细胞分析方法技术

本发明专利技术的细胞分析方法具备：将作为受检体的细胞、金属离子的溶液及还原剂混合制作混合液的混合步骤S11；通过混合液中的还原剂的还原作用，将混合液中的金属离子还原而在支撑体上生成金属微结构，并且使细胞或源自细胞的物质附着于金属微结构的金属微结构生成步骤S12；在金属微结构生成步骤后，对支撑体进行干燥的干燥步骤S13；在干燥步骤后，向支撑体上的金属微结构照射激发光，测定通过该激发光照射而产生的拉曼散射光的光谱的测定步骤S15；及基于拉曼散射光的光谱对细胞进行分析的分析步骤S16。由此，对于作为受检体的细胞，实现了可以容易地进行利用高效率的SERS分光的分析的方法。的方法。的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】细胞分析方法


[0001]本专利技术涉及一种细胞分析方法。

技术介绍

[0002]作为对受检体进行分析的方法，已知有基于向该受检体照射激发光时所产生的拉曼散射光的光谱的方法。拉曼散射光谱反映了受检体的分子振动，因此，可以基于拉曼散射光谱的形状对受检体进行分析。但是，该分析方法通常拉曼散射的效率非常小，在受检体微量的情况下难以进行分析。由此，以前实际应用该分析方法的受检体限于矿物或高密度的塑料等物质。
[0003]另一方面，表面增强拉曼散射(Surface Enhanced Raman Scattering：SERS)分光由于大幅度提高拉曼散射效率，由此可以进行高灵敏度的测定，并且可以进行低浓度试样的分析，从而受到关注。在SERS分光中，通过满足：在照射了激发光的金属微结构中产生经过增强的电场(光子场)(第1条件)；及在该经过增强的电场到达的金属微结构的附近恒定存在受检体(第2条件)这2个主要条件，可以自受检体产生高强度的拉曼散射光。
[0004]提出有为了高效率地达成第1条件，设计纳米级尺寸的各种形状的金属微结构排列体，利用表面具备该金属微结构排列体的基板(SERS基板)，向该SERS基板滴加受检体等，从而通过SERS分光对受检体进行分析。另外，提出有利用分散有金属胶体(例如银胶体粒子、金胶体粒子)的分散液，向该金属胶体分散液中添加受检体，由此利用SERS分光对受检体进行分析。
[0005]在利用SERS基板的情况及利用金属胶体分散液的情况下，通过SERS分光对受检体进行分析均需要满足上述第2条件。即，可以获得经过增强的电场的区域取决于金属微结构在空间上有限制，在多数情况下，位于金属微结构的间隙。因此，为了也满足第2条件且高效率地产生SERS光，受检体需要存在于该受限的间隙。
[0006]为了满足第2条件，受检体需要对构成金属微结构的金属亲和性较高且容易吸附。然而，即便通过可以高效率地产生经过增强的电场的SERS基板可以满足第1条件，对构成金属微结构的金属的亲和性较低且不易吸附的受检体也无法进入金属微结构的狭窄的间隙，无法满足第2条件，因此，难以通过SERS分光对受检体进行分析。
[0007]通过利用SERS基板或金属胶体分散液进行的SERS分光对受检体进行分析需要预先准备SERS基板或金属胶体分散液。特别是在使用银(Ag)的情况下，虽然高效率地产生SERS光，但银容易氧化。如果分光测定时，在SERS基板上的银的微结构或银胶体的表面形成有氧化膜，则无法进行利用高效率的SERS分光对受检体的分析。另外，至分光测定时需要防止SERS基板或金属胶体被污染，这些操作不容易。
[0008]在专利文献1中公开有一种意图消除如上所述的现有技术所具有的问题的专利技术。该文献所公开的专利技术可以容易地进行利用高效率的SERS分光的分析。
[0009]另外，在非专利文献1中记载了使作为受检体的菌附着于金属胶体粒子进行SERS分光，由此可以获得源自菌的拉曼散射光谱。
[0010]现有技术文献
[0011]专利文献
[0012]专利文献1：日本特开2018
‑
25431号公报
[0013]非专利文献
[0014]非专利文献1：Pamela A.Mosier
‑
Boss,"Review on SERS of Bacteria",Biosensors 2017,7,51

技术实现思路

[0015]专利技术所要解决的技术问题
[0016]专利文献1所公开的专利技术可以容易地进行利用高效率的SERS分光对受检体的分析，但是作为分析对象的受检体受限，无法以包含菌等的细胞作为受检体进行分析。
[0017]非专利文献1所记载的技术使用金属胶体分散液，因此，无法高效率且容易地利用SERS分光对受检体(包含菌等的细胞)进行分析。
[0018]本专利技术的目的在于提供一种可以容易地进行利用高效率的SERS分光对作为受检体的细胞的分析的方法。
[0019]用于解决技术问题的手段
[0020]本专利技术的实施方式是一种细胞分析方法。细胞分析方法具备：(1)混合步骤，将作为受检体的细胞、金属离子的溶液及还原剂混合来制作混合液；(2)金属微结构生成步骤，通过混合液中的还原剂的还原作用，将混合液中的金属离子还原而在支撑体上生成金属微结构，并且使细胞或源自细胞的物质附着于金属微结构；(3)干燥步骤，在金属微结构生成步骤后，对支撑体进行干燥；及(4)测定步骤，在干燥步骤后，向支撑体上的金属微结构照射激发光，测定通过该激发光照射而产生的拉曼散射光的光谱。另外，也可以还具备设置在干燥步骤与测定步骤之间，对支撑体进行清洗的清洗步骤。
[0021]专利技术的效果
[0022]根据本专利技术的实施方式，对于作为受检体的细胞，可以容易地进行利用高效率的SERS分光的分析。
附图说明
[0023]图1是第1实施方式的细胞分析方法的流程图。
[0024]图2是第2实施方式的细胞分析方法的流程图。
[0025]图3是表示在各实施例的测定步骤中测定SERS光的光谱时所使用的显微分光装置1的光学系统的图。
[0026]图4是汇总各实施例中使用的试样的表。
[0027]图5是表示实施例1中获得的SERS光的光谱的图。
[0028]图6是表示实施例2中获得的SERS光的光谱的图。
[0029]图7是表示实施例3中获得的SERS光的光谱的图。
[0030]图8是表示实施例4中获得的SERS光的光谱的图。
[0031]图9是表示实施例5中获得的SERS光的光谱的图。
[0032]图10是比较例的明场图像的照片。
[0033]图11是实施例2中测定步骤时的明场图像的照片。
[0034]图12是实施例3中测定步骤时的明场图像的照片。
[0035]图13是实施例4中测定步骤时的明场图像的照片。
具体实施方式
[0036]以下，参照附图，对细胞分析方法的实施方式进行详细地说明。再者，在附图的说明中，对相同的要素标注相同的符号，省略重复说明。本专利技术并不限定于这些例示。
[0037]实施方式的细胞分析方法是将金属离子的溶液及还原剂混合制作混合液，通过该混合液中的还原剂的还原作用将混合液中的金属离子还原而在支撑体上生成金属微结构，并且使细胞或源自细胞的物质附着于该金属微结构。然后，向支撑体上的金属微结构照射激发光，测定通过该激发光的照射而产生的拉曼散射光的光谱，基于该拉曼散射光的光谱对细胞进行分析。以下，对第1及第2实施方式的细胞分析方法进行说明。
[0038]作为受检体的细胞包括原核细胞及真核细胞。原核细胞包括细菌及古细菌。真核细胞包括原生生物、植物、动物及真菌。可以为单细胞，也可以为多细胞，另外，也可以为培养细胞。源自细胞的物质为通过细胞的分解而生成的物质，例如，细胞中所包含的核酸或核酸碱基等内容物或其代谢物。
[0039]图1是本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.一种细胞分析方法，其中，具备：混合步骤，将作为受检体的细胞、金属离子的溶液及还原剂混合制作混合液；金属微结构生成步骤，通过所述混合液中的所述还原剂的还原作用，将所述混合液中的所述金属离子还原而在支撑体上生成金属微结构，并且使所述细胞或源自所述细胞的物质附着于所述金属微结构；干燥步骤，在所述金属微结构生成步骤后，对所述支撑体进行干燥；及测定...

【专利技术属性】
技术研发人员：藤原一彦，风见纱弥香，丸山芳弘，
申请(专利权)人：浜松光子学株式会社，
类型：发明
国别省市：