因此，进行备孕期女性SLC16A2基因筛查可为产前诊断增加一种新的方法，对于优生优育具有重要意义。

技术实现思路

[0004]本专利技术旨在提供一种SLC16A2基因点突变检测的引物、检测方法及其应用，以解决上述
技术介绍
中的问题。通过设计特异性扩增引物，进行聚合酶链式反应(PCR)，对PCR扩增产物进行Sanger测序得到样本的gDNA序列信息，与野生基因型比对，找出SLC16A2基因突变位点，该方法能够检测SLC16A2基因第1、2、3、4、5和6号外显子中已知和未知的突变。
[0005]本专利技术采用如下技术方案：
[0006]本专利技术提供PCR引物在制备检测SLC16A2基因点突变的检测试剂盒中的应用，所述PCR引物的序列如SEQ ID NO:1
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12所示。
[0007]进一步地，如SEQ ID NO:1
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2所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第1号外显子；如SEQ ID NO:3
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4所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第2号外显子；如SEQ ID NO:5
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6所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第3号外显子；如SEQ ID NO:7
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8所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第4号外显子；如SEQ ID NO:9
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10所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第5号外显子；如SEQ ID NO:11
‑
12所示的PCR引物用于扩增
SLC16A2基因序列的第6号外显子。
[0008]本专利技术另一方面提供一种检测SLC16A2基因点突变的检测试剂盒，所述的检测试剂盒包括上述的PCR引物、PCR扩增酶及PCR扩增缓冲液。
[0009]本专利技术还提供一种检测SLC16A2基因点突变的检测方法，主要包括以下步骤：
[0010](1)从外周血中提取DNA，得到gDNA，并对其浓度和纯度进行测定；
[0011](2)将步骤(1)得到的gDNA与上述的PCR引物和PCR扩增试剂混合，经过PCR反应，扩增SLC16A2 DNA片段，并进行纯度和浓度测定；
[0012](3)通过琼脂糖凝胶电泳检测步骤(2)得到的SLC16A2 DNA片段的质量；
[0013](4)通过Sanger测序法检测步骤(2)得到的SLC16A2 DNA片段，获得样本SLC16A2基因序列；
[0014](5)将步骤(4)获得的样本SLC16A2基因序列与野生型SLC16A2基因序列比对，获得突变位点。
[0015]进一步地，步骤(1)中提取DNA过程采用QIAamp DNA Mini Kit提取试剂盒提取。
[0016]进一步地，步骤(1)中利用紫外分光光度计测量gDNA的浓度和纯度。
[0017]进一步地，步骤(2)中的PCR反应体系中正向引物和反向引物的摩尔浓度均为100～1000nM，gDNA的浓度为50～100μg/mL。
[0018]进一步地，步骤(2)中PCR扩增第1、2、3、4和5号外显子时，扩增程序为：96～100℃变性5～20秒，58～62℃退火5～10秒，70～74℃延伸10～20秒，循环30～50次，0～4℃保存。
[0019]进一步地，步骤(2)中PCR扩增第6号外显子时，扩增程序为：96～100℃变性5～20秒，53～57℃退火5～10秒，70～74℃延伸15～30秒，循环30～50次，0～4℃保存。
[0020]进一步地，步骤(3)中琼脂糖凝胶电泳所用的琼脂糖凝胶的浓度为1～2％；电泳的电压为100～150V，时间为20～30分钟。
[0021]本专利技术相对于现有技术具有的有益效果如下：
[0022]本专利技术设计和合成PCR扩增SLC16A2基因六个外显子的引物对，不仅能检测SLC16A2基因已知点突变还能检测SLC16A2未知点突变，可提前筛查成人女性遗传AHDS(Allan
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Herndon
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Dudley syndrome)的风险，为产前诊断提供新的方法，对于优生优育具有重要意义。
具体实施方式
[0023]下面结合实施例对本专利技术进行详细的说明，但本专利技术的实施方式不限于此，显而易见地，下面描述中的实施例仅是本专利技术的部分实施例，对于本领域技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，获得其他的类似的实施例均落入本专利技术的保护范围。
[0024]本专利技术实施例中若非特指，所有的设备和原料等均可从市场购得或是本行业常用的。若无特别指明，实施例采用的方法为本领域通用技术。
[0025]实施例1:
[0026]引物设计与合成：利用“PrimerPremier5”设计SLC16A2六个外显子的基因扩增引物对，具体引物序列如下：
[0027]第1号外显子的正向引物如SEQ ID NO:1所示：
[0028]5本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.PCR引物在制备检测SLC16A2基因点突变的检测试剂盒中的应用，其特征在于，所述PCR引物的序列如SEQ ID NO:1
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12所示。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，如SEQ ID NO:1
‑
2所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第1号外显子；如SEQ ID NO:3
‑
4所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第2号外显子；如SEQ ID NO:5
‑
6所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第3号外显子；如SEQ ID NO:7
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8所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第4号外显子；如SEQ ID NO:9
‑
10所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第5号外显子；如SEQ ID NO:11
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12所示的PCR引物用于扩增SLC16A2基因序列的第6号外显子。3.一种检测SLC16A2基因点突变的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包括权利要求1中所述的PCR引物、PCR扩增酶及PCR扩增缓冲液。4.一种检测SLC16A2基因点突变的检测方法，其特征在于，主要包括以下步骤：(1)从外周血中提取DNA，得到gDNA，并对其浓度和纯度进行测定；(2)将步骤(1)得到的gDNA与权利要求1中所述的PCR引物和PCR扩增试剂混合，经过PCR反应，...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘晶，阴晓琳，王亮，辛成齐，
申请(专利权)人：大连干细胞与精准医学创新研究院，
类型：发明
国别省市：