一组辅助选择改良烟草品种制造技术

本发明专利技术公开了一组辅助选择改良烟草品种

【技术实现步骤摘要】
一组辅助选择改良烟草品种
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K326
’
叶宽性状的SNP位点及对应KASP标记


[0001]本专利技术属于烟草遗传育种领域，涉及一组与烟草叶片宽度相关SNP位点基因型的KASP分子标记及应用。

技术介绍

[0002]普通烟草是重要的经济作物之一，主要以收获叶片为主，当前国内烟草种植面积1500万亩左右，主要推广栽培品种有云烟87、K326和红花大金元等。其中K326品种是1985年从美国引进，目前是我国种植面积第二大主栽品种，然而，在生产上K326也存在上部叶片宽度不够，使得开片不足，直接影响到烟叶上部叶的产质量。该问题受到育种家的广泛关注并期望得到解决。然而烟草叶片宽度作为典型的受多基因和环境控制的复杂性状，遗传分析表明其可能受2～3个主效基因+多基因控制，主效基因遗传率约为60.61％～90.17％，且各基因间主要以加性效应为主。利用QTL定位的方法，童治军等在两个不同烤烟组合衍生的遗传群体(红花大金元/阔叶hicks和Y3/K326)中分别定位到了12个和4个叶宽相关的QTL，主要分布在第4号、14号、17号和22号连锁群(童治军，作物学报，2012；童治军，西北植物学报，2018)。李茜(李茜，西南大学，2015)选择使用红花大金元和SWU109构建了F2群体，定位获得4个和叶宽相关QTL，全部分布在第1号、17号和23号连锁群。这些研究初步获得了一些与叶宽QTL，但是定位研究选择的主要为SSR标记，定位获得QTL区域为连锁群，并没有直接锚定到烟草基因组物理序列，且因为这些定位群体亲本之间遗传背景的差异，限制了研究结果在
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K326
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品种叶宽性状上的遗传改良。
[0003]染色体片段代换系(ChromosomeSegmentSubstitutionLines，CSSLs)因仅将受体亲本染色体的部分片段替换成为供体亲本的染色体片段，其遗传背景明确，QTL定位、遗传效应分析和功能基因挖掘准确，常被作为实现分子标记技术和作物育种链接的理想材料，已在水稻、玉米、小麦、大豆、棉花等作物挖掘重要性状关联位点研究上被广泛利用。然而，迄今为止，尚无利用烟草CSSLs挖掘烟草叶宽性状相关变异位点、开发分子标记及利用的相关报道。

技术实现思路

[0004]本专利技术要解决的技术问题是：克服现有针对烟草叶宽QTL定位研究结果的不足，利用构建的烟草染色体片段代换系材料，结合绘制的烟草单倍型图谱和烟草430K SNP芯片基因分型手段，筛选和鉴定出与烟草叶宽相关的SNP位点基因型，并开发出可便于快速、高通量基因分型的KASP标记，用于烟草叶宽性状的遗传改良。
[0005]本专利技术的技术方案是：一组辅助选择改良烟草品种
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K326
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叶宽的SNP位点，所述的SNP位点为烟草430K SNP芯片探针编号为AX
‑
117602251、AX
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117602267和AX
‑
117598761的3个位点。
[0006]具体的，这3个位点全位于中国烟草基因组计划测序红花大金元参考基因组
(V1.2)Chr09号染色体(姜自鹏，中国烟草学报，2022)，上述在烟草品种K326及窄叶组染色体片段代换系材料对应的基因型分别为“CC”、“AA”、“GG”，而在K326染色体代换系宽叶组材料的基因型分别为“AA”、“GG”和“CC”。
[0007]所述的3个SNP位点及上下游各50nt的DNA单链序列分别如SEQ ID 1、SEQ ID 2和SEQ ID 3所示。
[0008]AX
‑
117602251：
[0009]TGGCATATAGCTCCAGATACTTCTTATGAAACTTCCGCCAATCAATCCCA[C/A]CATCAGCAATAGGCTCCCCAGATGGGACAAAGTCACGAAACCACTCGCGT
[0010]AX
‑
117602267：
[0011]ATCAGTTGTCATCTATTAGAAGCTTGGTAACACTAGGGATTCGTGACGGC[A/G]TGCTCACTAATGCTGGGCTCATTATATTCAACCCTCCACCATCTATGACG
[0012]AX
‑
117598761：
[0013]TGATATCAAGTCAGAGCATGCACCTAGGAGTCCTAGCTACAGCATCTCAT[G/C]CTGTTACAACCCAGACCTTGTTTGTTGTTTACTACAAGCCGAGGTTTGTC
[0014]所述的AX
‑
117602251、AX
‑
117602267、AX
‑
117598761变异位点组成基因型选择为“AAGGCC”。
[0015]选择所述的一组辅助选择改良烟草品种
‘
K326
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叶宽的SNP位点的方法，将3个SNP位点转化为KASP标记，提供对应的KASP检测引物，所述的引物如下：
[0016]检测AX
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117602251位点KASP引物：
[0017]正向引物1FAM：
[0018]GAAGGTGACCAAGTTCATGCTACTTCCGCCAATCAATCCCAC；
[0019]正向引物1HEX：
[0020]GAAGGTCGGAGTCAACGGATTACTTCCGCCAATCAATCCCAA；
[0021]反向引物1：CGCGAGTGGTTTCGTGACTTTGTCCCATCT；
[0022]检测AX
‑
117602267位点KASP引物：
[0023]正向引物2FAM：
[0024]GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTAACACTAGGGATTCGTGACGGCA；
[0025]正向引物2HEX：
[0026]GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTAACACTAGGGATTCGTGACGGCG；
[0027]反向引物2：GAGGGTTGAATATAATGAGCCC；
[0028]检测AX
‑
117598761位点KASP引物：
[0029]正向引物3FAM：
[0030]GAAGGTGACCAAGTTCATGCTGGAGTCCTAGCTACAGCATCTCATG；正向引物3HEX：
[0031]GAAGGTCGGAGTCAACGGATTGGAGTCCTAGCTACAGCATCTCATC；反向引物3：GTAGTAAACAACAAACAAGGTC。
[0032]筛选所述的一组辅助选择改良烟草品种
‘
K326
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叶宽的SNP位点的方法，包含以下步骤：
[0033]本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一组辅助选择改良烟草品种
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K326
’
叶宽的SNP位点，其特征在于：所述的SNP位点为烟草430K SNP芯片探针编号为AX
‑
117602251、AX
‑
117602267和AX
‑
117598761的3个位点，所述的3个SNP位点及上下游各50nt的DNA单链序列DNA序列分别如SEQ ID 1、SEQ ID 2和SEQ ID 3所示。2.根据权利要求1所述的一组辅助选择改良烟草品种
‘
K326
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叶宽的SNP位点，其特征在于：所述的AX
‑
117602251、AX
‑
117602267、AX
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117598761位点基因型选择为“AAGGCC”。3.选择如权利要求1所述的一组辅助选择改良烟草品种
‘
K326
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叶宽的SNP位点的方法，其特征在于：用于选择3个SNP位点AX
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117602251、AX
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117602267和AX
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117598761转化为KASP标记，提供对应的KASP检测引物，所述的引物如下：检测AX
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117602251位点KASP引物：正向引物1FAM：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTACTTCCGCCAATCAATCCCAC；正向引物1HEX：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTACTTCCGCCAATCAATCCCAA；反向引物1：CGCGAGTGGTTTCGTGACTTTGTCCCATCT；检测AX
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117602267位点KASP引物：正向引物2FAM：GAAGGTGACCAAGTTCATGCTTAACACTAGGGATTCGTGACGGCA；正向引物2HEX：GAAGGTCGGAGTCAACGGATTTAACACTAGGGATTCGTGACGGCG；反向引物2：GAGGGTTGAATATAATGAGCCC；检测AX
‑...

【专利技术属性】
技术研发人员：余世洲，曹领改，赵会纳，雷波，张孝廉，刘杰，杨志晓，王丰，任学良，
申请(专利权)人：贵州省烟草科学研究院，
类型：发明
国别省市：